流式細胞術的臨床應用課件

流式細胞術的臨床應用41、實際上，我們想要的不是針對犯罪的法律，而是針對瘋狂的法律?！R克·吐溫42、法律的力量應當跟隨著公民，就像影子跟隨著身體一樣。——貝卡利亞43、法律和制度必須跟上人類思想進步?！芨ミd44、人類受制于法律，法律受制于情理。——托·富勒45、法律的制定是為了保證每一個人自由發(fā)揮自己的才能，而不是為了束縛他的才能?！_伯斯庇爾流式細胞術的臨床應用流式細胞術的臨床應用41、實際上，我們想要的不是針對犯罪的法律，而是針對瘋狂的法律。——馬克·吐溫42、法律的力量應當跟隨著公民，就像影子跟隨著身體一樣?！惪ɡ麃?3、法律和制度必須跟上人類思想進步?！芨ミd44、人類受制于法律，法律受制于情理?！小じ焕?5、法律的制定是為了保證每一個人自由發(fā)揮自己的才能，而不是為了束縛他的才能。——羅伯斯庇爾流式細胞術在臨床上的應用深圳市人民醫(yī)院臨床醫(yī)學研究中心李富榮第一部分流式細胞儀（FCM)）工作原理流式細胞術的臨床應用41、實際上，我們想要的不是針對犯罪的法1流式細胞術的臨床應用課件2流式細胞術的臨床應用課件3流式細胞術的臨床應用課件4流式細胞術的臨床應用課件5流式細胞儀的構(gòu)造及原理流式細胞儀的構(gòu)造及原理6FCM測量光信號獲取與分析散射光信號●前向散射光(FSC)----細胞大小●側(cè)向散射光（SSC)---細胞粒度（膜的粒度、核大小與粒度、胞質(zhì)數(shù)量）FSC信號越大，表明細胞體積越大；反之，則越小。SSC信號越大，表明細胞粒度越大；反之，則越小。FCM測量光信號獲取與分析散射光信號7根據(jù)FSC-SSC二維點圖，可以容易區(qū)分Lym(R3)Gran(R1)與Mono(R2)R1R2IncidentLightSourceRightAngleLightDectectoraCellComplexityForwardLightDetectoraCellSurfaceAreaR3R2R1根據(jù)FSC-SSC二維點圖，可以容易的區(qū)分出Lym(R3).Gran(R1)與Mono(R2)根據(jù)FSC-SSC二維點圖，可以容易區(qū)分Lym(R3)Gra8流式細胞術常用染料及檢測波長流式細胞術常用染料及檢測波長9流式細胞術的臨床應用課件10熒光染料的發(fā)射不同波長熒光染料的發(fā)射不同波長11DNA和RNA熒光探針的理化特性熒光探針分子量結(jié)合方式堿基特異性激發(fā)鋒（nm)發(fā)射鋒(nm)P1668嵌入無493630EB394嵌入無482616MI1069非嵌入G-C320,445575CA31183非嵌入GC320,445575HO33258624非嵌入AT343480HO33342615非嵌入AT343455DAPI350非嵌入AT5406507-AAD1270嵌入GC540655AO370嵌入(雙鏈）無492530靜電（單鏈）640PY303嵌入(雙鏈）GC>AT549-562565-574靜電（單鏈）DNA和RNA熒光探針的理化特性熒光探針分子量12細胞周期分析通過熒光探針對細胞周期進行相對DNA含量的測定，可分析細胞周期各時期的百分比，周期動力參數(shù)及DNA異倍體G1SG2GoM細胞周期分析通過熒光探針對細胞周期進行相對DNA含量的測定，13分選系統(tǒng)（Sorting)依據(jù)流式細胞術測定的細胞參數(shù)可分選所需細胞群體：●電荷式分選穩(wěn)定液流測量區(qū)液滴形成液滴充電液滴偏轉(zhuǎn)分選收集邏輯電路分選系統(tǒng)（Sorting)依據(jù)流式細胞術測定的細胞參數(shù)可分選14電荷式分選電荷式分選15通道式分選穩(wěn)定液流測量區(qū)邏輯電路捕獲管分選收集通道式分選穩(wěn)定液流測量區(qū)邏輯電路捕獲管分選收集16

第二部分流式細胞術在臨床醫(yī)學中的應用第二部分17流式細胞術的臨床應用課件18流式臨床應用淋巴細胞亞群分析Th1/Th2腫瘤學HLA-B27PNH四聚體血小板活化細胞凋亡移植免疫流式臨床應用淋巴細胞亞群分析Th1/Th2腫瘤學19流式細胞術的臨床應用課件20流式細胞術的臨床應用課件21流式細胞術的臨床應用課件22流式細胞術的臨床應用課件23流式細胞術的臨床應用課件24常用淋巴細胞亞群報告模式R常用淋巴細胞亞群R25深圳市人民醫(yī)院流式細胞術報告單模式深圳市人民醫(yī)院流式細胞術報告單模式26流式細胞術的臨床應用課件27流式細胞術的臨床應用課件28流式細胞術的臨床應用課件29流式細胞術的臨床應用課件30流式細胞術的臨床應用課件31流式細胞術的臨床應用課件32流式細胞術的臨床應用課件33流式細胞術的臨床應用課件34流式細胞術的臨床應用課件35流式細胞術的臨床應用課件36流式細胞術的臨床應用課件37流式細胞術的臨床應用課件38HLA-B27通過CD3PEvsSSC設門，圈定CD3陽性細胞（T淋巴細胞），檢測其B-27的平均熒光強度。如標本的平均熒光強度小于標準微球熒光強度則為陰性，反之為陽性。HLA-B27通過CD3PEvsSSC設門，圈定CD3陽性細39流式細胞術的臨床應用課件40

Th1/Th2細胞Th1/Th2細胞41流式細胞術的臨床應用課件42流式細胞術的臨床應用課件43流式細胞術的臨床應用課件44流式細胞術的臨床應用課件45流式細胞術的臨床應用課件46流式細胞術的臨床應用課件47

腫瘤學腫瘤學48流式細胞術的臨床應用課件49流式細胞術的臨床應用課件50流式細胞術的臨床應用課件51流式細胞術的臨床應用課件52流式細胞術的臨床應用課件53流式細胞術的臨床應用課件54流式細胞術的臨床應用課件55流式細胞術的臨床應用課件56流式細胞術的臨床應用課件57流式細胞術的臨床應用課件58流式細胞術的臨床應用課件59流式細胞術的臨床應用課件60

細胞凋亡細胞凋亡61流式細胞術的臨床應用課件62流式細胞術的臨床應用課件63流式細胞術的臨床應用課件64流式細胞術的臨床應用課件65流式細胞術的臨床應用課件66移植免疫移植免疫67流式細胞術的臨床應用課件68流式細胞術的臨床應用課件69流式細胞術的臨床應用課件70流式細胞術的臨床應用課件71流式細胞術的臨床應用課件72四聚體四聚體73Tetramer-原理內(nèi)源性抗原外源性抗原Tetramer-原理內(nèi)源性抗原外源性抗原74Tetramer-原理MHCClassI-HLA-A2Tetramer-原理MHCClassI-HLA-A275Tetramer-原理Tetramer-原理76Tetramer-原理國外醫(yī)學免疫學分冊2001；24(2):102-105Tetramer-原理國外醫(yī)學免疫學分冊2001；24(277HLAClassI限定性腫瘤抗原肽HLAClassI限定性腫瘤抗原肽78抗原特異性CTL的分析方法51Cr釋放實驗PCR法酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT)擴增特異T淋巴細胞受體Tetramer法間接法需大量的特異性CTLs作為效應細胞需體外擴增，周期長，敏感性低，費時費力難以廣泛應用敏感性高但只能用于已知TCR基因型的特異性CTLs檢測直接法敏感性高不受TCR基因型的限制有限稀釋法(LDA)用Tetramer法研究表明，外周血中僅有0.2-2.5%的CD8+細胞對CMV和EBV特異抗原特異性CTL的分析方法51Cr釋放實驗PCR法酶聯(lián)免疫斑79Tetramer法DohertyPC.Thenumbersgameforvirus-specificCD8+Tcells[J].Science,1998,280:227了解病毒特異性CTL和記憶性CTL方面的一項革命檢測病毒特異性CD8細胞的金標準(GoldStandard)Tetramer法DohertyPC.Thenumber80Tetramer-應用感染性疾病HIV-AIDS,EBV,CMV,HPV,HBV,HCV,Influenza,Measles,Malaria,TBandRSVBreast,Prostate,Melanoma,Colon,Lung,Cervical,OvarianandLeukemiaDiabetes,Lymedisease,Multiplesclerosis,Rheumatoidarthritis,AutoimmunevitiligoEBVandCMV移植自身免疫性疾病腫瘤Tetramer-應用感染性疾病HIV-AIDS,EBV,81感染性疾病Tetramer-應用-例證含有HIV-I型病毒包膜肽等三種抗原肽：HIV特異性CTL數(shù)量與血漿中RNA病毒量有明顯的負相關，而與產(chǎn)毒性感染細胞的清除率無關慢性HCV感染患者的特異性CTLs數(shù)量明顯少于急性HCV感染和已康復患者用黑色素瘤抗原誘導潛在的腫瘤特異性T細胞—用Tetramer分離，富集GVHD(移植物抗宿主反應)：受體與供體的次要組織相容性抗原(mHags)的不同引起，在骨髓移植后早期出現(xiàn)(14天內(nèi))，造成骨髓移植失敗---HLA-mHags肽四聚體監(jiān)測mHags特異性CTL，以了解對GVHD的臨床治療效果HLA-A2/pp65Tetramer監(jiān)測腎移植患者感染CMV后的免疫應答能力

移植腫瘤感染性疾病Tetramer-應用-例證含有HIV-I型病毒包82流式細胞術的臨床應用課件83流式細胞術的臨床應用課件84

第三部分定量流式細胞術第三部分85

定量流式細胞術的概述定量流式細胞術指的是對待細胞的某種生物分子的絕對計量，而不是陽性細胞的相對百分數(shù)。原理：通過檢測標準微球的熒光強度獲得標準曲線，通過標準曲線（或方程）求得待測細胞的某種生物分子的精確數(shù)值，從而反應在某種生理、病理條件下待測細胞出現(xiàn)的微細變化，對臨床疾病的研究、診斷及治療等具有重要意義。定量流式細胞術的概述定量流式細胞術指的是對待細胞的某種生物86血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit血小板表面抗原定量-PLATELETCalibrator87特點可定量與血小板相關的任何抗原(如CD41,CD61,CD42a等)免洗間接法一抗亞型為IgG1,IgG2a或IgG2b定量范圍寬(500-90,000分子/血小板)定量準確，CV值(變異系數(shù))小血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit特點可定量與血小板相關的任何抗原(如CD41,CD61,88標準曲線血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit標準曲線血小板表面抗原定量-PLATELETCalibr89結(jié)果血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit結(jié)果血小板表面抗原定量-PLATELETCalibrat90CD41/61復合物變形與Firbrinogen結(jié)合，為初期血栓形成的關鍵步驟PLATELETFibrinogenKitCD41/61復合物變形與Firbrinogen結(jié)合，為初期91應用心血管疾病(不穩(wěn)定心絞痛，心肌梗塞等)監(jiān)測抗凝集治療(如RepPro,Integrelin,Plavix,Ticlid等)檢測GPIIb/IIIa(CD41/CD61)受體Fibrinogen結(jié)合能力血液體外(invitro)活化(ADP等誘導)后，檢測Fibrinogen結(jié)合能力血小板活化狀態(tài)(exvivo)標本處理PLATELETFibrinogenKit應用心血管疾病(不穩(wěn)定心絞痛，心肌梗塞等)血液體外(inv92白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibra93特點可定量與白細胞相關的任何抗原(如CD3,CD4,CD55,CD59等)單個定量(用一個單抗，如CD28抗體定量白細胞表面CD28分子數(shù))多參數(shù)定量(如用CD8設門來定量CD8+T細胞上CD28分子數(shù))全血和分離的細胞(如細胞株等)均可間接法一抗亞型為IgG1和IgG2a定量范圍寬(1000-300,000分子/白細胞)定量準確，CV值(變異系數(shù))小白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit特點可定量與白細胞相關的任何抗原(如CD3,CD4,CD94標準曲線白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit標準曲線白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCal95結(jié)果白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit結(jié)果白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalib96BloodDendriticCellEnumerationKitDC作用：1.樹突狀細胞（dendriticcell,DC）為一群非均一性專職抗原遞呈細胞，與MHC二類分子結(jié)合向其它免疫活性細胞傳遞抗原信息。

2.骨髓樣DC（MDC）和淋巴樣DC(PDC).在誘導和調(diào)控免疫應答方式上完全不同：首先它們表達不同的抗原識別受體并對不同的抗原起作用；表達不同的細胞因子受體并對不同的細胞因子起反應，即使受到相同的抗原刺激。骨髓樣DC（MDC）與Th1效應相關,而淋巴樣DC（PDC）與Th2效應有聯(lián)系；

已經(jīng)應用的領域包括：1）SLE病人病情和療效觀察；2）AIDS病人免疫機能分析；3）病毒性肝炎病人免疫狀況研究；4）疫苗研究。BloodDendriticCellEnumerati97特點簡便、快捷、絕對計數(shù)DC亞群數(shù)/ml特點簡便、DC亞群數(shù)/ml98流式細胞術的臨床應用課件99最新技術計數(shù)血液中循環(huán)內(nèi)皮細胞的標準方法最新技術100循環(huán)內(nèi)皮細胞(CEC)增加于CELLQUANTFF-CD146急性冠狀動脈綜合征血小板減少性紫癜鐮刀細胞貧血敗血癥狼瘡腎病綜合征器官移植排斥手術創(chuàng)傷癌癥傳統(tǒng)方法顯微鏡檢，手工計數(shù)。費時，費力，無法標準化循環(huán)內(nèi)皮細胞(CEC)增加于CELLQUANTFF-CD1101新技術—新標準CELLQUANTFF-CD146免疫磁珠富集與3色流式細胞術結(jié)合僅需1mL血整個過程不到1個小時靈敏度高：1mL血中可檢測出10個循環(huán)內(nèi)皮細胞重復性好，室間差(InterlaboratoryCV)小新技術—新標準CELLQUANTFF-CD146免疫磁珠富102方法CELLQUANTFF-CD146將包被CD146單抗的鐵磁性納米顆粒(CD146FF)與1mL血孵育富集的CD146+細胞用以下試劑染色

PI(碘化丙啶)(確定有核細胞)CD45-FITC(排除WBC(白細胞)干擾)CD146-PE單抗(識別CD146抗原的另一位點)標準濃度微球(用于絕對計數(shù))流式分析(循環(huán)內(nèi)皮細胞鑒定)

有核細胞(PI+);CD45-;CD146+;前向散射角(FSC)范圍寬方法CELLQUANTFF-CD146將包被CD146單抗103CELLQUANTFF-CD146PI-CD45FITCCELLQUANTFF-CD146PI-CD45FITC104CELLQUANTFF-CD146PI-CD45FITCCELLQUANTFF-CD146PI-CD45FITC105CELLQUANTFF-CD146CELLQUANTFF-CD146106CELLQUANTFF-CD146CELLQUANTFF-CD146107CELLQUANTFF-CD146CELLQUANTFF-CD146108

第四部分

在醫(yī)學研究中的應用第四部分109優(yōu)點：1.臨床醫(yī)師進行疾病細胞免疫研究的一種好工具2.可同時進行臨床基礎研究和疾病診斷、療效評價3.可與世界研究水平同步4.臨床醫(yī)師不需親自參與試驗過程5.研究工作周期短優(yōu)點：110流式細胞術的臨床應用課件11141、學問是異常珍貴的東西，從任何源泉吸收都不可恥。——阿卜·日·法拉茲

42、只有在人群中間，才能認識自己?！聡?/p>

43、重復別人所說的話，只需要教育；而要挑戰(zhàn)別人所說的話，則需要頭腦。——瑪麗·佩蒂博恩·普爾

44、卓越的人一大優(yōu)點是：在不利與艱難的遭遇里百折不饒。——貝多芬

45、自己的飯量自己知道?！K聯(lián)41、學問是異常珍貴的東西，從任何源泉吸收都不可恥?！⒉?12流式細胞術的臨床應用41、實際上，我們想要的不是針對犯罪的法律，而是針對瘋狂的法律。——馬克·吐溫42、法律的力量應當跟隨著公民，就像影子跟隨著身體一樣。——貝卡利亞43、法律和制度必須跟上人類思想進步?！芨ミd44、人類受制于法律，法律受制于情理。——托·富勒45、法律的制定是為了保證每一個人自由發(fā)揮自己的才能，而不是為了束縛他的才能。——羅伯斯庇爾流式細胞術的臨床應用流式細胞術的臨床應用41、實際上，我們想要的不是針對犯罪的法律，而是針對瘋狂的法律?！R克·吐溫42、法律的力量應當跟隨著公民，就像影子跟隨著身體一樣?！惪ɡ麃?3、法律和制度必須跟上人類思想進步?！芨ミd44、人類受制于法律，法律受制于情理?！小じ焕?5、法律的制定是為了保證每一個人自由發(fā)揮自己的才能，而不是為了束縛他的才能?！_伯斯庇爾流式細胞術在臨床上的應用深圳市人民醫(yī)院臨床醫(yī)學研究中心李富榮第一部分流式細胞儀（FCM)）工作原理流式細胞術的臨床應用41、實際上，我們想要的不是針對犯罪的法113流式細胞術的臨床應用課件114流式細胞術的臨床應用課件115流式細胞術的臨床應用課件116流式細胞術的臨床應用課件117流式細胞儀的構(gòu)造及原理流式細胞儀的構(gòu)造及原理118FCM測量光信號獲取與分析散射光信號●前向散射光(FSC)----細胞大小●側(cè)向散射光（SSC)---細胞粒度（膜的粒度、核大小與粒度、胞質(zhì)數(shù)量）FSC信號越大，表明細胞體積越大；反之，則越小。SSC信號越大，表明細胞粒度越大；反之，則越小。FCM測量光信號獲取與分析散射光信號119根據(jù)FSC-SSC二維點圖，可以容易區(qū)分Lym(R3)Gran(R1)與Mono(R2)R1R2IncidentLightSourceRightAngleLightDectectoraCellComplexityForwardLightDetectoraCellSurfaceAreaR3R2R1根據(jù)FSC-SSC二維點圖，可以容易的區(qū)分出Lym(R3).Gran(R1)與Mono(R2)根據(jù)FSC-SSC二維點圖，可以容易區(qū)分Lym(R3)Gra120流式細胞術常用染料及檢測波長流式細胞術常用染料及檢測波長121流式細胞術的臨床應用課件122熒光染料的發(fā)射不同波長熒光染料的發(fā)射不同波長123DNA和RNA熒光探針的理化特性熒光探針分子量結(jié)合方式堿基特異性激發(fā)鋒（nm)發(fā)射鋒(nm)P1668嵌入無493630EB394嵌入無482616MI1069非嵌入G-C320,445575CA31183非嵌入GC320,445575HO33258624非嵌入AT343480HO33342615非嵌入AT343455DAPI350非嵌入AT5406507-AAD1270嵌入GC540655AO370嵌入(雙鏈）無492530靜電（單鏈）640PY303嵌入(雙鏈）GC>AT549-562565-574靜電（單鏈）DNA和RNA熒光探針的理化特性熒光探針分子量124細胞周期分析通過熒光探針對細胞周期進行相對DNA含量的測定，可分析細胞周期各時期的百分比，周期動力參數(shù)及DNA異倍體G1SG2GoM細胞周期分析通過熒光探針對細胞周期進行相對DNA含量的測定，125分選系統(tǒng)（Sorting)依據(jù)流式細胞術測定的細胞參數(shù)可分選所需細胞群體：●電荷式分選穩(wěn)定液流測量區(qū)液滴形成液滴充電液滴偏轉(zhuǎn)分選收集邏輯電路分選系統(tǒng)（Sorting)依據(jù)流式細胞術測定的細胞參數(shù)可分選126電荷式分選電荷式分選127通道式分選穩(wěn)定液流測量區(qū)邏輯電路捕獲管分選收集通道式分選穩(wěn)定液流測量區(qū)邏輯電路捕獲管分選收集128

第二部分流式細胞術在臨床醫(yī)學中的應用第二部分129流式細胞術的臨床應用課件130流式臨床應用淋巴細胞亞群分析Th1/Th2腫瘤學HLA-B27PNH四聚體血小板活化細胞凋亡移植免疫流式臨床應用淋巴細胞亞群分析Th1/Th2腫瘤學131流式細胞術的臨床應用課件132流式細胞術的臨床應用課件133流式細胞術的臨床應用課件134流式細胞術的臨床應用課件135流式細胞術的臨床應用課件136常用淋巴細胞亞群報告模式R常用淋巴細胞亞群R137深圳市人民醫(yī)院流式細胞術報告單模式深圳市人民醫(yī)院流式細胞術報告單模式138流式細胞術的臨床應用課件139流式細胞術的臨床應用課件140流式細胞術的臨床應用課件141流式細胞術的臨床應用課件142流式細胞術的臨床應用課件143流式細胞術的臨床應用課件144流式細胞術的臨床應用課件145流式細胞術的臨床應用課件146流式細胞術的臨床應用課件147流式細胞術的臨床應用課件148流式細胞術的臨床應用課件149流式細胞術的臨床應用課件150HLA-B27通過CD3PEvsSSC設門，圈定CD3陽性細胞（T淋巴細胞），檢測其B-27的平均熒光強度。如標本的平均熒光強度小于標準微球熒光強度則為陰性，反之為陽性。HLA-B27通過CD3PEvsSSC設門，圈定CD3陽性細151流式細胞術的臨床應用課件152

Th1/Th2細胞Th1/Th2細胞153流式細胞術的臨床應用課件154流式細胞術的臨床應用課件155流式細胞術的臨床應用課件156流式細胞術的臨床應用課件157流式細胞術的臨床應用課件158流式細胞術的臨床應用課件159

腫瘤學腫瘤學160流式細胞術的臨床應用課件161流式細胞術的臨床應用課件162流式細胞術的臨床應用課件163流式細胞術的臨床應用課件164流式細胞術的臨床應用課件165流式細胞術的臨床應用課件166流式細胞術的臨床應用課件167流式細胞術的臨床應用課件168流式細胞術的臨床應用課件169流式細胞術的臨床應用課件170流式細胞術的臨床應用課件171流式細胞術的臨床應用課件172

細胞凋亡細胞凋亡173流式細胞術的臨床應用課件174流式細胞術的臨床應用課件175流式細胞術的臨床應用課件176流式細胞術的臨床應用課件177流式細胞術的臨床應用課件178移植免疫移植免疫179流式細胞術的臨床應用課件180流式細胞術的臨床應用課件181流式細胞術的臨床應用課件182流式細胞術的臨床應用課件183流式細胞術的臨床應用課件184四聚體四聚體185Tetramer-原理內(nèi)源性抗原外源性抗原Tetramer-原理內(nèi)源性抗原外源性抗原186Tetramer-原理MHCClassI-HLA-A2Tetramer-原理MHCClassI-HLA-A2187Tetramer-原理Tetramer-原理188Tetramer-原理國外醫(yī)學免疫學分冊2001；24(2):102-105Tetramer-原理國外醫(yī)學免疫學分冊2001；24(2189HLAClassI限定性腫瘤抗原肽HLAClassI限定性腫瘤抗原肽190抗原特異性CTL的分析方法51Cr釋放實驗PCR法酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT)擴增特異T淋巴細胞受體Tetramer法間接法需大量的特異性CTLs作為效應細胞需體外擴增，周期長，敏感性低，費時費力難以廣泛應用敏感性高但只能用于已知TCR基因型的特異性CTLs檢測直接法敏感性高不受TCR基因型的限制有限稀釋法(LDA)用Tetramer法研究表明，外周血中僅有0.2-2.5%的CD8+細胞對CMV和EBV特異抗原特異性CTL的分析方法51Cr釋放實驗PCR法酶聯(lián)免疫斑191Tetramer法DohertyPC.Thenumbersgameforvirus-specificCD8+Tcells[J].Science,1998,280:227了解病毒特異性CTL和記憶性CTL方面的一項革命檢測病毒特異性CD8細胞的金標準(GoldStandard)Tetramer法DohertyPC.Thenumber192Tetramer-應用感染性疾病HIV-AIDS,EBV,CMV,HPV,HBV,HCV,Influenza,Measles,Malaria,TBandRSVBreast,Prostate,Melanoma,Colon,Lung,Cervical,OvarianandLeukemiaDiabetes,Lymedisease,Multiplesclerosis,Rheumatoidarthritis,AutoimmunevitiligoEBVandCMV移植自身免疫性疾病腫瘤Tetramer-應用感染性疾病HIV-AIDS,EBV,193感染性疾病Tetramer-應用-例證含有HIV-I型病毒包膜肽等三種抗原肽：HIV特異性CTL數(shù)量與血漿中RNA病毒量有明顯的負相關，而與產(chǎn)毒性感染細胞的清除率無關慢性HCV感染患者的特異性CTLs數(shù)量明顯少于急性HCV感染和已康復患者用黑色素瘤抗原誘導潛在的腫瘤特異性T細胞—用Tetramer分離，富集GVHD(移植物抗宿主反應)：受體與供體的次要組織相容性抗原(mHags)的不同引起，在骨髓移植后早期出現(xiàn)(14天內(nèi))，造成骨髓移植失敗---HLA-mHags肽四聚體監(jiān)測mHags特異性CTL，以了解對GVHD的臨床治療效果HLA-A2/pp65Tetramer監(jiān)測腎移植患者感染CMV后的免疫應答能力

移植腫瘤感染性疾病Tetramer-應用-例證含有HIV-I型病毒包194流式細胞術的臨床應用課件195流式細胞術的臨床應用課件196

第三部分定量流式細胞術第三部分197

定量流式細胞術的概述定量流式細胞術指的是對待細胞的某種生物分子的絕對計量，而不是陽性細胞的相對百分數(shù)。原理：通過檢測標準微球的熒光強度獲得標準曲線，通過標準曲線（或方程）求得待測細胞的某種生物分子的精確數(shù)值，從而反應在某種生理、病理條件下待測細胞出現(xiàn)的微細變化，對臨床疾病的研究、診斷及治療等具有重要意義。定量流式細胞術的概述定量流式細胞術指的是對待細胞的某種生物198血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit血小板表面抗原定量-PLATELETCalibrator199特點可定量與血小板相關的任何抗原(如CD41,CD61,CD42a等)免洗間接法一抗亞型為IgG1,IgG2a或IgG2b定量范圍寬(500-90,000分子/血小板)定量準確，CV值(變異系數(shù))小血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit特點可定量與血小板相關的任何抗原(如CD41,CD61,200標準曲線血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit標準曲線血小板表面抗原定量-PLATELETCalibr201結(jié)果血小板表面抗原定量-PLATELETCalibratorKit結(jié)果血小板表面抗原定量-PLATELETCalibrat202CD41/61復合物變形與Firbrinogen結(jié)合，為初期血栓形成的關鍵步驟PLATELETFibrinogenKitCD41/61復合物變形與Firbrinogen結(jié)合，為初期203應用心血管疾病(不穩(wěn)定心絞痛，心肌梗塞等)監(jiān)測抗凝集治療(如RepPro,Integrelin,Plavix,Ticlid等)檢測GPIIb/IIIa(CD41/CD61)受體Fibrinogen結(jié)合能力血液體外(invitro)活化(ADP等誘導)后，檢測Fibrinogen結(jié)合能力血小板活化狀態(tài)(exvivo)標本處理PLATELETFibrinogenKit應用心血管疾病(不穩(wěn)定心絞痛，心肌梗塞等)血液體外(inv204白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibra205特點可定量與白細胞相關的任何抗原(如CD3,CD4,CD55,CD59等)單個定量(用一個單抗，如CD28抗體定量白細胞表面CD28分子數(shù))多參數(shù)定量(如用CD8設門來定量CD8+T細胞上CD28分子數(shù))全血和分離的細胞(如細胞株等)均可間接法一抗亞型為IgG1和IgG2a定量范圍寬(1000-300,000分子/白細胞)定量準確，CV值(變異系數(shù))小白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit特點可定量與白細胞相關的任何抗原(如CD3,CD4,CD206標準曲線白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit標準曲線白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCal207結(jié)果白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalibratorKit結(jié)果白細胞表面抗原定量-CELLQUANTTMCalib208BloodDendriticCellEnumerationKitDC作用：1.樹突狀細胞（dendritic