萎縮性牙槽骨實(shí)驗(yàn)動物模型的建立

萎縮性牙槽骨實(shí)驗(yàn)動物模型的建立陳磊，謝琳(山東省淄博市臨淄區(qū)人民醫(yī)院口腔科，山東淄博255400)[摘要]目的：建立萎縮性牙槽骨的實(shí)驗(yàn)動物模型。方法：選用健康純系雄性比格犬(Beagle)12只，每只比格犬的下頜左右兩側(cè)牙槽骨分別為實(shí)驗(yàn)側(cè)和對照側(cè)。實(shí)驗(yàn)側(cè)拔除下頜第2前磨牙，并降低牙槽嵴高度及頰側(cè)牙槽嵴寬度，模擬萎縮性牙槽骨模型;對照側(cè)僅拔除下頜第2前磨牙。結(jié)果：采用此方法成功建立了萎縮性牙槽骨模型。結(jié)論：以比格犬為實(shí)驗(yàn)對象，采用模擬骨皮質(zhì)剝離術(shù)，可建立萎縮性牙槽骨的實(shí)驗(yàn)動物模型。[關(guān)鍵詞]牙槽骨;動物實(shí)驗(yàn);比格犬隨著人們生活水平的提高，成人正畸患者呈現(xiàn)增長的趨勢，成人正畸成為正畸醫(yī)生越來越關(guān)注的問題。但成人與青少年正畸有很大不同，口腔內(nèi)常存在牙齒缺失、牙周病、牙槽骨吸收萎縮等病癥。伴有牙槽骨萎縮的成人在正畸治療中牙齒的移動狀態(tài)及牙周組織的變化是正畸醫(yī)師需關(guān)注的問題。因此，本實(shí)驗(yàn)選用純種比格犬作為實(shí)驗(yàn)動物，將其下頜第2前磨牙拔除后，通過去除部分牙槽骨，模擬成人牙槽骨萎縮的情況，建立牙槽骨萎縮的實(shí)驗(yàn)動物模型，為以后的相關(guān)研究奠定實(shí)驗(yàn)條件和基礎(chǔ)。1資料與方法1.1一般資料：實(shí)驗(yàn)動物選用健康純系雄性比格犬(Beagle)12只，[北京市園藝實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2003-0002]。犬齡15個月，體重10～12kg，經(jīng)過口內(nèi)及X線檢查排除牙齒、牙齦及牙槽骨病變。飼養(yǎng)方式：兩餐/d定時飼喂;術(shù)前注射狂犬病疫苗，培養(yǎng)軟食習(xí)慣，認(rèn)知實(shí)驗(yàn)者。1.2麻醉藥品：速眠新Ⅱ注射液(軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所)，鹽酸氯氨酮注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)，阿替卡因腎上腺素注射液(法國必蘭公司)。1.3實(shí)驗(yàn)過程1.3.1麻醉及術(shù)前準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)犬實(shí)驗(yàn)前6h禁食，分別稱取12只實(shí)驗(yàn)動物體重，采用速眠新Ⅱ注射液和鹽酸氯胺酮注射液按1:1的比例后腿肌內(nèi)注射行全身麻醉，劑量為：速眠新0.08ml/kg體重，鹽酸氯胺酮2.0mg/kg體重。麻醉效果按以下4個等級記錄：優(yōu)：動物犬呼吸平順，四肢軀體痛覺刺激無反應(yīng);良：動物犬呼吸稍快，四肢軀體痛覺刺激有輕度反應(yīng)，有輕度呻吟聲，可繼續(xù)進(jìn)行手術(shù);差：動物犬大聲呻吟，四肢軀體痛覺刺激有明顯反應(yīng)，四肢軀體扭動，影響手術(shù)操作，需追加麻醉藥才能繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn);死亡：動物犬心跳、呼吸停止[1]。全身麻醉成功后，先行比格犬雙側(cè)下頜骨螺旋CT掃描，并進(jìn)行CT三維重建。1.3.2制取動物牙列石膏模型：①制作個別托盤：將印模膏置于70℃水中軟化后，置入單側(cè)托盤，放入比格犬口內(nèi)制取初印模。修整初印模再次放入比格犬口內(nèi)試合后作為個別托盤;②制作終印模：利用制作好的個別托盤，制取比格犬下頜牙齒藻酸鹽印模，并用超硬石膏灌注模型，要求模型最低厚度為10mm。取兩付。1.3.3手術(shù)過程：實(shí)驗(yàn)犬在全身麻醉成功后，用1%碘酊棉球消毒術(shù)區(qū)。分別用阿替卡因腎上腺素注射液0.3ml行雙側(cè)下頜第2前磨牙頰舌側(cè)浸潤麻醉，分離牙齦，拔除第2前磨牙。隨機(jī)將下頜左右分為實(shí)驗(yàn)側(cè)和對照側(cè)。然后在實(shí)驗(yàn)側(cè)沿下頜第2前磨牙遠(yuǎn)中牙槽嵴頂向前庭溝或口底方向做梯形切口全層切開，剝離頰舌側(cè)黏骨膜，充分暴露拔牙區(qū)牙槽骨。在生理鹽水持續(xù)滴注降溫的情況下，在拔牙區(qū)牙槽骨頰舌側(cè)骨皮質(zhì)上做幾條深2mm的引導(dǎo)溝，然后用鎢鋼磨頭均勻磨除骨皮質(zhì)及部分骨松質(zhì)2mm，降低牙槽骨的高度和寬度，模擬牙缺失后牙槽骨萎縮的狀態(tài)。去骨后，拔牙區(qū)的牙槽骨的寬度要小于第3前磨牙牙根頰舌徑的寬度。在用生理鹽水沖洗手術(shù)創(chuàng)面后，縫合牙齦切口。對照側(cè)僅拔牙即可，不做牙槽骨的處理。在牙槽骨的磨除過程中要低速磨除并且嚴(yán)格在生理鹽水滴注降溫的情況下進(jìn)行，以免在磨除骨質(zhì)的過程中產(chǎn)熱對局部牙槽骨造成損傷，影響后期牙移動實(shí)驗(yàn)中牙槽骨的改建。再次行比格犬雙側(cè)下頜骨CT掃描并重建。1.4術(shù)后處理：實(shí)驗(yàn)犬術(shù)后給予保暖，側(cè)臥，嚴(yán)密觀察動物生命體征變化，直至完全清醒。術(shù)后第1天給予半流質(zhì)飲食，第2天改為軟食，每天肌內(nèi)注射慶大霉素4萬U，連用3d預(yù)防感染。2結(jié)果2.1麻醉效果：實(shí)驗(yàn)犬12只，麻醉最快誘導(dǎo)時間為8min，最慢為15min，平均為12min。麻醉效果為優(yōu)者10條，占83%;良者2條，占17%。12只實(shí)驗(yàn)動物均耐受手術(shù)，無一例出現(xiàn)拔牙創(chuàng)感染。2.2CT結(jié)果顯示：拔牙區(qū)牙槽骨的寬度小于第3前磨牙牙根頰舌徑的寬度，成功建立了牙槽骨萎縮。3討論3.1麻醉藥品及麻醉方法的選擇：在動物實(shí)驗(yàn)中，需要在短時間內(nèi)使實(shí)驗(yàn)犬進(jìn)入麻醉狀態(tài)，過去常用的方法是戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射，此法注射簡便，但誘導(dǎo)時間長，麻醉效果各犬差異性大，一旦用量不夠，追加藥物則誘導(dǎo)時間更長，提高了死亡率;另一種方法為靜脈推注，此種方法優(yōu)點(diǎn)是，誘導(dǎo)時間短，入睡快，但技術(shù)操作要求高，且犬易傷人且維持時間短，常要追加藥物導(dǎo)致麻醉不穩(wěn)定從而影響操作。所以采用肌內(nèi)注射進(jìn)行麻醉，此種方法對大批量實(shí)驗(yàn)用犬是最為理想的麻醉方法，且操作簡便，易于掌握。單純速眠新肌內(nèi)注射麻醉，克服了腹腔內(nèi)和靜脈推注的不足，麻醉誘導(dǎo)時間短(5.4±3.1)min，但藥物維持時間也短(36.0±3.5)min，且麻醉用藥超過推薦劑量(1.9±0.2)ml/只。氯胺酮是一具有鎮(zhèn)痛作用的靜脈全身麻醉藥。氯胺酮在靜脈麻醉藥中，鎮(zhèn)痛效果良好，且對循環(huán)系統(tǒng)有交感興奮作用，對呼吸系統(tǒng)影響輕微，在這個意義上講，氯胺酮明顯優(yōu)于硫噴妥鈉、異丙酚等藥;但缺點(diǎn)是麻醉中肌肉緊張、蘇醒期有致幻等不良反應(yīng)。氯胺酮的劑量臨床上變異較大，單次靜脈推注一般按1～2mg/kg計(jì)算，肌內(nèi)注射4～5mg/kg，必要時追加首次劑量的1/2～2/3。速眠新與氯胺酮復(fù)合麻醉誘導(dǎo)期短(平均12min)，藥物維持時間長(平均70min)，且用量減少到速眠新為推薦劑量，氯胺酮為半推薦劑量。同時鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、肌肉松弛度好，便于手術(shù)操作，麻醉安全平穩(wěn)。顯效時間快和較長的麻醉維持時間對實(shí)施動物實(shí)驗(yàn)非常有利，根據(jù)速眠新和氯胺酮復(fù)合麻醉的特點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)犬全身麻醉情況下進(jìn)行骨剝離術(shù)，均取得良好效果。3.2實(shí)驗(yàn)動物的選擇：正確選擇適合研究需要的實(shí)驗(yàn)動物是獲得正確實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)和關(guān)鍵。目前常用的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物的種類有多種，如大鼠、貓、家兔、小型豬、犬以及靈長類猴子等[2-3]。有學(xué)者用雜種犬作為實(shí)驗(yàn)動物，但雜種犬由于種系的不同，其對處理措施的反應(yīng)可能會存在差異，因此可能會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定影響。近交系動物是經(jīng)過至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成的動物，其近交系數(shù)達(dá)98.6%。此類動物由于遺傳同基因型，個體間的表現(xiàn)型均一。故在實(shí)驗(yàn)中只使用少量標(biāo)準(zhǔn)的近交系動物，即可得到可靠的結(jié)果。又由于長期的遺傳穩(wěn)定性，有能跨越時間重復(fù)實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)。比格犬又稱米格魯獵犬，英文名：Beagle。應(yīng)用比格犬進(jìn)行的動物實(shí)驗(yàn)的研究成果被國際公認(rèn)，是標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)用犬。比格犬為哺乳類雜食動物，頜骨和牙槽骨密度與人類接近，牙周組織也與人類相似[4]。比格犬易于馴養(yǎng)，飲食要求不高，抗病和耐受力強(qiáng)，能夠承受多次麻醉，能夠配合口腔衛(wèi)生清潔及矯治裝置的常規(guī)檢查。因此，本實(shí)驗(yàn)選用純系雄性比格犬作為實(shí)驗(yàn)動物。這樣充分保證了實(shí)驗(yàn)動物性別、年齡、體重等基本條件以及種系的一致性，使實(shí)驗(yàn)動物對所施加的矯治力反應(yīng)更趨于一致，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。3.3拔牙部位的選擇：本實(shí)驗(yàn)中由于需要去除拔牙區(qū)部分牙槽骨，建立牙槽骨萎縮的實(shí)驗(yàn)動物模型，因此要考慮實(shí)驗(yàn)區(qū)牙槽嵴的寬度和高度要符合實(shí)驗(yàn)要求，同時由于后期還要進(jìn)行牙移動的實(shí)驗(yàn)研究，因此也要考慮支抗的問題。犬的尖牙粗大，根粗壯，可以作為支抗牙。第1、2前磨牙體積較小，在其上制作矯治器固位裝置，牙移動實(shí)驗(yàn)中固位裝置易于脫落。因此本實(shí)驗(yàn)中選擇拔除比格犬下頜雙側(cè)第2前磨牙，磨除拔牙區(qū)頰舌側(cè)骨皮質(zhì)及部分骨松質(zhì)，以建立牙齒缺失后牙槽骨萎縮的實(shí)驗(yàn)動物模型。3.4研究意義：在成人正畸患者中最常見的引起牙槽骨萎縮的病因是牙齒缺失和牙周病。牙齒缺失后，剩余的牙槽骨因得不到咀嚼的刺激，會因功能減退或功能缺失而引起牙槽骨萎縮。隨著缺牙時間的延長，萎縮逐漸加重。通過本研究，建立牙槽骨萎縮的實(shí)驗(yàn)動物模型，為后期進(jìn)行牙移動的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。3.5牙槽骨萎縮的建模方法：在模擬牙槽骨萎縮的動物實(shí)驗(yàn)中，有學(xué)者選用比格犬作為實(shí)驗(yàn)動物，拔除其第4前磨牙，去除牙槽骨至第3前磨牙骨高度的一半，然后移動第3前磨牙向遠(yuǎn)中，建立牙槽骨萎縮牙移動的動物模型。本實(shí)驗(yàn)中，在拔除第2前磨牙后，磨除拔牙區(qū)牙槽嵴頰舌側(cè)骨皮質(zhì)及部分骨松質(zhì)，以降低牙槽骨的高度和寬度，然后移動第3前磨牙向近中，建立牙槽骨萎縮牙移動的動物模型。去骨后，使缺牙區(qū)的牙槽嵴的寬度要小于第3前磨牙牙根頰舌徑的寬度，模擬了牙缺失后牙槽骨萎縮的狀態(tài)。建立牙槽骨萎縮的實(shí)驗(yàn)動物模型是進(jìn)行牙齒移動實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)準(zhǔn)備部分，本實(shí)驗(yàn)選用15個月齡的純系雄性比格犬作為實(shí)驗(yàn)動物，拔除雙側(cè)下頜第2前磨牙，磨除拔牙區(qū)骨皮質(zhì)及部分骨松質(zhì)，經(jīng)螺旋CT掃描并進(jìn)行三維重建，結(jié)果顯示拔牙區(qū)牙槽骨的寬度小于第3前磨牙牙根頰舌徑的寬度，成功建立了牙槽骨萎縮的實(shí)驗(yàn)動物模型，為后期進(jìn)行萎縮性牙槽骨牙移動的動物實(shí)驗(yàn)研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。4參考文獻(xiàn)[1]鄺昌賢,林少芒,陳德.三種麻醉方法在動物犬手術(shù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的效果觀察[J].廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)社科版,2004,32(1):73.[2]RenY,MalthaJC.Optimumforcemagnitudefororthodontictoothmovement:asystematicliteraturereview[J].AngleOrthod,2003,73(1):86.[3]