第十四講-水產(chǎn)動物的血清學檢測技術課件

第十四講水產(chǎn)動物的血清學檢測技術第十四講水產(chǎn)動物的血清學檢測技術1免疫學綜合實驗魚類血清中凝集抗體效價的測定魚類白細胞吞噬活性的測定魚類血清中沉降效價的測定魚類血清中溶菌酶物質活性的測定免疫學綜合實驗魚類血清中凝集抗體效價的測定2血清學反應：在體外進行的抗原抗體反應基礎：抗原抗體特異性結合反應原理：利用已知的抗原或抗體與未知的抗體或抗原進行結合反應，其反應的現(xiàn)象能用肉眼直接觀察到或借助其儀器設備檢測到，人們根據(jù)反應結果就能準確判斷未知的抗原或抗體的性質、含量乃至位置特點：反應過程較短，能很快獲得結果，該技術廣泛應用于動物疾病診斷以及很多具抗原性的未知物的定性、定量和定位血清學反應：在體外進行的抗原抗體反應基礎：抗原抗體特異性結合3免疫血清學反應的一般特點特異性與交叉性抗原與抗體結合機制抗原和抗體結合為弱能量的非共價鍵結合，其結合力決定于抗原決定簇和抗體的抗原結合點之間形成的非共價鍵數(shù)量、性質和距離，由此可分為高親和力、中親和力和低親和力抗體?？乖c抗體的結合是分子表面的結合，這一過程受物理化學、熱力學的法則所制約，結合的溫度在0~40℃范圍內，pH4~9。若溫度超過60℃或pH下降到3下時，抗原抗體復合物又可重新解離。利用這一特性，可進行免疫親和層析，以制備免疫純的抗原或抗體免疫血清學反應的一般特點特異性與交叉性4主要血清學檢測技術及應用凝聚性實驗中和實驗標記抗體技術主要血清學檢測技術及應用凝聚性實驗5凝聚性試驗凝集試驗細菌、紅細胞等顆粒性抗原，或吸附在膠乳、離子交換柱和紅細胞的抗原，與相應抗體結合，在有適當電解質存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的凝集團塊。參與凝集的抗體主要為IgG和IgM凝聚性試驗凝集試驗細菌、紅細胞等顆粒性抗原，或吸附在膠乳、6直接凝集實驗顆粒性抗原與凝集素直接結合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象玻片法為一種定性試驗。將含有已知抗體的診斷血清（適當稀釋）與待檢菌懸液各一滴在玻片上混合，數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)顆粒狀或絮狀凝集，即為陽性反應?？捎糜谛路值眉毦蔫b定和分型；也用已知的診斷抗原懸液，檢測待檢血清中是否存在相應抗體試管法為一種定量試驗，用以檢測待測血清中是否存在相應抗體和測定該抗體的含量，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學調查自家凝集：某些細菌在制成細菌懸液時很不穩(wěn)定，在沒有特異性抗體存在的條件下，亦可發(fā)生凝集直接凝集實驗顆粒性抗原與凝集素直接結合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象自家凝集7間接凝集試驗將可容性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關的、一定大小的不溶性顆粒（載體顆粒）的表面，然后與相應抗體（或抗原）作用，在有電解質存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應反應間接凝集試驗將可容性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關的、8沉淀試驗可溶性抗原（細菌的外毒素、內毒素）與相應抗體結合，在適量電解質存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱~沉淀試驗種類環(huán)狀沉淀試驗瓊脂免疫擴散試驗免疫電泳技術沉淀試驗可溶性抗原（細菌的外毒素、內毒素）與相應抗體結合，在9環(huán)狀沉淀試驗在小口徑內先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢測抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層。數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽性反應。瓊脂免疫擴散試驗瓊脂高溫能溶解，冷卻后凝固，形成凝膠，瓊脂凝膠呈多孔結構，其內充滿水分，因此各種抗原抗體在瓊脂凝膠中自由擴散，擴散抗體在凝膠中擴散，當二者在比例適當處相遇，即發(fā)生沉淀反應環(huán)狀沉淀試驗在小口徑內先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待10標記抗體技術抗原抗體分子小，在含量低時形成的復合物是不可見的，但一些物質即使在超微量時也能通過特殊方法將其檢查出來，如果將這些物質標記在抗體分子上，可以通過檢測標記分子來顯示抗原抗體復合物的存在，根據(jù)抗原抗體結合的特異性和標記分子的敏感性建立的技術，稱~標記抗體技術抗原抗體分子小，在含量低時形成的復合物是不可見的11熒光抗體標記技術指用熒光素對抗體或抗原進行標記，然后用熒光顯微鏡觀察所標記的熒光以分析示蹤相應的抗原或抗體的方法FITC（羅丹明）分子中含有異硫氰基，在堿性條件下能與IgG分子的自由氨基結合，形成FITC-IgG結合物，從而制成熒光抗體抗體經(jīng)熒光標記后，并不影響其結合抗原的能力和特異性，因此當熒光抗體與相應抗原結合時，就形成帶有熒光的抗原抗體復合物，從而在熒光顯微鏡下檢測出抗原的存在熒光抗體標記技術指用熒光素對抗體或抗原進行標記，然后用熒光顯12酶標抗體技術根據(jù)抗原抗體反應的特異性和酶催化反應的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術。酶是一種有機催化劑，催化反應過程中不被消耗，能反復作用，微量的酶即可導致大量的催化過程酶標抗體技術根據(jù)抗原抗體反應的特異性和酶催化反應的高敏感性而13基本程序將酶分子與抗原或抗體分子共價結合，此種結合既不改變抗體的免疫反應活性，也不影響酶的催化活性將此酶標抗體（抗抗體）與存在于組織細胞或吸附于固相載體上的抗原（抗體）發(fā)生特異性結合，并洗下未結合物質滴加底物溶液后，底物在酶作用下水解呈色基本程序14免疫酶組化染色技術酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）免疫酶組化染色技術15中和試驗根據(jù)抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學試驗主要用于病毒感染的血清學診斷、病毒分離株的鑒定、不同病毒株的抗原關系研究、疫苗免疫原性的評價、免疫血清的質量評價和測定動物血清抗體的檢測等中和試驗根據(jù)抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學試驗16基本過程：先將抗血清與病毒混合，經(jīng)適當時間作用后，然后接種于宿主系統(tǒng)以檢測混合液中的病毒感染力。最后根據(jù)其產(chǎn)生保護效果的差異，可判斷該病毒是否已被中和，并根據(jù)一定方法計算中和的程度，即代表中和抗體的效價基本過程：先將抗血清與病毒混合，經(jīng)適當時間作用后，然后接種于17第十五講疫苗與免疫預防第十五講疫苗與免疫預防18免疫預防通過應用疫苗免疫的方法使動物具有針對某種傳染病的特異性抵抗力，以達到控制疾病的目的天然獲得性免疫指個體動物本事未經(jīng)疫苗免疫接種，而具有的對某些疫病的特異性抵抗力，包括天然被動免疫和天然主動免疫。人工獲得性免疫指人為對動物進行免疫接種，使動物具有對某種抗原的特異性免疫力，包括人工被動免疫和人工主動免疫免疫預防通過應用疫苗免疫的方法使動物具有針對某種傳染病的19獲得性免疫天然獲得性免疫天然被動免疫（母源抗體）天然主動免疫（自然感染）人工獲得性免疫人工被動免疫（免疫血清）人工主動免疫代謝產(chǎn)物（類毒素）生物技術疫苗死疫苗活疫苗獲得性免疫天然獲得性免疫天然被動免疫（母源抗體）天然主動免疫20天然被動免疫：新生動物通過母體胎盤、初乳或卵黃從母體獲得某種特異性抗體，從而獲得對某種病原體的免疫力意義：1.保護胎兒免受病原體的感染2.抵御幼齡動物傳染病天然主動免疫：動物在感染某種病原微生物耐過后產(chǎn)生的對該病原體再次侵入的不感染狀態(tài)，或稱抵抗力天然被動免疫：新生動物通過母體胎盤、初乳或卵黃從母體獲得某種21人工被動免疫：將免疫血清或自然發(fā)病后康復動物的血清人工輸入未免疫的動物，使其獲得對某種病原的抵抗力。如草魚出血病魚的血清可防治草魚出血病。人工被動免疫注射免疫血清可使抗體立即發(fā)揮作用，無誘導期，免疫力出現(xiàn)快。用同種動物制備的血清稱同種血清，用異種動物制備的血清稱異種血清異種血清（如抗毒素）的制備一般經(jīng)一定處理，如用類毒素免疫動物，獲取含高效價抗毒素的血清，用飽和硫酸銨處理，使抗毒素免疫球蛋白部分得到濃縮和提純。類毒素：細菌的外毒素經(jīng)甲醛或其他方法處理后，毒力減弱或喪失但仍保持免疫原性，稱～人工被動免疫：將免疫血清或自然發(fā)病后康復動物的血清人工輸入未22人工主動免疫：給動物接種疫苗，刺激機體免疫系統(tǒng)發(fā)生應答反應，產(chǎn)生特異性免疫力。人工主動免疫不能立即產(chǎn)生免疫力，有一定的誘導或潛伏期，出現(xiàn)免疫力的時間與抗原種類有關。群體免疫力：是指在動物群體中，由于存在著一定比例的免疫動物，使整個動物群具有對某種疾病的抵抗力。人工主動免疫：給動物接種疫苗，刺激機體免疫系統(tǒng)發(fā)生應答反應，23全微生物疫苗活疫苗有弱毒疫苗和異源疫苗弱毒疫苗：毒力減弱，仍保持著原有的抗原性，并能在體內繁殖，較少的免疫劑量誘導產(chǎn)生堅實的免疫力，不需佐劑，免疫期。異源疫苗：用具有共同保護性抗原的不同病毒制備成的疫苗，如用鴿痘病毒預防雞痘等。全微生物疫苗活疫苗有弱毒疫苗和異源疫苗24滅活疫苗：病原微生物經(jīng)理化方法滅活后，仍保持免疫原性，接種后使動物產(chǎn)生特異性抵抗力特點：在機體內不能繁殖，使用接種劑量較大，免疫期短，需加入適當佐劑以增強免疫效果。優(yōu)點：研制周期短、使用安全和易于保存組織滅火疫苗包括病變組織滅火疫苗和雞胚組織滅火疫苗兩種。滅活疫苗：病原微生物經(jīng)理化方法滅活后，仍保持免疫原性，接種后25提純的大分子疫苗類毒素疫苗將細菌外毒素經(jīng)甲醛脫毒，使其失去致病性而保留免疫原性的制劑，如破傷風類毒素，白喉毒素亞單位疫苗此類疫苗是從細菌或病毒粗抗原中分離提取某一種或幾種具有免疫原性的生物活性物質，除去免疫不必需的“雜質”，從而使疫苗更為純凈。如將病毒的衣殼蛋白與核算分開、除去核酸用提純的蛋白質衣殼制成的疫苗提純的大分子疫苗類毒素疫苗將細菌外毒素經(jīng)甲醛脫毒，使26第十四講水產(chǎn)動物的血清學檢測技術第十四講水產(chǎn)動物的血清學檢測技術27免疫學綜合實驗魚類血清中凝集抗體效價的測定魚類白細胞吞噬活性的測定魚類血清中沉降效價的測定魚類血清中溶菌酶物質活性的測定免疫學綜合實驗魚類血清中凝集抗體效價的測定28血清學反應：在體外進行的抗原抗體反應基礎：抗原抗體特異性結合反應原理：利用已知的抗原或抗體與未知的抗體或抗原進行結合反應，其反應的現(xiàn)象能用肉眼直接觀察到或借助其儀器設備檢測到，人們根據(jù)反應結果就能準確判斷未知的抗原或抗體的性質、含量乃至位置特點：反應過程較短，能很快獲得結果，該技術廣泛應用于動物疾病診斷以及很多具抗原性的未知物的定性、定量和定位血清學反應：在體外進行的抗原抗體反應基礎：抗原抗體特異性結合29免疫血清學反應的一般特點特異性與交叉性抗原與抗體結合機制抗原和抗體結合為弱能量的非共價鍵結合，其結合力決定于抗原決定簇和抗體的抗原結合點之間形成的非共價鍵數(shù)量、性質和距離，由此可分為高親和力、中親和力和低親和力抗體?？乖c抗體的結合是分子表面的結合，這一過程受物理化學、熱力學的法則所制約，結合的溫度在0~40℃范圍內，pH4~9。若溫度超過60℃或pH下降到3下時，抗原抗體復合物又可重新解離。利用這一特性，可進行免疫親和層析，以制備免疫純的抗原或抗體免疫血清學反應的一般特點特異性與交叉性30主要血清學檢測技術及應用凝聚性實驗中和實驗標記抗體技術主要血清學檢測技術及應用凝聚性實驗31凝聚性試驗凝集試驗細菌、紅細胞等顆粒性抗原，或吸附在膠乳、離子交換柱和紅細胞的抗原，與相應抗體結合，在有適當電解質存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的凝集團塊。參與凝集的抗體主要為IgG和IgM凝聚性試驗凝集試驗細菌、紅細胞等顆粒性抗原，或吸附在膠乳、32直接凝集實驗顆粒性抗原與凝集素直接結合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象玻片法為一種定性試驗。將含有已知抗體的診斷血清（適當稀釋）與待檢菌懸液各一滴在玻片上混合，數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)顆粒狀或絮狀凝集，即為陽性反應?？捎糜谛路值眉毦蔫b定和分型；也用已知的診斷抗原懸液，檢測待檢血清中是否存在相應抗體試管法為一種定量試驗，用以檢測待測血清中是否存在相應抗體和測定該抗體的含量，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學調查自家凝集：某些細菌在制成細菌懸液時很不穩(wěn)定，在沒有特異性抗體存在的條件下，亦可發(fā)生凝集直接凝集實驗顆粒性抗原與凝集素直接結合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象自家凝集33間接凝集試驗將可容性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關的、一定大小的不溶性顆粒（載體顆粒）的表面，然后與相應抗體（或抗原）作用，在有電解質存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應反應間接凝集試驗將可容性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關的、34沉淀試驗可溶性抗原（細菌的外毒素、內毒素）與相應抗體結合，在適量電解質存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱~沉淀試驗種類環(huán)狀沉淀試驗瓊脂免疫擴散試驗免疫電泳技術沉淀試驗可溶性抗原（細菌的外毒素、內毒素）與相應抗體結合，在35環(huán)狀沉淀試驗在小口徑內先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢測抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層。數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽性反應。瓊脂免疫擴散試驗瓊脂高溫能溶解，冷卻后凝固，形成凝膠，瓊脂凝膠呈多孔結構，其內充滿水分，因此各種抗原抗體在瓊脂凝膠中自由擴散，擴散抗體在凝膠中擴散，當二者在比例適當處相遇，即發(fā)生沉淀反應環(huán)狀沉淀試驗在小口徑內先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待36標記抗體技術抗原抗體分子小，在含量低時形成的復合物是不可見的，但一些物質即使在超微量時也能通過特殊方法將其檢查出來，如果將這些物質標記在抗體分子上，可以通過檢測標記分子來顯示抗原抗體復合物的存在，根據(jù)抗原抗體結合的特異性和標記分子的敏感性建立的技術，稱~標記抗體技術抗原抗體分子小，在含量低時形成的復合物是不可見的37熒光抗體標記技術指用熒光素對抗體或抗原進行標記，然后用熒光顯微鏡觀察所標記的熒光以分析示蹤相應的抗原或抗體的方法FITC（羅丹明）分子中含有異硫氰基，在堿性條件下能與IgG分子的自由氨基結合，形成FITC-IgG結合物，從而制成熒光抗體抗體經(jīng)熒光標記后，并不影響其結合抗原的能力和特異性，因此當熒光抗體與相應抗原結合時，就形成帶有熒光的抗原抗體復合物，從而在熒光顯微鏡下檢測出抗原的存在熒光抗體標記技術指用熒光素對抗體或抗原進行標記，然后用熒光顯38酶標抗體技術根據(jù)抗原抗體反應的特異性和酶催化反應的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術。酶是一種有機催化劑，催化反應過程中不被消耗，能反復作用，微量的酶即可導致大量的催化過程酶標抗體技術根據(jù)抗原抗體反應的特異性和酶催化反應的高敏感性而39基本程序將酶分子與抗原或抗體分子共價結合，此種結合既不改變抗體的免疫反應活性，也不影響酶的催化活性將此酶標抗體（抗抗體）與存在于組織細胞或吸附于固相載體上的抗原（抗體）發(fā)生特異性結合，并洗下未結合物質滴加底物溶液后，底物在酶作用下水解呈色基本程序40免疫酶組化染色技術酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）免疫酶組化染色技術41中和試驗根據(jù)抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學試驗主要用于病毒感染的血清學診斷、病毒分離株的鑒定、不同病毒株的抗原關系研究、疫苗免疫原性的評價、免疫血清的質量評價和測定動物血清抗體的檢測等中和試驗根據(jù)抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學試驗42基本過程：先將抗血清與病毒混合，經(jīng)適當時間作用后，然后接種于宿主系統(tǒng)以檢測混合液中的病毒感染力。最后根據(jù)其產(chǎn)生保護效果的差異，可判斷該病毒是否已被中和，并根據(jù)一定方法計算中和的程度，即代表中和抗體的效價基本過程：先將抗血清與病毒混合，經(jīng)適當時間作用后，然后接種于43第十五講疫苗與免疫預防第十五講疫苗與免疫預防44免疫預防通過應用疫苗免疫的方法使動物具有針對某種傳染病的特異性抵抗力，以達到控制疾病的目的天然獲得性免疫指個體動物本事未經(jīng)疫苗免疫接種，而具有的對某些疫病的特異性抵抗力，包括天然被動免疫和天然主動免疫。人工獲得性免疫指人為對動物進行免疫接種，使動物具有對某種抗原的特異性免疫力，包括人工被動免疫和人工主動免疫免疫預防通過應用疫苗免疫的方法使動物具有針對某種傳染病的45獲得性免疫天然獲得性免疫天然被動免疫（母源抗體）天然主動免疫（自然感染）人工獲得性免疫人工被動免疫（免疫血清）人工主動免疫代謝產(chǎn)物（類毒素）生物技術疫苗死疫苗活疫苗獲得性免疫天然獲得性免疫天然被動免疫（母源抗體）天然主動免疫46天然被動免疫：新生動物通過母體胎盤、初乳或卵黃從母體獲得某種特異性抗體，從而獲得對某種病原體的免疫力意義：1.保護胎兒免受病原體的感染2.抵御幼齡動物傳染病天然主動免疫：動物在感染某種病原微生物耐過后產(chǎn)生的對該病原體再次侵入的不感染狀態(tài)，或稱抵抗力天然被動免疫：新生動物通過母體胎盤、初乳或卵黃從母體獲得某種47人工被動免疫：將免疫血清或自然發(fā)病后康復動物的血清人工輸入未免疫的動物，使其獲得對某種病原的抵抗力。如草魚出血病魚的血清可防治草魚出血病。人工被動免疫注射免疫血清可使抗體立即發(fā)揮作用，無誘導期，免疫力出現(xiàn)快。用同種動物制備的血清稱同種血清，用異種動物制備的血清稱異種血清異種血清（如抗毒素）的制備一般經(jīng)一定處理，如用類毒素免疫動物，獲取含高效價抗毒