項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!項目導(dǎo)入：

Vero細(xì)胞和狂犬病毒的培養(yǎng)工藝DMEM培養(yǎng)基胎牛血清其他成分錐形瓶逐級放大培養(yǎng)加堿（碳酸氫鈉）加糖（葡萄糖）灌注培養(yǎng)液微載體5L種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)液50L生物反應(yīng)器接種狂犬病毒出液口收獲病毒項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、動物細(xì)胞核移植等動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。提問：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。1、選材：

動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細(xì)胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!3.動物細(xì)胞生長特性：細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：

培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系5.如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長增殖項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!2.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質(zhì)（2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!（二）動物細(xì)胞融合1.過程：誘導(dǎo)方式物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒仙臺病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目植物、動物細(xì)胞融合的比較項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!(三）單克隆抗體設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖-化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。雜種細(xì)胞項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!除通過雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生單克隆抗體外，還有什么方法？項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!總結(jié)一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一種新細(xì)胞滅活病毒雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù):將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!6.世界上只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細(xì)看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細(xì)胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細(xì)胞工程ａ時，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細(xì)胞也具有

。⑸請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義：。項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!2..動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞3.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）誘導(dǎo)融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細(xì)胞BD項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是--------------------（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是------（）

A.動物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動物細(xì)胞培養(yǎng)

AD項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!4.動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）

A.培養(yǎng)基不同；

B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；

C.動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；

D.動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。A項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!3、單克隆抗體制備過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理4、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合制備單克隆抗體？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!在進行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。2.分散成單個細(xì)胞項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!4.過程：項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞增值無限傳代去掉組織間蛋白動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清（一）動物細(xì)胞培養(yǎng)動物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!（二）動物細(xì)胞融合1.過程：滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動性）項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!(三）單克隆抗體抗體1?？乖瓌游矬w內(nèi)刺激效應(yīng)B抗原動物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞不能增值產(chǎn)生大量抗體2。特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!？

？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？抗原效應(yīng)B細(xì)胞(三）單克隆抗體2.制備過程：項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!3.單克隆抗體的應(yīng)用：①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義②在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。③生物導(dǎo)彈(三）單克隆抗體項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!動物的胚胎移植解決某些妊娠時間長、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速度問題。項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!多莉與“母親”項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!克隆動物的研究意義1.克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A鞏固練習(xí)項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!4.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合B.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成C.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!3、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異

B．具有更強的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強D項目九細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共37頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!作業(yè)：1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？