地貧小鼠模型課件_第1頁
地貧小鼠模型課件_第2頁
地貧小鼠模型課件_第3頁
地貧小鼠模型課件_第4頁
地貧小鼠模型課件_第5頁
已閱讀5頁，還剩4頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

建立地中海貧血小鼠模型的實驗方案血液內(nèi)科賴穎暉背景β－地中海貧血是一種廣西常見的遺傳性慢性貧血性疾病，目前尚難根治。對于β－地中海貧血治療的研究，需要合適的動物模型用于臨床前研究。國際上有報道用轉(zhuǎn)基因、基因敲除的地貧小鼠模型，但價格昂貴且國內(nèi)難以獲得。實驗方案設想將β－地中海貧血患者的骨髓，移植給經(jīng)致死劑量照射的NOD/SCID小鼠（非肥胖糖尿病/重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠），重建小鼠造血，從而建立人源化的β－地中海貧血小鼠模型。材料和方法（二）人-鼠異種骨髓移植：無菌抗凝的β－地中海貧血患者骨髓樣本5-10ml在采集后4小時內(nèi)處理。密度梯度離心法分離MNC。將分離好的骨髓MNC制備成合適體積，采樣行單個核細胞計數(shù)、臺盼藍拒染率及CD34+細胞百分率測定，小鼠TBI后4-6小時從尾靜脈輸入0.5ml/只，移植組小鼠輸注骨髓MNC（>8×106個），照射對照組輸注1640液，正常對照組不注射。材料和方法（三）觀察指標：1、照射及移植后觀察其存活率及毛色、食欲、精神狀態(tài)等一般狀況。２、移植前及移植后檢測小鼠的血象（斷尾采血，每周１次）。３、移植５周后采血行血紅蛋白電泳（地貧檢測），與未照射移植小鼠比較。材料和方法（四）人源化（植入證據(jù)）的檢測：①人-CD45＋細胞檢測：活存小鼠在移植5周后處死，取其骨髓細胞，取樣進行流式細胞儀分析。以Cy-ChromeTM–IgG1作為陰性對照，用PE-cy5標記的抗人-CD45單抗檢測人白細胞含量。②人Cart-1基因的聚合酶鏈反應（PCR）檢測：以酚/氯仿法從小鼠骨髓細胞提取DNA。PCR檢測時用人外周血白細胞基因組DNA作陽性對照，正常NOD/SCID小鼠骨髓細胞基因組DNA作陰性對照。Cart-1基因僅位于人Cart-1基因3’-非翻譯區(qū)，與小鼠無同源性。該動物模型的難點１、模型為人-鼠異種移植模型，是一嵌合體，人源化的比例可能不高。擬采取致死量照射、分次照射、降低照射劑量率、分次移植等措施以盡可能地提高人源化的比例。２、模型的穩(wěn)定性。除了盡可能地保證各種處理措施的穩(wěn)定，小鼠本身的個體差異難以控制。

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論