HTRF技術(shù)原理和應(yīng)用介紹

Cisbio-HTRF?技術(shù)原理和應(yīng)用簡介HTRF?（均相時間分辨熒光，HomogeneousTime-ResolvedFluorescence）是一種用來檢測純液相體系中待測物的技術(shù)。該技術(shù)基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET，F(xiàn)luorescenceResonanceEnergyTransfer）和時間分辨熒光（TRF,Time-ResolvedFluorescence））兩大技術(shù)，開通的一款高通量藥物篩選利器。熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）利用兩種熒光基團(tuán)的能量轉(zhuǎn)移，這兩種熒光基團(tuán)分別稱為能量供體（Donor）和能量受體（Acceptor）。Donor被外來光源激發(fā)（例如氙燈或激光），如果它與Acceptor比較接近，可以將能量共振轉(zhuǎn)移到在Acceptor上，使其受到激發(fā)，發(fā)出特定波長的發(fā)射光。將Donor和Acceptor分別與相互作用的兩個生物分子結(jié)合，生物分子的結(jié)合可以將Donor和Acceptor拉到足夠近的距離，產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移，由于Acceptor的發(fā)射光來自能量轉(zhuǎn)移，所以實驗中不需要將未結(jié)合與已結(jié)合的分子分開，即不需要洗滌步驟。時間分辨熒光（TRF）TRF利用稀土元素中鑭系元素的獨特性質(zhì)，它們與普通熒光的主要區(qū)別是熒光的持續(xù)時間不同。普通熒光的半衰期為納秒級。鑭系元素的半衰期為毫秒級，有6個數(shù)量級的差別。所以，在檢測室，TRF有一個時間延遲---50us,經(jīng)過這個時間延遲，普通熒光的信號幾乎為零，所以，TRF的背景非常低，反映樣品實際情況。mensityinnetimedeiaymeasuremernwindowenergyputu的背景非常低，反映樣品實際情況。mensityinnetimedeiaymeasuremernwindowenergyputumalrfxHTRF?的能量受體（技術(shù)創(chuàng)新點）HTRF?的能量供體是銪（Eu）和鈦（Tb）的穴狀化合物。在這個穴狀化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一個籠子里，結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定，這個結(jié)構(gòu)由J.M.Lehn's教授發(fā)明的，并由此在1987年獲得了諾貝爾獎。HTRF?的能量受體HTRF?的能量受體也有二種,XL665和d2.它們的光學(xué)性質(zhì)相同，分子量不同，前者分子量為10KD,實際上就是別藻藍(lán)蛋白（APC）。我們將APC的亞基偶聯(lián)在一起，使其不能解離，提高了穩(wěn)定性，后者分子量為1KD,在某些實驗中有獨特的優(yōu)勢。HTRF?的操作步驟HTRF?操作步驟非常簡單，只需要將實驗所需試劑加進(jìn)去，然后孵育，檢測即可。瀆數(shù)HTRF?的操作步驟HTRF?操作步驟非常簡單，只需要將實驗所需試劑加進(jìn)去，然后孵育，檢測即可。瀆數(shù)厶刺激細(xì)胞3-裂解細(xì)胞加人HTRF?■試劑檢測步驟r刺激步驟轉(zhuǎn)扳HTRF?實驗數(shù)據(jù)分析HTRF?采用了比值法來處理數(shù)據(jù)，可以去除溶液通透率、細(xì)胞大小、細(xì)胞數(shù)量不同引起的誤差。

HTRF?應(yīng)用范圍G蛋白偶聯(lián)受體研究激酶活性檢測生物標(biāo)志物檢測受體第二信使檢測受體配體結(jié)合胞內(nèi)信號分子檢測胞外激酶活性檢測胞內(nèi)激酶活性檢測基于抗體的夾心法和競爭法檢測抗體檢測生物/免疫過程分析免疫檢杳點檢測抗體重鏈含量檢測抗體輕鏈含量測定GST含量測定CD16結(jié)合檢測HIS含量測定CD32結(jié)合檢測CHO宿主蛋白含量測定CD64結(jié)合檢測PD1/PD-L1CTLA4/B7-1LAG3/MHCIICD47/SIRPalphaCTLA4/B7-2AdenosinA2A相互作用分析蛋白修飾實驗室服務(wù)蛋白-蛋白/蛋白-多肽蛋白-DNA/蛋白-RNA蛋白甲基化/蛋白乙?；鞍追核鼗?蛋白水解HTRF?技術(shù)優(yōu)勢:1?操作簡單，空板直接加樣，加完即可檢測，時間短（加樣和孵育2h）!2.適合珍貴樣本：整個實驗體系只需20ul3?均相檢測：無需包被，免洗ELISA,省時省力4?體系穩(wěn)定：7天內(nèi)可隨時檢測，信號基本不變5?數(shù)據(jù)客觀真實：比值處理可有效去除背景熒光，假陽性率和價陰性率低6?高端檢測，只需簡單的酶標(biāo)儀就可以輕松搞定！HTRF?檢測的儀器Cisbio與幾乎所有的儀器供應(yīng)商都建立了合作伙伴關(guān)系，下面是經(jīng)過驗證的儀器列表:MOLECULARDEVICESMOLECULARDEVICES+BMGTLRBTE匚HPHE^AstarFSCLARIOstarPHERAstarPlusFLUOstarOmegaPOL\RstarOmegaKBiofekSvnerqvNEO2Cvtation5Cvtation3SvnerqvH1Svnerqv2

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