登革熱病例的標本采集和實驗室檢測課件

登革熱病例的標本采集

和實驗室檢測

1醫(yī)學ppt登革熱病例的標本采集

和實驗室檢測

1醫(yī)學ppt登革熱病例的實驗室診斷單份血清特異性IgG抗體或IgM抗體陽性急性期、恢復期血清的登革IgG抗體滴度4倍增長RT-PCR或熒光PCR檢測到登革病毒基因從急性期患者血清、腦脊液、血細胞、組織中分離到登革病毒2醫(yī)學ppt登革熱病例的實驗室診斷單份血清特異性IgG抗體或IgM抗體陽登革熱病例的標本采集3醫(yī)學ppt登革熱病例的標本采集3醫(yī)學ppt全血標本采集流程：無菌采集發(fā)病后0-5d的患者靜脈血3ml，加入到無菌干燥的采血管中，標明采樣日期和病人的姓名，立即送至實驗室分離血清全血不能冷凍；運送過程盡量減少顛簸，避免溶血，最好于24小時內(nèi)分離到血清。4醫(yī)學ppt全血標本4醫(yī)學ppt血清標本分離流程：①盡量采集病人的急性期和恢復期血清。采集時間：第一份血應在發(fā)病3天內(nèi)采集，最遲不晚于發(fā)病后7天。第二份血應在發(fā)病2～4周采集。②無菌采集患者靜脈血3ml，加入到無菌干燥的試管中，標明病人姓名、采集日期，并做好病人性別、年齡、發(fā)熱日期、出疹日期的資料登記。常溫送到實驗室分離血清。③2000rpm離心10分鐘，分離血清；如果沒有離心機，血標本應靜置，直到血清析出；④小心吸取血清，避免吸到紅細胞；在無菌條件下，移至無菌的螺口離心管中；短期（7天內(nèi)）保存置于4～8℃，長期保存于－20℃。5醫(yī)學ppt血清標本5醫(yī)學ppt腦脊液標本分離流程：標本采集應由臨床醫(yī)生完成。由腰椎穿刺無菌采集腦脊液3～5ml，放于無菌螺口離心管內(nèi)。標本采集后應立即4℃送檢。6醫(yī)學ppt腦脊液標本6醫(yī)學ppt蚊標本采集、處理流程：①采集吸過血的埃及伊蚊、白紋伊蚊或其它可疑蚊種，用10%葡萄糖液喂養(yǎng)至胃血消化完，-20℃冷凍。②按蚊種及捕獲地點分組，20-50只/組，用生理鹽水沖洗后加入1ml標本處理液，充分研磨，10000RPM，4℃，離心10min，取上清液。③-上清液于4℃作用2h,接種C6/36細胞分離病毒。-上清液分離核酸，進行RT-PCR或熒光PCR檢測登革病毒核酸。7醫(yī)學ppt蚊標本7醫(yī)學ppt標本的包裝運輸《生物安全手冊》(WHO3rdedition):運送感染性材料的基本三層包裝：內(nèi)層容器、第二層包裝、外層包裝8醫(yī)學ppt標本的包裝運輸8醫(yī)學ppt

內(nèi)層包裝：防水、防漏、貼好標簽、標本獨立包裝

第二層包裝：防水、防漏（帶吸收性材料）

外層包裝：為第二層包裝提供物理性保護、保持低溫（冰袋，4℃）

9醫(yī)學ppt

內(nèi)層包裝：防水、防漏、貼好標簽、標本獨立包裝

第二層包登革熱病例的實驗室檢測方法10醫(yī)學ppt登革熱病例的實驗室檢測方法10醫(yī)學ppt膠體金快速檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清

陽性結(jié)果必須經(jīng)病毒分離、雙份血清抗體滴度檢測或病毒核酸檢測，才能確診為登革熱病毒感染。

11醫(yī)學ppt膠體金快速檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清ELISA檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清、腦脊液ELISA原理：底物被酶高效催化成為有色產(chǎn)物，即間接放大了抗原抗體之間的免疫反應，檢測樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體IgM/IgG。12醫(yī)學pptELISA檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清C6/36細胞培養(yǎng)分離登革病毒

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿液正常C6/36病變C6/36（++）

CPE:細胞皺縮脫落、脹大成空泡、折光度增大、內(nèi)容物增多

13醫(yī)學pptC6/36細胞培養(yǎng)分離登革病毒

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻RT-PCR檢測登革病毒基因

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿液

產(chǎn)物電泳，根據(jù)條帶大小判斷目的核酸存在與否

14醫(yī)學pptRT-PCR檢測登革病毒基因

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿根據(jù)基因型不同，設計通用型、I、II、III、IV型探針，標上不同熒光基團，根據(jù)不同顏色的PCR擴增曲線進行結(jié)果判斷

實時熒光PCR檢測登革病毒基因

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿液15醫(yī)學ppt根據(jù)基因型不同，設計通用型、I、II、III、IV型探針，標謝謝！16醫(yī)學ppt謝謝！16醫(yī)學ppt此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！登革熱病例的標本采集

和實驗室檢測

18醫(yī)學ppt登革熱病例的標本采集

和實驗室檢測

1醫(yī)學ppt登革熱病例的實驗室診斷單份血清特異性IgG抗體或IgM抗體陽性急性期、恢復期血清的登革IgG抗體滴度4倍增長RT-PCR或熒光PCR檢測到登革病毒基因從急性期患者血清、腦脊液、血細胞、組織中分離到登革病毒19醫(yī)學ppt登革熱病例的實驗室診斷單份血清特異性IgG抗體或IgM抗體陽登革熱病例的標本采集20醫(yī)學ppt登革熱病例的標本采集3醫(yī)學ppt全血標本采集流程：無菌采集發(fā)病后0-5d的患者靜脈血3ml，加入到無菌干燥的采血管中，標明采樣日期和病人的姓名，立即送至實驗室分離血清全血不能冷凍；運送過程盡量減少顛簸，避免溶血，最好于24小時內(nèi)分離到血清。21醫(yī)學ppt全血標本4醫(yī)學ppt血清標本分離流程：①盡量采集病人的急性期和恢復期血清。采集時間：第一份血應在發(fā)病3天內(nèi)采集，最遲不晚于發(fā)病后7天。第二份血應在發(fā)病2～4周采集。②無菌采集患者靜脈血3ml，加入到無菌干燥的試管中，標明病人姓名、采集日期，并做好病人性別、年齡、發(fā)熱日期、出疹日期的資料登記。常溫送到實驗室分離血清。③2000rpm離心10分鐘，分離血清；如果沒有離心機，血標本應靜置，直到血清析出；④小心吸取血清，避免吸到紅細胞；在無菌條件下，移至無菌的螺口離心管中；短期（7天內(nèi)）保存置于4～8℃，長期保存于－20℃。22醫(yī)學ppt血清標本5醫(yī)學ppt腦脊液標本分離流程：標本采集應由臨床醫(yī)生完成。由腰椎穿刺無菌采集腦脊液3～5ml，放于無菌螺口離心管內(nèi)。標本采集后應立即4℃送檢。23醫(yī)學ppt腦脊液標本6醫(yī)學ppt蚊標本采集、處理流程：①采集吸過血的埃及伊蚊、白紋伊蚊或其它可疑蚊種，用10%葡萄糖液喂養(yǎng)至胃血消化完，-20℃冷凍。②按蚊種及捕獲地點分組，20-50只/組，用生理鹽水沖洗后加入1ml標本處理液，充分研磨，10000RPM，4℃，離心10min，取上清液。③-上清液于4℃作用2h,接種C6/36細胞分離病毒。-上清液分離核酸，進行RT-PCR或熒光PCR檢測登革病毒核酸。24醫(yī)學ppt蚊標本7醫(yī)學ppt標本的包裝運輸《生物安全手冊》(WHO3rdedition):運送感染性材料的基本三層包裝：內(nèi)層容器、第二層包裝、外層包裝25醫(yī)學ppt標本的包裝運輸8醫(yī)學ppt

內(nèi)層包裝：防水、防漏、貼好標簽、標本獨立包裝

第二層包裝：防水、防漏（帶吸收性材料）

外層包裝：為第二層包裝提供物理性保護、保持低溫（冰袋，4℃）

26醫(yī)學ppt

內(nèi)層包裝：防水、防漏、貼好標簽、標本獨立包裝

第二層包登革熱病例的實驗室檢測方法27醫(yī)學ppt登革熱病例的實驗室檢測方法10醫(yī)學ppt膠體金快速檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清

陽性結(jié)果必須經(jīng)病毒分離、雙份血清抗體滴度檢測或病毒核酸檢測，才能確診為登革熱病毒感染。

28醫(yī)學ppt膠體金快速檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清ELISA檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清、腦脊液ELISA原理：底物被酶高效催化成為有色產(chǎn)物，即間接放大了抗原抗體之間的免疫反應，檢測樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體IgM/IgG。29醫(yī)學pptELISA檢測登革熱特異性抗體IgM/IgG

標本類型：血清C6/36細胞培養(yǎng)分離登革病毒

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿液正常C6/36病變C6/36（++）

CPE:細胞皺縮脫落、脹大成空泡、折光度增大、內(nèi)容物增多

30醫(yī)學pptC6/36細胞培養(yǎng)分離登革病毒

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻RT-PCR檢測登革病毒基因

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿液

產(chǎn)物電泳，根據(jù)條帶大小判斷目的核酸存在與否

31醫(yī)學pptRT-PCR檢測登革病毒基因

標本類型：血清、腦脊液、蚊勻漿根據(jù)基因型不同，設計通用型、I、II、II