革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件

目錄一、腸桿菌科二、弧菌科三、非發(fā)酵革蘭陰性桿菌四、其他革蘭陰性苛養(yǎng)菌目錄一、腸桿菌科1腸桿菌科革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件2第一節(jié)概述革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件3腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細(xì)菌是一大群形態(tài)、生物學(xué)性狀相似，需氧或兼性厭氧的革蘭陰性桿菌或球桿菌在自然界中廣泛分布，可棲生在人和動(dòng)物的腸道內(nèi)，多數(shù)為條件致病菌，少數(shù)為致病菌致病菌：沙門菌、志賀菌、耶爾森菌等條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等與醫(yī)學(xué)的關(guān)系分類腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細(xì)菌是一大群41）形態(tài)與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細(xì)菌，無(wú)芽孢，多數(shù)有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，少數(shù)細(xì)菌有莢膜或包膜，有致病性的菌株多數(shù)有菌毛共同特性1）形態(tài)與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細(xì)菌，無(wú)芽孢，多52）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基如血瓊脂和麥康凱培養(yǎng)基上容易生長(zhǎng)，大部分菌屬在22~35℃生長(zhǎng)良好大腸埃希菌菌落特征（血平板）大腸埃希菌菌落特征（MAC）2）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)6SS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑強(qiáng)選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌產(chǎn)酸桃紅色乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌無(wú)色乳糖不發(fā)酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖發(fā)酵中性紅呈紅色乳糖不發(fā)酵SS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）強(qiáng)選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌7EMB（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌（非致病菌）乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸伊紅結(jié)合美藍(lán)形成紫黑色金屬光澤化合物有色的乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌等（致病菌）乳糖不發(fā)酵伊紅美藍(lán)不能結(jié)合無(wú)色的乳糖不發(fā)酵菌落EMB（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養(yǎng)基大腸埃83)生化反應(yīng)

非常活潑。發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、觸酶陽(yáng)性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽(yáng)性4）抗原結(jié)構(gòu)：O抗原菌體抗原H抗原菌毛抗原表面抗原3)生化反應(yīng)非常活潑。發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、95）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應(yīng)變異、耐藥性變異6）抵抗力不強(qiáng)。加熱60℃30min既被殺死，對(duì)干燥、化學(xué)消毒劑敏感、耐低溫、耐膽鹽、煌綠（可抑制非致病菌）5）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應(yīng)變異10臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經(jīng)糞口傳播引起血流感染（二）腸道內(nèi)感染是人和動(dòng)物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等臨床意義（一）腸道外感染11微生物檢驗(yàn)KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋――微生物檢驗(yàn)KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋―12第二節(jié)埃希菌屬第二節(jié)埃希菌屬13埃希菌屬主要有5個(gè)種，1）大腸埃希菌臨床最常見2）蟑螂埃希菌3）弗格森埃希菌4）赫爾曼埃希菌5）傷口埃希菌革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件14一、生物學(xué)特性形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿狀，多數(shù)有周鞭毛和菌毛培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產(chǎn)生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數(shù)菌株可發(fā)酵乳糖，形成粉紅色菌落。在麥康凱平板上菌落呈粉紅色。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上呈有金屬光澤的紫黑色菌落。在液體培養(yǎng)基中，呈渾濁生長(zhǎng)一、生物學(xué)特性形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿狀，多數(shù)有周鞭毛和15一、生物學(xué)特性生化反應(yīng)特征：發(fā)酵多種糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣KIA產(chǎn)酸/產(chǎn)酸、產(chǎn)氣IMViC中4個(gè)試驗(yàn)的結(jié)果為＋＋――MIU中3個(gè)試驗(yàn)結(jié)果為＋＋―氧化型發(fā)酵型產(chǎn)堿型陽(yáng)性:紅色陰性:淡黃色硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)OF實(shí)驗(yàn)一、生物學(xué)特性生化反應(yīng)特征：氧化型發(fā)酵型產(chǎn)堿型陽(yáng)性:紅色陰性16※營(yíng)養(yǎng)要求高，以布氏瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，需加用適量全血或胎牛血清作為補(bǔ)充物才能生長(zhǎng)。采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.截止7點(diǎn)，該院已累計(jì)收治了7例疑似霍亂病人，病人的臨床表現(xiàn)劇烈腹瀉，先瀉后吐，無(wú)腹痛、無(wú)發(fā)熱，發(fā)病時(shí)間分別為9月18、19日?！谀c道選擇性培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)，形成微白色半透明菌落；1：結(jié)合臨床表現(xiàn)，你初步懷疑什么菌感染？主要引起泌尿系感染，發(fā)病率僅次于大腸埃希菌，醫(yī)源性感染較多見。5%，在無(wú)鹽培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等黏質(zhì)沙雷菌是細(xì)菌中最小者，可用于檢查除菌濾器的除菌效果生化反應(yīng)分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解乳糖；2、培養(yǎng)特性專性需氧，部分菌株兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高。大腸埃希菌產(chǎn)酸桃紅色乳糖發(fā)酵菌落1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染肥達(dá)試驗(yàn)：

H1:40，O1：160，PA1：20，PB<1:20。廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多種條件致病性感染。※幽門螺桿菌的傳播途徑主要是消化道，幽門螺桿局的感染可能與胃癌有關(guān)1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染屬于危害程度第二類的病原微生物一、生物學(xué)特性4.抗原構(gòu)造1)O（菌體）抗原：脂多糖，耐熱2)H（鞭毛）抗原：蛋白質(zhì)，不耐熱3)K（表面）抗原：莢膜多糖，耐熱，能阻止O抗原凝集反應(yīng)※營(yíng)養(yǎng)要求高，以布氏瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，需加用適量全血或胎牛血17一、生物學(xué)特性5.抵抗力自然狀態(tài)下較強(qiáng)。加熱60℃30min既被殺死，耐低溫，對(duì)常用化學(xué)消毒劑敏感、對(duì)膽鹽、煌綠有選擇性抑制作用，對(duì)鏈霉素、卡那霉素等敏感，但易耐藥一、生物學(xué)特性5.抵抗力自然狀態(tài)下較強(qiáng)。加熱60℃30m18二、臨床意義1.致病因素1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用2）內(nèi)毒素：細(xì)胞壁上的脂多糖（LPS）3）腸毒素：大腸埃希菌可產(chǎn)生兩種腸毒素：一種是不耐熱腸毒素（LT）；另一種是耐熱腸毒素（ST）二、臨床意義1.致病因素19二、臨床意義2.所致疾病1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染腸道外感染（多為內(nèi)源性感染）化膿性感染——定位轉(zhuǎn)移腹膜炎、闌尾炎、創(chuàng)傷感染、手術(shù)刀口感染等泌尿道感染——病原菌來(lái)自病人腸道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多見（尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎等）二、臨床意義2.所致疾病腸道外感染（多為內(nèi)源性感染）20二、臨床意義2）腸道內(nèi)感染

是人和動(dòng)物腸道的正常菌群，但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴(yán)重腹瀉，根據(jù)其不同的血清型別、毒力和所致臨床癥狀的不同，將引起人腹瀉的大腸埃希菌分為5類：二、臨床意義2）腸道內(nèi)感染是人和動(dòng)物腸道的正常菌群，但21三、微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)1.標(biāo)本采集腸外感染的標(biāo)本：取血液、痰液、膿液、分泌物等腸內(nèi)感染的標(biāo)本：取腹瀉和食物中毒者的糞便、肛拭和殘留食物三、微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)22三、微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)2.腸道外感染標(biāo)本的常規(guī)檢驗(yàn)

１）檢驗(yàn)程序２）檢驗(yàn)方法直接檢查→分離培養(yǎng)→鑒定（KIA、MIU）3.腸道內(nèi)感染標(biāo)本的常規(guī)檢驗(yàn)1)分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基2)鑒定：生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗(yàn)、毒素或毒力試驗(yàn)三、微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)2.腸道外感染標(biāo)本的常規(guī)檢驗(yàn)23第三節(jié)沙門菌屬第三節(jié)沙門菌屬24案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅(qū)癥狀。腹部有壓痛，肝脾腫大。肥達(dá)試驗(yàn)：

H1:40，O1：160，PA1：20，PB<1:20。醫(yī)生懷疑病人得了腸熱癥。

請(qǐng)問(wèn)：1、為明確診斷，應(yīng)采集哪些標(biāo)本來(lái)進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)？

2、所采集的標(biāo)本應(yīng)做哪些微生物學(xué)檢驗(yàn)才能有助于疾病的診斷？

3、為了明確診斷，是否還可以再抽血做肥達(dá)試驗(yàn)？

案例

一男性病人，25一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色

革蘭陰性桿菌，不產(chǎn)生芽孢，無(wú)莢膜，除少數(shù)菌株（雞沙門菌和雛沙門菌）外，一般都有周鞭毛，能運(yùn)動(dòng)一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色26醫(yī)生懷疑病人得了腸熱癥。人類致病的主要有霍亂弧菌和副溶血性弧菌，分別引起霍亂和食物中毒。腸桿菌科發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性。主要引起泌尿系感染，發(fā)病率僅次于大腸埃希菌，醫(yī)源性感染較多見。菌血癥或敗血癥4.尿液：中段尿離心后取沉淀物一端單鞭毛多見于胎兒亞種，兩端單鞭毛多見于空腸彎曲菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜。本屬細(xì)菌主要致病菌為嗜肺軍團(tuán)菌。臨床上常見的有：產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、坂崎腸桿菌、泰洛腸桿菌、聚團(tuán)腸桿菌、格高菲腸桿菌5個(gè)菌種。發(fā)酵多種糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣黏質(zhì)沙雷菌是引起腸道外感染的主要病原菌，與許多醫(yī)院內(nèi)感染的暴發(fā)流行有關(guān)案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅(qū)癥狀。1、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaCL濃度為3.※溶血性弧菌是一種嗜鹽性細(xì)菌，主要來(lái)自海產(chǎn)品。采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.3：霍亂采樣的注意事項(xiàng)有哪些？應(yīng)做哪些微生物學(xué)檢查？在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜。發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖。一、生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性※兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不高，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌落為半透明、S型菌落，可出現(xiàn)粗糙型的菌落（S-R）變異。※在腸道選擇性培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落醫(yī)生懷疑病人得了腸熱癥。一、生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性27一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)※發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣（傷寒沙門菌不產(chǎn)氣），不發(fā)酵乳糖?！鄶?shù)沙門菌反應(yīng)特征為：KIA：KA++，MIU：+--，IMViC：-+-+/-一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)28二、臨床意義1、致病因素1．侵襲力菌毛和Vi抗原構(gòu)成2．內(nèi)毒素

3．腸毒素

2、所致疾病

沙門菌主要通過(guò)污染食品和水源經(jīng)口感染1.臨床常見傷寒和副傷寒：腸熱癥2.胃腸炎3.菌血癥或敗血癥4.攜帶者二、臨床意義1、致病因素29二、臨床意義菌毛穿入淋巴液胸導(dǎo)管第二次菌血癥遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)腸壁壞死、潰瘍高熱、肝脾腫大、玫瑰疹、白細(xì)胞↓等全身中毒癥狀肝脾腎淋巴結(jié)膽囊尿排菌糞便排菌發(fā)病期（1-4W）潛伏期2W腸熱癥傷寒沙門菌等經(jīng)口吸附小腸黏膜細(xì)胞上在腸壁、腸系膜淋巴組織中繁殖（致敏）血流（第一次菌血癥）腸出血、腸穿孔二、臨床意義菌毛穿入淋巴液胸導(dǎo)管第二次菌血癥遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)高30三、微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集1周取血，2、3周取糞，3周取尿液，全病程骨髓，血清學(xué)診斷應(yīng)在病程的不同時(shí)期分別采集2～3份標(biāo)本食物中毒：糞便、嘔吐物、可疑食物帶菌者：糞便尿液：中段尿離心后取沉淀物分離鑒定增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應(yīng)→血清鑒定三、微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集31三、微生物檢驗(yàn)三、微生物檢驗(yàn)32三、微生物檢驗(yàn)鑒定1）生化反應(yīng)鑒定：可以菌落革蘭染色，若為革蘭陰性桿菌，進(jìn)行氧化酶、觸酶和硝酸鹽還原試驗(yàn)，氧化酶陰性，后兩者為陽(yáng)性者可做KIA和MIU等生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定KIA（KA－＋）MIU（＋－－）三、微生物檢驗(yàn)鑒定KIA（KA－＋）33四、微生物檢驗(yàn)2）血清學(xué)鑒定定屬：多價(jià)O抗血清對(duì)沙門菌分離株進(jìn)行定屬定群：每個(gè)O血清群的單價(jià)因子血清定群定型：用單價(jià)H因子血清與待測(cè)菌做玻片凝集試驗(yàn)3）血清學(xué)診斷（肥達(dá)試驗(yàn)）用已知的傷寒沙門菌O.H抗原、副傷寒沙門菌A、B、C的H抗原，檢測(cè)受檢血清中有無(wú)相應(yīng)的抗體的半定量凝集試驗(yàn)。結(jié)果解釋：正常值傷寒沙門菌O抗體效≥1:80，H抗體效價(jià)≥1:160，副傷寒沙門菌A、B、C的H抗體效價(jià)≥1:80才有臨床意義四、微生物檢驗(yàn)2）血清學(xué)鑒定34第四節(jié)志賀菌屬第四節(jié)志賀菌屬35

案例

男性，35歲。因腹痛，膿血便2天來(lái)診。

患者3天前出差回來(lái)后突然發(fā)熱達(dá)38℃，無(wú)寒戰(zhàn)，同時(shí)有腹痛、腹瀉，大便每日10余次，為少量膿血粘液便，伴里急后重。醫(yī)生接診后，懷疑患者患了細(xì)菌性痢疾。

請(qǐng)問(wèn)：1、為做病原學(xué)上的檢查，應(yīng)該采集什么標(biāo)本？

2、應(yīng)該選用什么標(biāo)本來(lái)進(jìn)行分離培養(yǎng)？對(duì)可疑菌落需做哪些生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗(yàn)來(lái)鑒定？

案例

男性36※兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不高，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌落為半透明、S型菌落，可出現(xiàn)粗糙型的菌落（S-R）變異。鼠疫耶爾森菌傳染性極強(qiáng)※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀非發(fā)酵菌可能氧化酶陽(yáng)性或陰性，不發(fā)酵葡萄糖。非發(fā)酵菌可能氧化酶陽(yáng)性或陰性，不發(fā)酵葡萄糖。3、生化反應(yīng)氧化酶、觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性，O/129敏感本屬細(xì)菌主要致病菌為嗜肺軍團(tuán)菌。1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。代表菌為流感嗜血桿菌。與弧菌屬鑒別：本菌屬在≥6％NaCL培養(yǎng)基不生長(zhǎng)，分解甘露醇，O/129耐藥。B群為福氏志賀菌：我國(guó)多見在臨床標(biāo)本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。D群宋內(nèi)志賀菌（★）這是因?yàn)槠咸亚蚓芎铣散跻蜃俞尫庞谂囵B(yǎng)基中，從而促進(jìn)流感嗜血桿菌的生長(zhǎng)。案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅(qū)癥狀。2、培養(yǎng)特性專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高。與腸桿菌科和非發(fā)酵菌鑒別：本菌屬氧化酶陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖；IMViC中4個(gè)試驗(yàn)的結(jié)果為＋＋――賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；臨床最常見的是糞產(chǎn)堿桿菌，大部分感染是條件致病志賀菌屬細(xì)菌是引起人類細(xì)菌性痢疾的主要腸道病原菌之一志賀菌屬可用特異性抗血清將其分為4個(gè)血清群（種）：A群為痢疾志賀菌：癥狀最重B群為福氏志賀菌：我國(guó)多見C群為鮑特志賀菌D群為宋內(nèi)志賀菌：癥狀最輕，我國(guó)多見※兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不高，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌37一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿菌，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，某些菌株有菌毛2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在腸道鑒別培養(yǎng)基上可形成乳糖不發(fā)酵、中等大小、無(wú)色半透明的菌落，宋內(nèi)志賀菌常形成粗糙型菌落，且能遲緩分解乳糖，培養(yǎng)48h后可形成乳糖發(fā)酵的粉紅色菌落。一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色38一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖。KIA：KA-；MIU：--/+-；IMViC：-/++--一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)KIA：KA-；MIU：--/+-39一、生物學(xué)特性4、抗原構(gòu)造與分類志賀菌屬菌種有O抗原，無(wú)H抗原，部分菌種有K抗原。O抗原是分類的依據(jù)，有群特異性和型特異性兩種抗原。根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原的不同，將志賀菌屬分為4個(gè)血清群（A、B、C、D）和40余個(gè)血清型A群痢疾志賀菌B群福氏志賀菌（★）C群鮑氏志賀菌D群宋內(nèi)志賀菌（★）一、生物學(xué)特性4、抗原構(gòu)造與分類40一、生物學(xué)特性5.變異性（1）S-R變異：宋內(nèi)志賀菌（診斷血清中含有兩相血清）（2）耐藥性變異（3）毒力變異6.抵抗力本屬細(xì)菌對(duì)理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細(xì)菌為低。對(duì)酸較敏感，在運(yùn)送培養(yǎng)時(shí)須使用含有緩沖劑的培養(yǎng)基，以免被糞便中其他細(xì)菌代謝中的酸所殺死。一、生物學(xué)特性5.變異性41二、臨床意義致病因素1）侵襲力2）內(nèi)毒素：志賀菌主要致病物質(zhì)3）外毒素2.所致疾病

主要引起人類細(xì)菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：1）急性細(xì)菌性痢疾2）慢性菌痢3）帶菌者二、臨床意義致病因素42二、臨床意義細(xì)菌（菌毛）吸附腸黏膜上皮細(xì)胞穿入細(xì)胞并擴(kuò)散周圍及深入黏膜下層釋放內(nèi)毒素、外毒素腸局部黏膜炎癥（變性、壞死、脫落）出血、壞死、潰瘍膿血便/黏液血便刺激腸壁植物神經(jīng)腸蠕動(dòng)↑腸肌痙攣腺體分泌↑水分吸收↓腹痛、腹瀉刺激直腸肛門括約肌里急后重便數(shù)增加吸收入血發(fā)熱、白細(xì)胞↑高熱、休克中毒性腦病DIC死亡毒血癥中毒性菌痢二、臨床意義細(xì)菌（菌毛）吸附腸黏膜上皮細(xì)胞穿入細(xì)胞并擴(kuò)散周圍43三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本采集取糞便或肛拭標(biāo)本。

發(fā)病早期采集黏液膿血便做床邊接種。

若不能及時(shí)送檢（甘油保存液或卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)）三、微生物學(xué)檢驗(yàn)44三、微生物學(xué)檢驗(yàn)KIA（KA－－）MIU（－－－）IMVC（－＋－－）三、微生物學(xué)檢驗(yàn)KIA（KA－－）MIU（－－－）IMVC（45三、微生物學(xué)檢驗(yàn)3.檢驗(yàn)方法1）分離培養(yǎng)2）鑒定先進(jìn)行氧化酶、觸酶和硝酸鹽還原試驗(yàn)（-++）

后做KIA和MIU等生化反應(yīng)試驗(yàn)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)46醫(yī)生接診后，懷疑患者患了細(xì)菌性痢疾。本屬細(xì)菌主要致病菌為嗜肺軍團(tuán)菌。采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.埃希菌屬主要有5個(gè)種，①與腸桿菌科及非發(fā)酵菌的鑒別：本屬氧化酶陽(yáng)性，能發(fā)酵葡萄糖增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應(yīng)→血清鑒定5%NaCL蛋白胨水或卡布培養(yǎng)基中送檢。為革蘭陰性短桿菌，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，某些菌株有菌毛為革蘭陰性短桿菌，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，某些菌株有菌毛2）分離培養(yǎng)TCBS瓊脂平板和3.非發(fā)酵菌可能氧化酶陽(yáng)性或陰性，不發(fā)酵葡萄糖。代表菌為流感嗜血桿菌。1、致病物質(zhì)鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質(zhì)）1、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：++-主要通過(guò)食物和水傳播，引起人類腸道感染和各種腸道外感染。3）分離培養(yǎng)堿性瓊脂平板和TCBS瓊脂平板專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求很高，常用鮑-金培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)。泌尿道感染——病原菌來(lái)自病人腸道（上行性）沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫(yī)院感染的一個(gè)重要的菌屬，臨床標(biāo)本中以黏質(zhì)沙雷菌最常見。第五節(jié)克雷伯菌屬醫(yī)生接診后，懷疑患者患了細(xì)菌性痢疾。第五節(jié)克雷伯菌屬47克雷伯菌屬：腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌，臨床感染中以肺炎克雷伯菌多見，也是引起醫(yī)院感染的重要病原菌革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件48一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，單個(gè)、成雙或者短鏈狀排列，有明顯莢膜，無(wú)芽孢，無(wú)鞭毛，有菌毛2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂平板上，形成較大、灰白色、黏液型的菌落，相鄰菌落容易發(fā)生融合，用接種針沾取時(shí)可挑出長(zhǎng)絲狀細(xì)絲在麥康凱或SS瓊脂平板上，形成較大、紅色、黏液型菌落。在血平板上不溶血。粘絲試驗(yàn)BAP菌落特征染色形態(tài)一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色粘絲試驗(yàn)BAP菌落特征染色形態(tài)49一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)分解葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，KIA：AA+-；MIU：--+；IMViC:--++4.抗原結(jié)構(gòu)：O抗原K抗原：莢膜多糖，用以分型一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)50二、臨床意義克雷伯菌屬的細(xì)菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感染中最重要的條件致病菌肺炎克雷伯菌是臨床標(biāo)本中常見的細(xì)菌，可引起典型的原發(fā)性肺炎肺炎克雷伯菌肺炎亞種還能引起各種肺外感染二、臨床意義克雷伯菌屬的細(xì)菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感51三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.采集標(biāo)本主要有痰液、血液、尿液、膿、腦脊液、糞便、胸腹水等。2.檢驗(yàn)方法1）直接檢查：膿、痰直接涂片染色鏡檢，尿、腦脊液取離心沉渣涂片染色鏡檢?？梢姼锾m陰性球桿菌，有明顯的莢膜。2）分離培養(yǎng)：血液、腦脊液標(biāo)本先經(jīng)肉湯增菌培養(yǎng)，其他標(biāo)本接種血平板或麥康凱瓊脂平板進(jìn)行分離培養(yǎng)。3）鑒定①生化反應(yīng)：革蘭染色，氧化酶、觸酶和硝酸酶、KIA、MIU、IMViC②莢膜腫脹試驗(yàn)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.采集標(biāo)本主要有痰液、血液、尿液、膿52第六節(jié)變形桿菌屬

第六節(jié)變形桿菌屬

53變形桿菌屬是腸桿菌科中的一菌屬，是一群動(dòng)力活潑、產(chǎn)硫化氫、可形成遷徙生長(zhǎng)，是條件致病菌和醫(yī)院感染的常見菌。變形桿菌屬是腸桿菌科中的一菌屬，是一群動(dòng)力活潑、產(chǎn)硫化氫、可541.形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，呈多形性，有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。2.培養(yǎng)特性

兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)無(wú)特殊要求，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂和血瓊脂平板上，普通變形桿菌和奇異變形桿菌多呈遷徙生長(zhǎng)，是本屬細(xì)菌的重要特征。在腸道選擇培養(yǎng)基上，形成透明或半透明的無(wú)色菌落。產(chǎn)生硫化氫，在SS平板上形成無(wú)色黑心菌落。普通變形桿菌、奇異變形桿菌的一些菌株和產(chǎn)黏變形桿菌在血平板上溶血。一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，呈多形性，有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)553.生化反應(yīng)分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解乳糖；KIA：KA++；MIU:++/-+；IMViC:+/-+--

迅速分解尿素（2-4h），苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)陽(yáng)性4.抗原構(gòu)造變形桿菌X19、X2、Xk菌株的O抗原,即OX19、OX2和OXK某些立克次體有共同抗原成分，臨床上用OX19、OX2和OXK代替立克次體的抗原，與病人血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，用以輔助診斷立克次體病，此試驗(yàn)稱為外斐試驗(yàn)。一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解乳糖；一、生物學(xué)特性561）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。腸桿菌科發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性。氧化酶、觸酶、硝酸鹽還原陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖等糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，O/129耐藥。增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應(yīng)→血清鑒定培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產(chǎn)生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數(shù)菌株可發(fā)酵乳糖，形成粉紅色菌落。在TCBS上，因發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸形成較大黃色菌落。乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。此外還可引起菌血癥、腹瀉、某些腸道外感染及多菌混合感染，導(dǎo)致延長(zhǎng)住院時(shí)間及死亡1、致病物質(zhì)溶血毒素和細(xì)胞毒素臨床最常見的是糞產(chǎn)堿桿菌，大部分感染是條件致病采集標(biāo)本主要有痰液、血液、尿液、膿、腦脊液、糞便、胸腹水等。穿入細(xì)胞并擴(kuò)散周圍及深入黏膜下層所致疾病主要引起人類細(xì)菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：傷寒沙門菌無(wú)色乳糖不發(fā)酵菌落結(jié)合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報(bào)告。在臨床標(biāo)本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。H抗原菌毛抗原1)分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基（1）S-R變異：宋內(nèi)志賀菌（診斷血清中含有兩相血清）二、臨床意義變形桿菌屬中由普通變形桿菌、奇異變形桿菌引起的感染最為常見。主要引起泌尿系感染，發(fā)病率僅次于大腸埃希菌，醫(yī)源性感染較多見。此外還可以引起食物中毒、呼吸道感染、創(chuàng)口感染及多個(gè)部位感染等。1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。二、臨床意義變形桿菌571、標(biāo)本采集有血液、尿、腦脊液、膿液、痰液、糞便，可疑食物等。2、檢驗(yàn)方法1）直接檢查2）分離培養(yǎng)3）鑒定4）鑒別三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1、標(biāo)本采集有血液、尿、腦脊液、膿液、痰液、糞便，可疑58

第七節(jié)腸桿菌屬

第七節(jié)腸桿菌屬59廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多種條件致病性感染。臨床上常見的有：產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、坂崎腸桿菌、泰洛腸桿菌、聚團(tuán)腸桿菌、格高菲腸桿菌5個(gè)菌種。廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多601、形態(tài)與染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無(wú)芽胞，部分菌株有莢膜2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上能夠生長(zhǎng)，形成較大的、灰白色或黃色的黏液狀菌落，在腸道選擇培養(yǎng)基上，形成發(fā)酵乳糖的紅色菌落。3、生化特性多數(shù)菌株分解葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；KIA：AA+-；MIU：+--/+；IMViC:--++一、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無(wú)芽胞，部61腸桿菌屬?gòu)V泛存在于自然環(huán)境中，是腸道正常菌群的成員，能引起醫(yī)院感染中多種條件致病性感染在臨床標(biāo)本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。坂崎腸桿菌能引起新生兒腦膜炎和菌血癥，死亡率高達(dá)75％二、臨床意義腸桿菌屬?gòu)V泛存在于自然環(huán)境中，是腸道正常菌群的成員，能引起醫(yī)621.標(biāo)本采集血液、尿液、膿液、痰液、腦脊液等。2.檢驗(yàn)方法1）直接檢驗(yàn)2）分離培養(yǎng)3）鑒定MAC上稍大而粘稠的菌落SS上如果生長(zhǎng)，為白色或乳白色、不透明粘稠狀的菌落三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本采集血液、尿液、膿液、痰液、腦脊液等。三、微63

第八節(jié)其他常見腸桿菌科細(xì)菌

第八節(jié)其他常見腸桿菌科細(xì)菌64一、沙雷菌屬二、耶爾森菌屬三、愛(ài)德華菌屬四、枸櫞酸桿菌屬五、哈夫尼亞菌屬一、沙雷菌屬65一、沙雷菌屬一、沙雷菌屬66沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫(yī)院感染的一個(gè)重要的菌屬，臨床標(biāo)本中以黏質(zhì)沙雷菌最常見。條件致病菌，可引起肺炎、敗血癥、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、泌尿道感染等。佩戴隱形眼鏡所引起的紅眼病。沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫(yī)院感染的一個(gè)重要的菌屬，671、形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭陰性小桿菌，有周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，氣味沙雷菌有微莢膜，其余菌種無(wú)莢膜、無(wú)芽胞。黏質(zhì)沙雷菌是細(xì)菌中最小者，可用于檢查除菌濾器的除菌效果2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上能夠生長(zhǎng)，形成不透明，白色或有色（紅色、粉紅色）的菌落。色素的產(chǎn)生在室溫中更為明顯。所產(chǎn)生的兩種不同色素是：非水溶性的靈菌紅素和水溶性的吡羧酸。在伊紅美藍(lán)和麥康凱瓊脂平板上形成無(wú)色的大而粘稠的菌落。一、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭陰性小桿菌，有周身鞭毛，能68該菌曾一度被認(rèn)為是無(wú)害的環(huán)境污染菌，但由于該菌具有侵襲性并對(duì)許多常用抗菌藥物有耐藥性，現(xiàn)已成為一種重要的條件病原菌黏質(zhì)沙雷菌是引起腸道外感染的主要病原菌，與許多醫(yī)院內(nèi)感染的暴發(fā)流行有關(guān)二、臨床意義該菌曾一度被認(rèn)為是無(wú)害的環(huán)境污染菌，但由于該菌具有侵襲性并對(duì)69KIA：KA--MIU：+--IMViC：--/+++賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：++-DNA酶陽(yáng)性三、生化反應(yīng)KIA：KA--三、生化反應(yīng)70二、耶爾森菌屬二、耶爾森菌屬71與人類疾病密切相關(guān)的有3個(gè)菌種，包括鼠疫耶爾森菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、假結(jié)核耶爾森菌，都是人畜共患病病原菌。與人類疾病密切相關(guān)的有3個(gè)菌種，包括鼠疫耶爾森菌、小腸結(jié)腸72鼠疫耶爾森菌在我國(guó)傳染病防治法中被列為甲類傳染病，曾在世界上造成多次大流行，引起大批患者死亡，造成人類重大災(zāi)害，由于世界上鼠疫自然疫源尚未全部消滅，至今仍有人間或鼠間流行，因此，必須予以重視。鼠疫耶爾森菌有兩種毒素：內(nèi)毒素和鼠毒素臨床類型

有3種常見的臨床類型：（1）腺鼠疫（2）敗血型鼠疫（3）肺鼠疫此外尚有較為少見的皮膚鼠疫、腸鼠疫、腦膜炎型鼠疫、眼鼠疫等鼠疫耶爾森菌鼠疫耶爾森菌在我國(guó)傳染病防治法中被列為甲類傳染病，曾在世界上73為革蘭染色陰性直桿狀或球桿狀，兩端鈍圓，兩極濃染，有莢膜，無(wú)芽孢，無(wú)鞭毛鼠疫耶爾森菌兼性厭氧，耐低溫，在4～43℃均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為25～28℃，最適pH為6．9～7．2。在普通培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，但發(fā)育緩慢。在血瓊脂平板上培養(yǎng)以37℃最好，48小時(shí)后形成柔軟、粘稠的粗糙菌落。在肉湯培養(yǎng)基中開始混濁生長(zhǎng)，24小時(shí)后表現(xiàn)為沉淀生長(zhǎng)，48小時(shí)后逐漸形成菌膜，稍加搖動(dòng)后菌膜呈鐘乳石狀下垂。肝臟新鮮壓片顯微鏡下形態(tài)特征為革蘭染色陰性直桿狀或球桿狀，兩端鈍圓，兩極濃染，有莢膜，無(wú)74鼠疫耶爾森菌檢驗(yàn)程序鼠疫耶爾森菌傳染性極強(qiáng)屬于危害程度第二類的病原微生物采取嚴(yán)格的防護(hù)措施并嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室對(duì)烈性傳染病的操作規(guī)程方可進(jìn)行操作鼠疫耶爾森菌檢驗(yàn)程序鼠疫耶爾森菌傳染性極強(qiáng)75鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)大多數(shù)糖不分解；KIA：KA--；MIU：---；IMViC：--+-；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；不液化明膠；當(dāng)穿刺培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)物表面成膜狀，細(xì)菌沿穿刺線呈縱樹狀生長(zhǎng)。鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)大多數(shù)糖不分解；KIA：76沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫(yī)院感染的一個(gè)重要的菌屬，臨床標(biāo)本中以黏質(zhì)沙雷菌最常見。另一種是耐熱腸毒素（ST）2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在腸道選擇鑒別培養(yǎng)基上，形成不發(fā)酵乳糖的無(wú)色菌落，TCBS平板上不生長(zhǎng)。※在腸道選擇性培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落本屬細(xì)菌因人工培養(yǎng)時(shí)必須加含X、V因子的血液而得名。本屬細(xì)菌主要致病菌為嗜肺軍團(tuán)菌。結(jié)合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報(bào)告。采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.屬于危害程度第二類的病原微生物迅速分解尿素（2-4h），苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)陽(yáng)性苛養(yǎng)菌是指對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)要求較苛刻的細(xì)菌，在普通環(huán)境中不能或難以生長(zhǎng)。1、致病物質(zhì)鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質(zhì)）1、形態(tài)與染色革蘭陰性球桿菌，常呈雙排列。O抗原特異性高，O1和O139群引起霍亂，O1型根據(jù)特異性分為古典生物型和埃爾托生物型3：霍亂采樣的注意事項(xiàng)有哪些？應(yīng)做哪些微生物學(xué)檢查？不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗(yàn)均陰性。IMViC中4個(gè)試驗(yàn)的結(jié)果為＋＋――本屬細(xì)菌對(duì)理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細(xì)菌為低。發(fā)酵多種糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣小腸結(jié)腸炎耶爾森菌小腸結(jié)腸炎耶爾森菌可寄居在鼠、家畜和兔多種動(dòng)物體內(nèi)，多表現(xiàn)為小腸炎和結(jié)腸炎，癥狀與菌痢和闌尾炎相似。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌為革蘭陰性球桿菌，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，22-25℃培養(yǎng)有周鞭毛，呈翻滾螺旋狀運(yùn)動(dòng)，35℃無(wú)動(dòng)力。兼性厭氧，耐低溫。具有嗜冷性，在4℃增菌3周可分離純化；25℃時(shí)動(dòng)力+，37℃時(shí)動(dòng)力-;VP試驗(yàn)25℃時(shí)+，37℃時(shí)-；KIA：KA--；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：-+-沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫(yī)院感染的一個(gè)重要的菌屬，臨床標(biāo)本77小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)程序小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢驗(yàn)程序78三、愛(ài)德華菌屬三、愛(ài)德華菌屬79四、枸櫞酸桿菌四、枸櫞酸桿菌80枸櫞酸桿菌屬枸櫞酸桿菌屬以前僅有3個(gè)種，即弗勞地枸櫞酸桿菌，異型枸櫞酸桿菌和無(wú)丙二酸鹽枸櫞酸桿菌。枸櫞酸桿菌屬是人和動(dòng)物腸道的正常菌群，也是條件致病菌，能引起腹瀉和腸道外感染如菌血癥、腦膜炎和腦膿腫等枸櫞酸桿菌屬枸櫞酸桿菌屬以前僅有3個(gè)種，即弗勞地枸櫞酸桿菌，81本菌屬是腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌與臨床及醫(yī)院感染相關(guān)的病原菌主要是弗勞地枸櫞酸桿菌，科澤枸櫞酸桿菌和布拉克枸櫞酸桿菌臨床最常見的感染部位是泌尿道，常為老年男性患者（≥65歲）此外還可引起菌血癥、腹瀉、某些腸道外感染及多菌混合感染，導(dǎo)致延長(zhǎng)住院時(shí)間及死亡科澤枸櫞酸桿菌還可引起嬰幼兒腦膜炎和腦膿腫本菌屬是腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌821、形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無(wú)芽孢、無(wú)莢膜2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在MAC、EBME、SS上為無(wú)色透明或紅色。弗勞地枸櫞酸桿菌可產(chǎn)生硫化氫，在SS瓊脂上形成有黑色中心的菌落。本菌屬的部分生化特性和抗原結(jié)構(gòu)（O抗原）與沙門菌屬相似，應(yīng)注意鑒別1、形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無(wú)芽83

3.枸櫞酸桿菌的基本生化反應(yīng)特征：三糖鐵瓊脂中產(chǎn)酸/產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)堿/產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)生硫化氫，枸櫞酸鹽陽(yáng)性，脲酶陰性/陽(yáng)性，吲哚陽(yáng)性/陰性，動(dòng)力陽(yáng)性，VP陰性，鳥氨酸陽(yáng)性/陰性，精氨酸陽(yáng)性，賴氨酸陰性枸櫞酸桿菌屬與類似菌屬的鑒別3.枸櫞酸桿菌的基本生化反應(yīng)特征：三糖鐵瓊脂中產(chǎn)酸/產(chǎn)酸產(chǎn)84腸桿菌科小結(jié)腸桿菌科細(xì)菌是革蘭陰性桿菌中最主要的成員，也是臨床最常見的病原菌，是臨床泌尿道、呼吸道、腸道、腹腔和盆腔等感染的常見病原菌現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)與人類感染有關(guān)的腸桿菌科細(xì)菌有33個(gè)菌屬，約有40種以上的腸桿菌科的細(xì)菌可在臨床標(biāo)本中檢測(cè)出腸桿菌科細(xì)菌為革蘭陰性桿狀或球桿狀、無(wú)芽孢、多數(shù)有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，有致病性的菌株多數(shù)有菌毛腸桿菌科小結(jié)腸桿菌科細(xì)菌是革蘭陰性桿菌中最主要的成員，也是臨85需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好主要生化特性為發(fā)酵葡萄糖、觸酶陽(yáng)性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽(yáng)性革蘭氏陰性桿菌除腸桿菌科外，還有弧菌科和非發(fā)酵菌，所以首先應(yīng)與這些菌進(jìn)行鑒別，鑒別可用形態(tài)、葡萄糖氧化或發(fā)酵、氧化酶、鞭毛等加以區(qū)別腸桿菌科細(xì)菌的檢驗(yàn)要點(diǎn)為直接涂片檢查，分離培養(yǎng)，細(xì)菌鑒定，必要時(shí)還要作血清學(xué)鑒定及毒素檢測(cè)需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好86實(shí)驗(yàn)室抗菌藥物敏感試驗(yàn)抗菌藥物的選擇，需參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，咨詢醫(yī)院相關(guān)專業(yè)人士，結(jié)合醫(yī)院的具體情況來(lái)選擇實(shí)驗(yàn)室提供的抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床合理使用抗生素意義重大同時(shí)細(xì)菌的耐藥譜，還可作為醫(yī)院感染流行病學(xué)調(diào)查的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)室依據(jù)實(shí)驗(yàn)室抗菌藥物敏感試驗(yàn)抗菌藥物的選擇，需參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上87弧菌科弧菌科88案例2014年9月19日下午5點(diǎn)，李滄區(qū)下午5點(diǎn)，李滄區(qū)疾控中心接到市八醫(yī)的電話報(bào)告：9月19日下午4：00，該院腸道門診接診2例腹瀉病患者，癥狀相似，腹瀉十余次，嘔吐四次。截止7點(diǎn)，該院已累計(jì)收治了7例疑似霍亂病人，病人的臨床表現(xiàn)劇烈腹瀉，先瀉后吐，無(wú)腹痛、無(wú)發(fā)熱，發(fā)病時(shí)間分別為9月18、19日。區(qū)疾控中心應(yīng)急處置分隊(duì)對(duì)7例病人進(jìn)行了個(gè)案流行病學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)7例病人均為附近某小區(qū)居民，9月17日中午，均參加了村民姜先生在手拉手餐館舉辦的結(jié)婚午宴，同時(shí)霍亂快診O139陽(yáng)性。請(qǐng)問(wèn)：1：結(jié)合臨床表現(xiàn)，你初步懷疑什么菌感染？2：應(yīng)采集幾級(jí)防護(hù)？除個(gè)人防護(hù)用品外，還應(yīng)準(zhǔn)備什么？3：霍亂采樣的注意事項(xiàng)有哪些？應(yīng)做哪些微生物學(xué)檢查？

案例89一、弧菌屬弧菌屬分布廣泛，以水中最多。人類致病的主要有霍亂弧菌和副溶血性弧菌，分別引起霍亂和食物中毒。一、弧菌屬90（一）霍亂弧菌※

霍亂弧菌是霍亂的病原菌，該病為一種急性烈性腸道傳染病，發(fā)病急，傳染性強(qiáng)，病死率高，屬于國(guó)際檢疫傳染病，為我國(guó)甲類傳染病?！?/p>

霍亂弧菌包括兩個(gè)生物型：古典生物型和埃爾托（Eltor）生物型。（一）霍亂弧菌91一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性，弧形或逗點(diǎn)狀，單端鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。取患者米泔樣糞便作懸滴觀察，可見該菌呈穿梭樣或流星狀運(yùn)動(dòng)，做涂片染色鏡檢，可見“魚群狀”排列一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性，弧形或逗點(diǎn)狀，922、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適溫度35℃，耐堿不耐酸，最適pH8.8-9.9,在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜，可達(dá)快速增菌目的。在堿性瓊脂平板上，形成較大、圓形、扁平、無(wú)色透明或半透明似水滴狀菌落。在TCBS上，因發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸形成較大黃色菌落。在亞碲酸鉀瓊脂平板上，菌落中心呈灰褐色。在血平板上，Eltor生物型有β溶血。2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適溫度3933、生化反應(yīng)4、抗原結(jié)構(gòu)及分型H抗原弧菌屬所共有，特異性低O抗原特異性高，O1和O139群引起霍亂，O1型根據(jù)特異性分為古典生物型和埃爾托生物型5、抵抗力抵抗力弱，不耐熱，耐堿不耐酸。埃爾托（Eltor）生物型較古典生物型強(qiáng)。3、生化反應(yīng)941、致病物質(zhì)鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質(zhì)）2、所致疾病引起霍亂，人是唯一易感者，通過(guò)污染的水源或經(jīng)食物經(jīng)口感染。霍亂后可獲得牢固的免疫二、臨床意義1、致病物質(zhì)鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質(zhì)）二951、標(biāo)本采集發(fā)病早期及未服抗生素前采樣。可采取患者糞便、嘔吐物或肛拭子。采集標(biāo)本及時(shí)接種于堿性蛋白胨水中2、檢驗(yàn)程序三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1、標(biāo)本采集發(fā)病早期及未服抗生素前采樣。可采取患者糞便963、檢驗(yàn)方法1）直接鏡檢①革蘭染色鏡檢，如見魚群狀排列的革蘭陰性弧菌，可初步報(bào)告。②動(dòng)力及制動(dòng)試驗(yàn)：去病人米泔水樣便或嘔吐物，懸滴法鏡檢，可見流星樣運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌。加入O1群霍亂弧菌多價(jià)血清后動(dòng)力消失，制動(dòng)試驗(yàn)陽(yáng)性，可早期報(bào)告2）增菌培養(yǎng)堿性蛋白胨水

3）分離培養(yǎng)堿性瓊脂平板和TCBS瓊脂平板4）血清學(xué)鑒定3、檢驗(yàn)方法97（二）溶血性弧菌※溶血性弧菌是一種嗜鹽性細(xì)菌，主要來(lái)自海產(chǎn)品。引起食物中毒。（二）溶血性弧菌98一、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性，直或微彎的桿狀，在不同培養(yǎng)基上菌體形態(tài)差異較大。兩極濃染，單端鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。一、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性，直或微彎的992、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無(wú)鹽培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜?！?.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長(zhǎng)，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤(rùn)，不透明，※在TCBS上，不發(fā)酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區(qū)別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤(rùn)，灰白色菌落，有β溶血。※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaC100革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件1013、生化反應(yīng)致病菌株能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血，對(duì)馬紅細(xì)胞不溶血，稱神奈川試驗(yàn)。4、抵抗力抵抗力弱，不耐熱，耐堿不耐酸。3、生化反應(yīng)致病菌株能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血，對(duì)馬紅細(xì)胞1021、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、所致疾病引起食物中毒二、臨床意義1、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素二、臨床意義1031、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培養(yǎng)基中送檢。2、檢驗(yàn)方法1）增菌培養(yǎng)3.5%NaCL蛋白胨水2）分離培養(yǎng)TCBS瓊脂平板和3.5%NaCL瓊脂平板3）鑒定三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標(biāo)本立即104二、氣單胞菌屬氣單胞菌屬?gòu)V泛分布于自然界，可引起腹瀉和腸道外感染二、氣單胞菌屬105一、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性直桿狀，有時(shí)成球桿狀或絲狀，單極鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑，無(wú)芽孢，有窄的莢膜。2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)，形成微白色半透明菌落；在血平板上，形成較大、扁平菌落，有β溶血；在腸道培養(yǎng)基上，形成扁平、無(wú)色菌落；在TCBS上，生長(zhǎng)不良；液體培養(yǎng)基呈均勻渾濁。3、生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，在6%NaCL中不生長(zhǎng)一、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色革蘭陰性直桿狀，有時(shí)成球1061、致病物質(zhì)溶血毒素和細(xì)胞毒素2、所致疾病主要引起人類腸內(nèi)感染（腹瀉）和腸外感染（傷口感染和敗血癥）。二、臨床意義1、致病物質(zhì)溶血毒素和細(xì)胞毒素二、臨床意義1071、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、血液、膿液、腦脊液、尿液等標(biāo)本。2、檢驗(yàn)方法1）直接涂片革蘭陰性短桿菌，懸滴法細(xì)菌運(yùn)動(dòng)活潑2）分離培養(yǎng)４℃冷增菌3）鑒定４）鑒別①與腸桿菌科及非發(fā)酵菌的鑒別：本屬氧化酶陽(yáng)性，能發(fā)酵葡萄糖②與鄰單胞菌和弧菌屬的鑒別：本菌屬對(duì)O/129耐藥，TCBS平板上不生長(zhǎng)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、血液、膿液、腦脊液、尿108三、鄰單胞菌屬鄰單胞菌屬只有一個(gè)種即類志賀鄰單胞菌。引起人類水樣腹瀉和食物中毒。三、鄰單胞菌屬1091、染色及形態(tài)本菌為革蘭陰性桿菌，1-5根極端鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在腸道選擇鑒別培養(yǎng)基上，形成不發(fā)酵乳糖的無(wú)色菌落，TCBS平板上不生長(zhǎng)。3、生化反應(yīng)氧化酶、觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性，O/129敏感4、鑒別試驗(yàn)1）與志賀菌屬鑒別：氧化酶和動(dòng)力試驗(yàn)為陽(yáng)性，志賀菌屬均為陰性

2）與氣單胞菌和弧菌屬的鑒別：本菌屬對(duì)O/129敏感，TCBS平板上不生長(zhǎng)1、染色及形態(tài)本菌為革蘭陰性桿菌，1-5根極端鞭毛，運(yùn)110一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性，直或微彎的桿狀，在不同培養(yǎng)基上菌體形態(tài)差異較大。兩極濃染，單端鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性，直或微彎的1112、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無(wú)鹽培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜。※在3.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長(zhǎng)，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤(rùn)，不透明，※在TCBS上，不發(fā)酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區(qū)別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤(rùn)，灰白色菌落，有β溶血?！赟S平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaC1121、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、所致疾病引起食物中毒二、臨床意義1、致病物質(zhì)粘附因子（主要為菌毛）、毒素二、臨床意義1131、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標(biāo)本立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培養(yǎng)基中送檢。2、檢驗(yàn)方法1）增菌培養(yǎng)3.5%NaCL蛋白胨水2）分離培養(yǎng)TCBS瓊脂平板和3.5%NaCL瓊脂平板3）鑒定三、微生物學(xué)檢驗(yàn)1、標(biāo)本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標(biāo)本立即114弧菌科小結(jié)

霍亂是烈性傳染病，凡在流行季節(jié)和地區(qū)有腹瀉癥狀的患者均應(yīng)快速準(zhǔn)確作出病原學(xué)診斷。標(biāo)本直接檢查有助于快速診斷。將標(biāo)本直接接種于堿性胨水后，轉(zhuǎn)種TCBS等平板觀察菌落形態(tài)。可疑菌落應(yīng)使用O1群和O139群霍亂弧菌多價(jià)和單價(jià)抗血清進(jìn)行凝集。結(jié)合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報(bào)告。進(jìn)一步純培養(yǎng)，依據(jù)全面生化反應(yīng)，血清學(xué)分群及分型進(jìn)行最后鑒定。符合霍亂弧菌的菌株尚需區(qū)分古典生物型和El-Tor生物型弧菌科小結(jié)霍亂是烈性傳染病，凡在流行季節(jié)和地區(qū)有腹瀉115

副溶血性弧菌具有嗜鹽性，在不含NaCl的培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。主要引起食物中毒和急性腹瀉，從腹瀉患者中分離到的菌株95%以上能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血，對(duì)馬紅細(xì)胞不溶血，為神奈川現(xiàn)象副溶血性弧菌具有嗜鹽性，在不含NaCl的培養(yǎng)基上不生116

氣單胞菌屬是革蘭陰性直桿菌、球桿菌或絲狀菌，極端單鞭毛，動(dòng)力陽(yáng)性，來(lái)自人類菌種（嗜溫菌）在10～42℃生長(zhǎng)；來(lái)自魚類或環(huán)境菌種（嗜冷菌）在22～25℃生長(zhǎng)。氧化酶、觸酶、硝酸鹽還原陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖等糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，O/129耐藥。引起腹瀉和菌血癥等。與腸桿菌科和非發(fā)酵菌鑒別：本菌屬氧化酶陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖；腸桿菌科發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性。非發(fā)酵菌可能氧化酶陽(yáng)性或陰性，不發(fā)酵葡萄糖。與弧菌屬鑒別：本菌屬在≥6％NaCL培養(yǎng)基不生長(zhǎng)，分解甘露醇，O/129耐藥。氣單胞菌屬是革蘭陰性直桿菌、球桿菌或絲狀菌，極端單鞭117非發(fā)酵革蘭陰性桿菌非發(fā)酵革蘭陰性桿菌118

非發(fā)酵菌是一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌廣泛存在于人體體表、開放體腔，以及醫(yī)院相關(guān)的外環(huán)境中，多為條件致病菌。醫(yī)院感染中銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌占重要地位。 非發(fā)酵菌是一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧119

假單胞菌屬※為一群嚴(yán)格需氧、有鞭毛、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜的革蘭陰性桿菌?！趸负陀|酶試驗(yàn)陽(yáng)性?？僧a(chǎn)生大量水溶性色素，如綠膿素、紅膿素 假單胞菌屬120

一、銅綠假單胞菌屬

假單胞菌屬的代表菌屬，產(chǎn)生水溶性色素綠膿素，使膿液或培養(yǎng)基呈綠色，而得名。為條件致病菌，是醫(yī)院感染的常見菌。 一、銅綠假單胞菌屬121

1、形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，球桿狀或絲球狀，長(zhǎng)短不一。單個(gè)、呈雙或短鏈狀排列。無(wú)芽孢，有莢膜，有1-3根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，臨床分離株常有菌毛。2、培養(yǎng)特性專性需氧，部分菌株兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高。在普通瓊脂平板和SS平板上生長(zhǎng)良好，可生長(zhǎng)溫度25-42℃，最適生長(zhǎng)溫度35℃，4℃不生長(zhǎng)而42℃生長(zhǎng)是該菌的鑒別點(diǎn)之一?！谘桨搴望溈祫P平板上形成不同形態(tài)菌落，生姜?dú)馕??！赟S瓊脂平板上，經(jīng)48h培養(yǎng)菌落中央呈棕綠色（與沙門菌和志賀菌相區(qū)別）※在普通瓊脂平板上，可產(chǎn)生多種色素，以綠膿素和青膿素為主一、生物學(xué)性狀 1、形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，球桿狀或絲球狀，長(zhǎng)短122革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件1233、生化反應(yīng)葡糖糖、木糖氧化；觸酶、氧化酶陽(yáng)性；利用枸櫞酸鹽、還原硝酸鹽并產(chǎn)生氮?dú)?；液化明膠，吲哚陰性；4、抵抗力比其他無(wú)芽孢細(xì)菌抵抗力強(qiáng)。革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件124二、臨床意義

1、致病物質(zhì)產(chǎn)生多種致病性的毒素和侵襲性的酶2、所致疾病條件致病菌，在抵抗力低時(shí)引起皮膚、呼吸道、泌尿道及燒傷創(chuàng)面等感染，可導(dǎo)致菌血癥、敗血癥、心內(nèi)膜炎及嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉。醫(yī)院常見病原菌3、免疫性免疫原性強(qiáng)，可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，具有一定的抗感染作用二、臨床意義

1、致病物質(zhì)產(chǎn)生多種致病性的毒素和侵襲125三、微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、標(biāo)本采集按疾病和檢查目的分別采取不同的臨床標(biāo)本，醫(yī)院環(huán)境檢測(cè)可從空氣、水、物體表面等處采樣。2、檢驗(yàn)方法1）直接涂片染色鏡檢2）分離培養(yǎng)3）鑒定4）鑒別三、微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、標(biāo)本采集按疾病和檢查目的分別采取126

二、產(chǎn)堿桿菌屬

產(chǎn)堿桿菌屬典型的菌種是糞產(chǎn)堿桿菌。 二、產(chǎn)堿桿菌屬127

一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，常呈單、雙或鏈狀排列。具有周鞭毛，無(wú)芽孢，多數(shù)菌株無(wú)莢膜。2、培養(yǎng)特性專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高。在普通瓊脂平板上生長(zhǎng)良好。麥康凱和SS平板上，形成不發(fā)酵乳糖的無(wú)色透明菌落。在蛋白胨的肉湯中產(chǎn)氨，可使培養(yǎng)基pH增至8.6以上二、臨床意義臨床最常見的是糞產(chǎn)堿桿菌，大部分感染是條件致病三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 一、生物學(xué)性狀128

三、不動(dòng)桿菌屬

不動(dòng)桿菌屬歸屬于奈瑟菌科，臨床上分離出來(lái)的絕大多數(shù)為鮑曼不動(dòng)桿菌。 三、不動(dòng)桿菌屬129

一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)與染色革蘭陰性球桿菌，常呈雙排列。無(wú)芽孢，無(wú)鞭毛，有莢膜。2、培養(yǎng)特性專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高。在普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上。3、生化反應(yīng)觸酶陽(yáng)性，O/F為氧化型，氧化酶陰性，動(dòng)力，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性（三陰）二、臨床意義本菌的分離率是僅次于銅綠假單胞菌而位居第二位的非發(fā)酵菌病三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 一、生物學(xué)性狀130其他革蘭陰性苛養(yǎng)菌其他革蘭陰性苛養(yǎng)菌131苛養(yǎng)菌是指對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)要求較苛刻的細(xì)菌，在普通環(huán)境中不能或難以生長(zhǎng)。體外培養(yǎng)需添加特殊因子或其他營(yíng)養(yǎng)成分。常見苛養(yǎng)菌有嗜血桿菌屬、鮑特菌屬、軍團(tuán)菌屬、布魯菌屬?？琉B(yǎng)菌是指對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)要求較苛刻的細(xì)菌，在普通環(huán)境中不能132一、流感嗜血桿菌本屬細(xì)菌因人工培養(yǎng)時(shí)必須加含X、V因子的血液而得名。代表菌為流感嗜血桿菌。一、流感嗜血桿菌133一、生物學(xué)性狀流感嗜血桿菌簡(jiǎn)稱流感桿菌，革蘭陰性菌短小桿菌，無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢、黏液型菌株有莢膜。需氧或兼性厭氧，生長(zhǎng)時(shí)需要X因子、V因子或二者之一。在巧克力平板上，形成圓形、光滑、透明似露珠的小菌落。一、生物學(xué)性狀134當(dāng)流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌一起培養(yǎng)時(shí)，可見到金黃色葡萄球菌周圍的流感嗜血桿菌菌落較大，而遠(yuǎn)離葡萄球菌的流感嗜血桿菌菌落較小，這種現(xiàn)象稱為衛(wèi)星現(xiàn)象。這是因?yàn)槠咸亚蚓芎铣散跻蜃俞尫庞谂囵B(yǎng)基中，從而促進(jìn)流感嗜血桿菌的生長(zhǎng)。這一現(xiàn)象有助于對(duì)流感嗜血桿菌的鑒定。當(dāng)流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌一起培養(yǎng)時(shí)，可見到金135二、臨床意義本菌主要寄生在人的鼻咽眼及陰道粘膜中，人是唯一的傳染源和帶菌者。三、微生物學(xué)檢查1、標(biāo)本采集2、檢驗(yàn)方法3、鑒定二、臨床意義136二、鮑特菌屬本屬細(xì)菌以百日咳鮑特菌為代表菌。（一）生物學(xué)性狀革蘭陰性球桿菌，無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢，光滑型菌株有莢膜。專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求很高，常用鮑-金培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)。新分離的菌株為光滑型，稱I相菌，具有菌體和表面抗原。（二）臨床意義百日咳外毒素是百日咳的主要毒力因子。二、鮑特菌屬137三、軍團(tuán)菌屬本屬細(xì)菌主要致病菌為嗜肺軍團(tuán)菌。（一）生物學(xué)性狀常用鍍銀染色和吉姆薩染色法（二）臨床意義致病物質(zhì)主要為菌毛、毒素和多種酶類嗜肺軍團(tuán)菌為胞內(nèi)寄生菌，細(xì)胞免疫在抗感染中其主要作用。四、布魯菌屬本屬細(xì)菌主要致病物質(zhì)為內(nèi)毒素、莢膜、侵襲性的酶。主要引起布魯菌病。以細(xì)胞免疫為主。三、軍團(tuán)菌屬138

五、彎曲菌屬對(duì)人類致病的主要為空腸彎曲菌和胎兒彎曲菌。前者是人類腹瀉最常見的病原菌之一，后者在免疫功能低下時(shí)可引起敗血癥、腦膜炎。

139一、生物學(xué)特性（1）為革蘭氏陰性、細(xì)長(zhǎng)、螺旋形或海鷗展翅狀、S形的彎曲桿菌。陳舊培養(yǎng)物可呈球形或長(zhǎng)絲狀。一端或兩端具有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，有時(shí)呈螺旋狀運(yùn)動(dòng)。一端單鞭毛多見于胎兒亞種，兩端單鞭毛多見于空腸彎曲菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜。（2）微需氧菌，初次分離時(shí)需在含5%O2、85%N2、10%CO2氣體環(huán)境中生長(zhǎng)，傳代培養(yǎng)時(shí)能在10%CO2環(huán)境中生長(zhǎng)。一、生物學(xué)特性140（3）營(yíng)養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，需加血液、血清。（4）該菌屬生化反應(yīng)不活潑。不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗(yàn)均陰性。氧化酶均為陽(yáng)性，大多數(shù)彎曲菌還能還原硝酸鹽，觸酶試驗(yàn)為陽(yáng)性，空腸彎曲菌馬尿酸水解試驗(yàn)陽(yáng)性。（5）耐寒，在4℃冰箱或水中可存活4周。（3）營(yíng)養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，需加血液、血清。141二、臨床意義主要通過(guò)食物和水傳播，引起人類腸道感染和各種腸道外感染。該菌屬中的空腸彎曲菌是引發(fā)散發(fā)性細(xì)菌性腸炎的最常見菌種之一，胎兒彎曲菌主要引起腸道外感染，其中胎兒亞種為主要的人類致病菌。三、微生物學(xué)檢驗(yàn)二、臨床意義142六、螺桿菌屬※對(duì)人類致病的主要為幽門螺桿菌（Hp）※在胃黏膜層中呈魚群樣排列?！鶢I(yíng)養(yǎng)要求高，以布氏瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，需加用適量全血或胎牛血清作為補(bǔ)充物才能生長(zhǎng)?！焖匐迕笍?qiáng)陽(yáng)性，是鑒定的重要依據(jù)?！拈T螺桿菌的傳播途徑主要是消化道，幽門螺桿局的感染可能與胃癌有關(guān)六、螺桿菌屬143Thankyou!Thankyou!144臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經(jīng)糞口傳播引起血流感染（二）腸道內(nèi)感染是人和動(dòng)物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等臨床意義（一）腸道外感染145二、臨床意義1.致病因素1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用2）內(nèi)毒素：細(xì)胞壁上的脂多糖（LPS）3）腸毒素：大腸埃希菌可產(chǎn)生兩種腸毒素：一種是不耐熱腸毒素（LT）；另一種是耐熱腸毒素（ST）二、臨床意義1.致病因素146一、生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性※兼性厭氧，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不高，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌落為半透明、S型菌落，可出現(xiàn)粗糙型的菌落（S-R）變異。※在腸道選擇性培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落一、生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性147一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖。KIA：KA-；MIU：--/+-；IMViC：-/++--一、生物學(xué)特性3.生化反應(yīng)KIA：KA-；MIU：--/+-148鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)大多數(shù)糖不分解；KIA：KA--；MIU：---；IMViC：--+-；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；不液化明膠；當(dāng)穿刺培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)物表面成膜狀，細(xì)菌沿穿刺線呈縱樹狀生長(zhǎng)。鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)大多數(shù)糖不分解；KIA：1491、形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無(wú)芽孢、無(wú)莢膜2、培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在MAC、EBME、SS上為無(wú)色透明或紅色。弗勞地枸櫞酸桿菌可產(chǎn)生硫化氫，在SS瓊脂上形成有黑色中心的菌落。本菌屬的部分生化特性和抗原結(jié)構(gòu)（O抗原）與沙門菌屬相似，應(yīng)注意鑒別1、形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無(wú)芽1502、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無(wú)鹽培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。在堿性蛋白胨水中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6-9h形成菌膜?！?.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長(zhǎng)，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤(rùn)，不透明，※在TCBS上，不發(fā)酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區(qū)別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤(rùn)，灰白色菌落，有β溶血?！赟S平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀2、培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適NaC151（3）營(yíng)養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，需加血液、血清。（4）該菌屬生化反應(yīng)不活潑。不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗(yàn)均陰性。氧化酶均為陽(yáng)性，大多數(shù)彎曲菌還能還原硝酸鹽，觸酶試驗(yàn)為陽(yáng)性，空腸彎曲菌馬尿酸水解試驗(yàn)陽(yáng)性。（5）耐寒，在4℃冰箱或水中可存活4周。（3）營(yíng)養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，需加血液、血清。152目錄一、腸桿菌科二、弧菌科三、非發(fā)酵革蘭陰性桿菌四、其他革蘭陰性苛養(yǎng)菌目錄一、腸桿菌科153腸桿菌科革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件154第一節(jié)概述革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件155腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細(xì)菌是一大群形態(tài)、生物學(xué)性狀相似，需氧或兼性厭氧的革蘭陰性桿菌或球桿菌在自然界中廣泛分布，可棲生在人和動(dòng)物的腸道內(nèi)，多數(shù)為條件致病菌，少數(shù)為致病菌致病菌：沙門菌、志賀菌、耶爾森菌等條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等與醫(yī)學(xué)的關(guān)系分類腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細(xì)菌是一大群1561）形態(tài)與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細(xì)菌，無(wú)芽孢，多數(shù)有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，少數(shù)細(xì)菌有莢膜或包膜，有致病性的菌株多數(shù)有菌毛共同特性1）形態(tài)與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細(xì)菌，無(wú)芽孢，多1572）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基如血瓊脂和麥康凱培養(yǎng)基上容易生長(zhǎng)，大部分菌屬在22~35℃生長(zhǎng)良好大腸埃希菌菌落特征（血平板）大腸埃希菌菌落特征（MAC）2）培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)158SS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑強(qiáng)選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌產(chǎn)酸桃紅色乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌無(wú)色乳糖不發(fā)酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖發(fā)酵中性紅呈紅色乳糖不發(fā)酵SS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）強(qiáng)選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌159EMB（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養(yǎng)基大腸埃希菌（非致病菌）乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸伊紅結(jié)合美藍(lán)形成紫黑色金屬光澤化合物有色的乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌等（致病菌）乳糖不發(fā)酵伊紅美藍(lán)不能結(jié)合無(wú)色的乳糖不發(fā)酵菌落EMB（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養(yǎng)基大腸埃1603)生化反應(yīng)

非?；顫姟０l(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、觸酶陽(yáng)性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽(yáng)性4）抗原結(jié)構(gòu)：O抗原菌體抗原H抗原菌毛抗原表面抗原3)生化反應(yīng)非常活潑。發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、1615）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應(yīng)變異、耐藥性變異6）抵抗力不強(qiáng)。加熱60℃30min既被殺死，對(duì)干燥、化學(xué)消毒劑敏感、耐低溫、耐膽鹽、煌綠（可抑制非致病菌）5）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應(yīng)變異162臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經(jīng)糞口傳播引起血流感染（二）腸道內(nèi)感染是人和動(dòng)物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等臨床意義（一）腸道外感染163微生物檢驗(yàn)KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋――微生物檢驗(yàn)KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋―164第二節(jié)埃希菌屬第二節(jié)埃希菌屬165埃希菌屬主要有5個(gè)種，1）大腸埃希菌臨床最常見2）蟑螂埃希菌3）弗格森埃希菌4）赫爾曼埃希菌5）傷口埃希菌革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)課件166一、生物學(xué)特性形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿狀，多數(shù)有周鞭毛和菌毛培養(yǎng)特性兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產(chǎn)生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數(shù)菌株可發(fā)酵乳糖，形成粉紅色菌落。在麥康凱平板上菌落呈粉紅色。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上呈有金屬光澤的紫黑色菌落。在液體培養(yǎng)基中，呈渾濁生長(zhǎng)一、生物學(xué)特性形態(tài)與染色為革蘭陰性短桿狀，多數(shù)有周鞭毛和167一、生物學(xué)特性生化反應(yīng)特征：發(fā)酵多種糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣KIA產(chǎn)酸/