試驗(yàn)三未知臨床標(biāo)本的分離鑒定設(shè)計(jì)性試驗(yàn)課件

標(biāo)本中未知腸道感染細(xì)菌

的分離鑒定程序

標(biāo)本中未知腸道感染細(xì)菌

的分離鑒定程序1標(biāo)本膿血便、肛拭子選擇/鑒別培基生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定克氏雙糖鐵培養(yǎng)基,動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基玻片凝集試驗(yàn)SS平板,中國(guó)蘭,EMB平板標(biāo)本膿血便、肛拭子選擇/鑒別培基生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定克氏雙糖鐵2標(biāo)本中未知病原性球菌

的分離鑒定程序

標(biāo)本中未知病原性球菌

的分離鑒定程序3

直接涂片染色鏡檢：觀察細(xì)菌形態(tài)、排列、染色性觀察菌落性狀、溶血性、色素血瓊脂平板涂片、染色、鏡檢挑取可疑菌落生化反應(yīng)測(cè)定純培養(yǎng)致病性測(cè)定

（凝固酶、耐熱核酸酶）標(biāo)本血液腦脊液肉湯增菌培養(yǎng)涂片染色鏡檢標(biāo)本血液肉湯增菌培養(yǎng)涂片染色鏡檢4設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)臨床標(biāo)本中病原菌的分離與鑒定設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)臨床標(biāo)本中病原菌的分離與鑒定5設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)1.膿汁標(biāo)本：膿拭子培養(yǎng)基：血瓊脂平板其他：3%H2O2、兔血漿、生理鹽水、革蘭染液、玻片等2.痰標(biāo)本：咽拭子培養(yǎng)基：血瓊脂平板其他：生理鹽水、10%膽鹽、革蘭染液、玻片等設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)1.膿汁63.尿標(biāo)本：尿液培養(yǎng)基：伊紅美蘭瓊脂平板、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基、動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基其他：革蘭染液、靛基質(zhì)試劑、玻片等4.糞便標(biāo)本：肛門拭子培養(yǎng)基：伊紅美蘭瓊脂平板、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基、動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基其他：生理鹽水、靛基質(zhì)試劑、沙門菌多價(jià)血清、志賀菌多價(jià)血清、玻片等3.尿7膿拭子分離培養(yǎng)（血平板）革蘭染色革蘭染色觸酶實(shí)驗(yàn)血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)?zāi)撌米臃蛛x培養(yǎng)革蘭染色革蘭染色觸酶實(shí)驗(yàn)血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)8咽拭子革蘭染色革蘭染色膽汁溶菌試驗(yàn)奧普托辛試驗(yàn)

莢膜染色（石炭酸復(fù)紅單染）分離培養(yǎng)（血平板）咽拭子革蘭染色革蘭染色膽汁溶菌試驗(yàn)莢膜染色分9尿液

離心沉淀1500轉(zhuǎn)，10分鐘分離培養(yǎng)（EMB平板）革蘭染色革蘭染色克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基觀察結(jié)果觀察結(jié)果觀察結(jié)果完成靛基質(zhì)試驗(yàn)?zāi)蛞弘x心沉淀分離培養(yǎng)革蘭染色革蘭染色克氏雙糖鐵斜10肛門拭子1/2EMB平板克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基觀察結(jié)果觀察結(jié)果完成靛基質(zhì)試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn)肛門拭子1/2EMB平板克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿111.EMB平板（伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基）組成：無糖培養(yǎng)基＋乳糖＋伊紅＋美藍(lán)底物指示劑、抑菌劑原理：細(xì)菌乳糖產(chǎn)酸：伊紅＋美藍(lán)紫黑/紫紅結(jié)果：分解乳糖細(xì)菌菌落變黑，有金屬光澤不分解乳糖細(xì)菌菌落無色、半透明（粉色）分解培養(yǎng)基原理1.EMB平板（伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基）分解培養(yǎng)基原理12EMBagarEMBagar132.靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）組成：蛋白胨水＋色氨酸原理：分解某些細(xì)菌有色氨酸酶色氨酸吲哚（無色）＋柯氏試劑玫瑰吲哚（紅色）結(jié)果：液面形成玫瑰紅色2.靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）14吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)153.克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應(yīng)試驗(yàn)組成：無糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋鐵鹽＋酚紅營(yíng)養(yǎng)底物底物底物指示劑原理：只分解葡萄糖產(chǎn)酸（葡萄糖少，產(chǎn)酸量少）分解葡萄糖＋乳糖產(chǎn)酸（乳糖多，產(chǎn)酸多）上下層均為黃色產(chǎn)生H2S＋鐵鹽FeS培養(yǎng)基成黑色上層氧化呈紅色下層缺氧不氧化呈黃色3.克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應(yīng)試驗(yàn)上層氧化呈紅色16DoublesugerironslantDoublesugerironslant174.尿素培養(yǎng)基組成：基礎(chǔ)培基＋尿素＋酚紅底物指示劑原理：有些細(xì)菌產(chǎn)生尿素酶分解尿素產(chǎn)氨結(jié)果：分解尿素培基變紅不分解尿素培基不變色4.尿素培養(yǎng)基18UreaslantUreaslant19肥達(dá)試驗(yàn)(4人/組)材料：病人未知血清：1#，2#，3#菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）每組1塊多孔板，標(biāo)記每人2支吸管肥達(dá)試驗(yàn)(4人/組)材料：病人未知血清：1#，2#，3#20123456OAgHAgPAHPBH123456OAgHAgPAHPBH21

123456 NS（ml）0.50.50.50.50.50.5 未知血清0.50.50.50.50.5(1:10)1:201:401:801:1601:320 菌液(搖勻) 0.50.50.50.50.50.5(4種，1種/人)1:40

1:80

1:160

1:320

1:640

(陰性對(duì)照)

37℃水浴過夜方法棄0.5ml于消毒缸 方法棄0.5ml于消毒缸22肥達(dá)試驗(yàn)H凝集：絮狀，以疏松大團(tuán)沉于管底O凝集：顆粒狀，以堅(jiān)實(shí)凝片沉于管底凝集程度的判定以“＋”、“－”號(hào)表示＋＋＋＋上清完全透明，細(xì)菌全部形成凝集塊＋＋＋細(xì)菌絕大多數(shù)凝集，液體有輕度混濁＋＋50％細(xì)菌形成凝集，液體半澄清＋僅少數(shù)細(xì)菌凝集，液體比較混濁－液體均勻混濁，無凝集（沉于管底，形成圓形沉淀，邊緣整齊）肥達(dá)試驗(yàn)H凝集：絮狀，以疏松大團(tuán)沉于管底23以呈現(xiàn)＋＋凝集的血清最高稀釋度作為該血清的凝集效價(jià)1234561:401:801:1601:3201:640對(duì)照O++++++++---H+++++++++++--PAH+++----PBH+-----肥達(dá)試驗(yàn)以呈現(xiàn)＋＋凝集的血清最高稀釋度作為該血清的凝集效價(jià)肥達(dá)試驗(yàn)24肥達(dá)反應(yīng)

12345O1:1601:3201:1601:401:40H1:3201:801:801:801:320PAH1:40-1:3201:801:320PBH-1:801:801:401:320PCH---1:40-傷寒傷寒早期副甲陰性回憶反應(yīng)／疫苗接種肥達(dá)反應(yīng)1225腸道桿菌的血清學(xué)試驗(yàn)（玻片凝集試驗(yàn)）材料1.菌種：傷寒桿菌培養(yǎng)物、痢疾桿菌培養(yǎng)物2.傷寒桿菌的診斷血清，志賀菌診斷血清、載玻片、生理鹽水方法血清生理鹽水腸道桿菌的血清學(xué)試驗(yàn)（玻片凝集試驗(yàn)）材料血清生理鹽水26試驗(yàn)三未知臨床標(biāo)本的分離鑒定設(shè)計(jì)性試驗(yàn)課件27標(biāo)本中未知腸道感染細(xì)菌

的分離鑒定程序

標(biāo)本中未知腸道感染細(xì)菌

的分離鑒定程序28標(biāo)本膿血便、肛拭子選擇/鑒別培基生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定克氏雙糖鐵培養(yǎng)基,動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基玻片凝集試驗(yàn)SS平板,中國(guó)蘭,EMB平板標(biāo)本膿血便、肛拭子選擇/鑒別培基生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定克氏雙糖鐵29標(biāo)本中未知病原性球菌

的分離鑒定程序

標(biāo)本中未知病原性球菌

的分離鑒定程序30

直接涂片染色鏡檢：觀察細(xì)菌形態(tài)、排列、染色性觀察菌落性狀、溶血性、色素血瓊脂平板涂片、染色、鏡檢挑取可疑菌落生化反應(yīng)測(cè)定純培養(yǎng)致病性測(cè)定

（凝固酶、耐熱核酸酶）標(biāo)本血液腦脊液肉湯增菌培養(yǎng)涂片染色鏡檢標(biāo)本血液肉湯增菌培養(yǎng)涂片染色鏡檢31設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)臨床標(biāo)本中病原菌的分離與鑒定設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)臨床標(biāo)本中病原菌的分離與鑒定32設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)1.膿汁標(biāo)本：膿拭子培養(yǎng)基：血瓊脂平板其他：3%H2O2、兔血漿、生理鹽水、革蘭染液、玻片等2.痰標(biāo)本：咽拭子培養(yǎng)基：血瓊脂平板其他：生理鹽水、10%膽鹽、革蘭染液、玻片等設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)1.膿汁333.尿標(biāo)本：尿液培養(yǎng)基：伊紅美蘭瓊脂平板、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基、動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基其他：革蘭染液、靛基質(zhì)試劑、玻片等4.糞便標(biāo)本：肛門拭子培養(yǎng)基：伊紅美蘭瓊脂平板、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基、動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基其他：生理鹽水、靛基質(zhì)試劑、沙門菌多價(jià)血清、志賀菌多價(jià)血清、玻片等3.尿34膿拭子分離培養(yǎng)（血平板）革蘭染色革蘭染色觸酶實(shí)驗(yàn)血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)?zāi)撌米臃蛛x培養(yǎng)革蘭染色革蘭染色觸酶實(shí)驗(yàn)血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)35咽拭子革蘭染色革蘭染色膽汁溶菌試驗(yàn)奧普托辛試驗(yàn)

莢膜染色（石炭酸復(fù)紅單染）分離培養(yǎng)（血平板）咽拭子革蘭染色革蘭染色膽汁溶菌試驗(yàn)莢膜染色分36尿液

離心沉淀1500轉(zhuǎn)，10分鐘分離培養(yǎng)（EMB平板）革蘭染色革蘭染色克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基觀察結(jié)果觀察結(jié)果觀察結(jié)果完成靛基質(zhì)試驗(yàn)?zāi)蛞弘x心沉淀分離培養(yǎng)革蘭染色革蘭染色克氏雙糖鐵斜37肛門拭子1/2EMB平板克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基觀察結(jié)果觀察結(jié)果完成靛基質(zhì)試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn)肛門拭子1/2EMB平板克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿381.EMB平板（伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基）組成：無糖培養(yǎng)基＋乳糖＋伊紅＋美藍(lán)底物指示劑、抑菌劑原理：細(xì)菌乳糖產(chǎn)酸：伊紅＋美藍(lán)紫黑/紫紅結(jié)果：分解乳糖細(xì)菌菌落變黑，有金屬光澤不分解乳糖細(xì)菌菌落無色、半透明（粉色）分解培養(yǎng)基原理1.EMB平板（伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基）分解培養(yǎng)基原理39EMBagarEMBagar402.靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）組成：蛋白胨水＋色氨酸原理：分解某些細(xì)菌有色氨酸酶色氨酸吲哚（無色）＋柯氏試劑玫瑰吲哚（紅色）結(jié)果：液面形成玫瑰紅色2.靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）41吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)423.克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應(yīng)試驗(yàn)組成：無糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋鐵鹽＋酚紅營(yíng)養(yǎng)底物底物底物指示劑原理：只分解葡萄糖產(chǎn)酸（葡萄糖少，產(chǎn)酸量少）分解葡萄糖＋乳糖產(chǎn)酸（乳糖多，產(chǎn)酸多）上下層均為黃色產(chǎn)生H2S＋鐵鹽FeS培養(yǎng)基成黑色上層氧化呈紅色下層缺氧不氧化呈黃色3.克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應(yīng)試驗(yàn)上層氧化呈紅色43DoublesugerironslantDoublesugerironslant444.尿素培養(yǎng)基組成：基礎(chǔ)培基＋尿素＋酚紅底物指示劑原理：有些細(xì)菌產(chǎn)生尿素酶分解尿素產(chǎn)氨結(jié)果：分解尿素培基變紅不分解尿素培基不變色4.尿素培養(yǎng)基45UreaslantUreaslant46肥達(dá)試驗(yàn)(4人/組)材料：病人未知血清：1#，2#，3#菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）每組1塊多孔板，標(biāo)記每人2支吸管肥達(dá)試驗(yàn)(4人/組)材料：病人未知血清：1#，2#，3#47123456OAgHAgPAHPBH123456OAgHAgPAHPBH48

123456 NS（ml）0.50.50.50.50.50.5 未知血清0.50.50.50.50.5(1:10)1:201:401:801:1601:320 菌液(搖勻) 0.50.50.50.50.50.5(4種，1種/人)1:40

1:80

1:160

1:320

1:640

(陰性對(duì)照)

37℃水浴過夜方法棄0.5ml于消毒缸 方法棄0.5ml于消毒缸49肥達(dá)試驗(yàn)H凝集：絮狀，以疏松大團(tuán)沉于管底O凝集：顆粒狀，以堅(jiān)實(shí)凝片沉于管底凝集程度的判定以“＋”、“－”號(hào)表示＋＋＋＋上清完全透明，細(xì)菌全部形成凝集塊＋＋＋細(xì)菌絕大多數(shù)凝集，液體有輕度混濁＋＋50％細(xì)菌形成凝集，液體半澄清＋僅少數(shù)細(xì)菌凝集，液體比較混濁－液體均勻混濁，無凝集（沉于管底，形成圓形沉淀，邊緣整齊）肥達(dá)試驗(yàn)H凝集：絮狀，以疏松大團(tuán)沉于管底50以呈現(xiàn)＋＋凝集的血清最高稀釋度作為該血清的凝集效價(jià)12345