病理切片技術-學術報告課件

病理切片技術病理切片技術1目錄一、取材二、固定三、脫水四、透明五、浸蠟六、包埋七、切片八、染色目錄一、取材2一、取材取材是制作切片程序中的首要步驟，取材不當，將直接影響病理診斷和科研工作的效果。組織標本的選用非常重要，不能隨意的切取組織來制作組織切片，否則病理檢驗的結果是不會令人滿意的。一、取材取材是制作切片程序中的首要步驟，取材不當，將直接影響3取材工具：取材刀具必須鋒利。切取標本不應該擠壓和揉擦，以免損害組織造成人為組織變化，給診斷帶來困難或導致錯診，漏診。取材工具：取材刀具必須鋒利。切取標本不應該擠壓和揉擦，以免損4標本的選?。簯x擇病變或可疑病變的組織。必要時選取病變與正常組織交界處。組織宜小不宜大，以不超過24x24mm2為佳，厚度以3—5mm為度，過大過厚會影響對標本的固定，另方面也影響切片的制作。特殊目的者應屬例外。標本的選取：應選擇病變或可疑病變的組織。必要時選取病變與正常5二、固定在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的保存，都必須進行及時的適當的和有效的固定。組織只有經過固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。二、固定在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的61.固定的作用固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是：保持細胞、組織的固有形態(tài)和結構，使之盡量保持細胞、組織的固有形態(tài)和結構。從免疫組化技術的角度，使細胞內蛋白質凝固，盡量減少或終止外源性酶和內源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質；保持組織的固有形態(tài)和結構；保持組織或細胞的抗原性。1.固定的作用固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是：保持72.固定的目的

能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。保存細胞固有的物質，能凝固或沉淀細胞內或組織液，糖原等，使細胞或組織基本上保持與生活時的物質一樣。使組織硬化，便于切塊。對某些具有傳染性的標本，能防止疾病的擴散。保存好大體標本。可增強染色的作用。2.固定的目的能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。83.固定的注意事項

組織固定越新鮮越好組織固定，組織塊不宜過大對不同類型的組織應適當合理地選擇固定液組織固定，時間不宜太短，也不宜太長固定液的量要充分特殊病例或特殊物質應選擇特殊的固定液組織的第二次固定或后固定3.固定的注意事項組織固定越新鮮越好94.固定液的使用

根據Bencroft的分類法，可分為四種類型：醛類：甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。氧化劑類：四氧化鋨，高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。蛋白變性類：甲醇，乙醇，醋酸等。其他：氯化汞，苦味酸等。上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術方面中用到。4.固定液的使用根據Bencroft的分類法，可分為四種類10沖洗組織經過固定后，脫水之前應進行沖洗，將組織內的固定液洗干凈，否則殘留組織內的固定液有礙制片和染色，而有些固定液則可在組織中繼續(xù)起到脆化組織的作用，以至于損壞組織，給制片工作帶來不利。在沖洗時，沖洗劑的選擇應依固定液的種類和性質而有所不同。沖洗11沖洗時應注意以下事項：水溶性的固定劑：需用流水沖洗。酒精溶劑的固定劑：應用同濃度的酒精浸洗。含苦味酸的固定劑：（苦味酸與甲醛混合液除外），須用70％酒精浸洗。含有升汞固定劑：水或酒精中加碘以洗去組織內汞的沉淀。含有鉻酸的固定劑：沖洗時置于暗處，以免產生沉淀或使組織硬化而影響制片。沖洗時應注意以下事項：12三、脫水脫水就是用脫水劑完全除去組織內的水分，為下一步透明及浸蠟創(chuàng)造條件。此外，脫水還可以使組織再次發(fā)生一定的硬化，脫水劑必須是與水在任何比例下均能混合的液體。三、脫水脫水就是用脫水劑完全除去組織內的水分，為下一步透明及131.常用的脫水劑酒精（常用）丙酮(Acetone)正丁醇(γ-Butyalcohol)二氧乙環(huán)(Dioxan)1.常用的脫水劑酒精（常用）142.組織的搖震為加快脫水進程可將標本放入各級酒精內借助機器或手工震搖，還可以加溫促進脫水。即將標本裝在塞緊的玻璃瓶置于包埋箱或溫箱內，因液體受熱產生的正壓可增加溶液的對流。但熱酒精會使組織過硬，并有爆裂危險，除急診外，最好不用此方法。2.組織的搖震為加快脫水進程可將標本放入各級酒精內借助機器15四、透明目的是使石蠟滲透到組織中去，達到包埋的支持作用。將組織投入可以同酒精又能同石蠟相混合的媒劑中，組織中的酒精就被該媒劑取代，待酒精完全被該媒劑完全取代后，組織即成透明狀態(tài)透明后就可以將組織浸入溶解的石蠟進行浸蠟四、透明目的是使石蠟滲透到組織中去，達到包埋的支持作用。16透明劑二甲苯：能與酒精，丙酮相混合，又是石蠟的溶劑。對組織的收縮性強，作用迅速，組織在二甲苯中時間不宜過長。(常用)氯仿：作用緩和，不易呈現(xiàn)透明現(xiàn)象香柏油：處理細柔組織的最佳透明劑。透明劑17五、浸蠟組織經媒劑的透明作用之后，移入熔化的石蠟內浸漬，石蠟逐漸浸入組織間隙，取代透明劑，這一程序就叫浸蠟。石蠟的質量和熔度與切片質量密切相關。為了增加石蠟的韌性，可在石蠟中加入一些混合劑，常用蜂蠟，硬脂酸，松香等。五、浸蠟組織經媒劑的透明作用之后，移入熔化的石蠟內浸漬，石蠟18六、包埋包埋，就是將已經經過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個程序稱為包埋。包埋劑凝固后，進一步加強了組織的硬度和韌度而便于進行切片。六、包埋包埋，就是將已經經過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從191.石蠟包埋法包埋的方法有自動包埋機包埋和手工包埋兩種。手工包埋法：1.組織浸入石蠟后，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內。從恒溫箱取出置于三角架上，其下點燃酒精燈，以保持石蠟的溶解狀態(tài)。2.準備好包埋框，將包埋用的鑷子在酒精燈上加溫（防止鑷子粘蠟）后，左手持蠟杯，右手把加溫的鑷子放在蠟口（直立狀）倒蠟時讓石蠟沿鑷子注入包埋框內。1.石蠟包埋法包埋的方法有自動包埋機包埋和手工包埋兩種。203.迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內，切面朝下放正置入框底并輕輕壓平，以保證不再有氣泡。4.待石蠟表面凝固前將標簽貼于其上，需注意勿使標簽與標本混淆，當蠟塊冷至蠟面有一層透明蠟膜時，浸入冷水中迅速使其冷卻，否則蠟內常形成結晶。5.蠟塊完全硬固后除去銅框，以保證蠟徹底凝固，立即修切，準備制成切片或儲藏備用。3.迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內，切面朝下放正置入框底并輕212.石蠟包埋流程組織取材，固定于福爾馬林數小時后再換以新鮮福爾馬林固定數小時。組織流水沖洗6－12小時。70％酒精2－4小時。85％酒精2－4小時。95％酒精（Ⅰ）2－4小時。（可過夜）95％酒精（Ⅱ）2－4小時。（可過夜）2.石蠟包埋流程組織取材，固定于福爾馬林數小時后再換以新鮮福22100％酒精（Ⅰ）2－4小時。100％酒精（Ⅱ）2小時。二甲苯（Ⅰ）0.5－1小時。二甲苯（Ⅱ）0.5小時。浸蠟（Ⅰ）2小時。浸蠟（Ⅱ）2小時。組織包埋。（上述只供參考）100％酒精（Ⅰ）2－4小時。23七、切片一般的切片厚度要求在4—6微米。石蠟切片不但可以達到這個要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。還便于制作大批的或是連續(xù)的切片。以石蠟包埋的組織塊便于長期保存。所以石蠟切片是目前各種切片制作方法中最普通常用的一種方法。七、切片一般的切片厚度要求在4—6微米。石蠟切片不但可以達到241.切片前的準備恒溫水浴鍋首先預熱至35℃—40℃。蠟塊整修，將蠟塊組織面的石蠟用刀修去，使組織全部暴露出切面并修平，以減少切片刀的磨損。載玻片應事先洗滌干凈，無油膩和不透明現(xiàn)象。將鋒利的刀片裝入切片刀夾鉗內，調整角度和位置后隨即緊固。備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。1.切片前的準備恒溫水浴鍋首先預熱至35℃—40℃。252.切片的步驟將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內，調整到稍離開切片能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口要垂直平行。再調整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架，固定好機頭。根據需要調整切片厚度。2.切片的步驟將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內，調整到稍離開切26搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再進行切制。實踐中可用右手轉動切片機手輪，左手用毛筆托起蠟片，協(xié)調地進行切片操作。切下的切片帶，一端用鑷子輕輕拉起，應盡可能將切片帶拉直展開，用毛筆將切片帶從刀口向上挑起，拉下切片帶，然后輕拖鋪于恒溫水面上。搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，273.注意事項切片質量的好壞，除與技術熟練程度和切片機的好壞有關外，切片刀是決定的因素切片機的各個零件和螺絲應旋緊，否則將會產生震動在搖動切片機時，用力要求均勻一致在夏秋季節(jié)進行切片時，應使用冰塊加強冷卻3.注意事項切片質量的好壞，除與技術熟練程度和切片機的好壞有284.貼片將單張或數張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，鋪于恒溫水中，（光亮的一面朝下）立即用毛筆輕輕拉展以切片無皺褶為最好。如有皺褶時用鑷子細心地逐個輕輕撥開，注意不可撥破組織。然后分開每張切片，選取其中最完整的，沒有皺褶的切片。4.貼片將單張或數張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，鋪于恒29待切片在恒溫水內充分攤開展平后，將載玻片垂直插入水中輕靠切片，并用毛筆將切片一邊撥于玻片上，隨即將玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份時用毛筆，撥正切片位置。如組織較小，可在玻片上多貼幾片或幾排，但排列應密集、整齊。用鉛筆在玻片一端的毛玻璃上寫上標本編號將附貼好的切片置于恒溫箱內干燥（溫度一般高于石蠟熔點2-4℃）待切片在恒溫水內充分攤開展平后，將載玻片垂直插入水中輕靠切片30八、染色染色就是利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細胞內的某種成分發(fā)生作用，經過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細結構能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細胞的各種成分。染色劑與組織細胞相結合而使組織細胞著色的過程與物理和化學作用兩者都有關系。八、染色染色就是利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細311.染色過程蘇木素浸染4-10分鐘自來水洗片刻1％鹽酸乙醇分化3-5秒鐘自來水沖洗片刻-數小時飽和碳酸鋰溶液1分鐘自來水沖洗15分鐘0.5％伊紅酒精浸染1-2分鐘1.染色過程蘇木素浸染3295％乙醇11-2分鐘95％乙醇21-2分鐘100％乙醇11-2分鐘100％乙醇21-2分鐘二甲苯11-2分鐘二甲苯21-2分鐘樹膠封片95％乙醇11-2分鐘33常規(guī)蘇木素-伊紅染色HE染液配制1.Harris蘇木素染液配制2.0.5%伊紅酒精染液配制0.5克伊紅溶于100毫升80%酒精中3.1%鹽酸酒精配制1毫升鹽酸溶于99毫升70%酒精中常規(guī)蘇木素-伊紅染色HE染液配制341克蘇木素溶于10毫升無水酒精中；另將20克鉀明礬加熱溶于200毫升蒸餾水。二者混合煮沸，玻棒攪拌加0.5克氧化汞，流水冷卻，隔夜過濾。1克蘇木素溶于10毫升無水酒精中；另將20克鉀明礬加熱溶于235脫蠟二甲苯12分鐘二甲苯22分鐘95％乙醇1分鐘95％乙醇1分鐘自來水洗片刻脫蠟36染色：蘇木素浸染4-10分鐘自來水洗片刻1％鹽酸乙醇分化3-5秒鐘自來水沖洗片刻-數小時飽和碳酸鋰溶液1分鐘自來水沖洗15分鐘0.5％伊紅酒精浸染1-2分鐘染色：37脫水，透明，封固95％乙醇11-2分鐘95％乙醇21-2分鐘100％乙醇11-2分鐘100％乙醇21-2分鐘二甲苯11-2分鐘二甲苯21-2分鐘樹膠封片。結果：胞核呈藍色，胞漿呈紅色，紅細胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色。脫水，透明，封固38彈性、膠原纖維的雙重組合染色法染液配制1.維多利亞藍染色液的配制2.麗春紅S染色液0.5%麗春紅15毫升加苦味酸飽和水溶液85毫升彈性、膠原纖維的雙重組合染色法染液配制39將維多利亞藍2克，糊精0.5克，間苯二酚4克，蒸餾水200毫升混合加熱煮沸，約5分鐘后，加入煮沸的30%三氯化鐵溶液25毫升，加熱攪拌呈膠體狀，去火冷卻，將濾渣連同濾紙一起在60℃恒溫箱烤干，殘渣呈深藍色顆粒狀粉末，將其溶于400毫升70%酒精中，加鹽酸4毫升和5克苯酚，放置一周后成熟。將維多利亞藍2克，糊精0.5克，間苯二酚4克，蒸餾水200毫40染色方法組織切片脫蠟（同常規(guī)蘇木素-伊紅染色HE）切片入70%酒精沖洗2分鐘切片入維多利亞藍溶液30分鐘95%酒精分色1-2分鐘水洗2分鐘麗春紅染色2分鐘無水酒精沖洗2次稍干燥后，二甲苯透明，中性樹膠封片染色方法41結果顯示彈性纖維呈藍綠色，膠原纖維呈紅色，肌肉等背景色呈淡黃色。膠原纖維呈紅色，平滑肌呈黃色。10X血管彈力纖維呈紫色。20X結果顯示42請老師同學批評指正，謝謝！請老師同學批評指正，謝謝！43病理切片技術病理切片技術44目錄一、取材二、固定三、脫水四、透明五、浸蠟六、包埋七、切片八、染色目錄一、取材45一、取材取材是制作切片程序中的首要步驟，取材不當，將直接影響病理診斷和科研工作的效果。組織標本的選用非常重要，不能隨意的切取組織來制作組織切片，否則病理檢驗的結果是不會令人滿意的。一、取材取材是制作切片程序中的首要步驟，取材不當，將直接影響46取材工具：取材刀具必須鋒利。切取標本不應該擠壓和揉擦，以免損害組織造成人為組織變化，給診斷帶來困難或導致錯診，漏診。取材工具：取材刀具必須鋒利。切取標本不應該擠壓和揉擦，以免損47標本的選取：應選擇病變或可疑病變的組織。必要時選取病變與正常組織交界處。組織宜小不宜大，以不超過24x24mm2為佳，厚度以3—5mm為度，過大過厚會影響對標本的固定，另方面也影響切片的制作。特殊目的者應屬例外。標本的選?。簯x擇病變或可疑病變的組織。必要時選取病變與正常48二、固定在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的保存，都必須進行及時的適當的和有效的固定。組織只有經過固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。二、固定在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的491.固定的作用固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是：保持細胞、組織的固有形態(tài)和結構，使之盡量保持細胞、組織的固有形態(tài)和結構。從免疫組化技術的角度，使細胞內蛋白質凝固，盡量減少或終止外源性酶和內源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質；保持組織的固有形態(tài)和結構；保持組織或細胞的抗原性。1.固定的作用固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是：保持502.固定的目的

能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。保存細胞固有的物質，能凝固或沉淀細胞內或組織液，糖原等，使細胞或組織基本上保持與生活時的物質一樣。使組織硬化，便于切塊。對某些具有傳染性的標本，能防止疾病的擴散。保存好大體標本?？稍鰪娙旧淖饔谩?.固定的目的能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。513.固定的注意事項

組織固定越新鮮越好組織固定，組織塊不宜過大對不同類型的組織應適當合理地選擇固定液組織固定，時間不宜太短，也不宜太長固定液的量要充分特殊病例或特殊物質應選擇特殊的固定液組織的第二次固定或后固定3.固定的注意事項組織固定越新鮮越好524.固定液的使用

根據Bencroft的分類法，可分為四種類型：醛類：甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。氧化劑類：四氧化鋨，高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。蛋白變性類：甲醇，乙醇，醋酸等。其他：氯化汞，苦味酸等。上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術方面中用到。4.固定液的使用根據Bencroft的分類法，可分為四種類53沖洗組織經過固定后，脫水之前應進行沖洗，將組織內的固定液洗干凈，否則殘留組織內的固定液有礙制片和染色，而有些固定液則可在組織中繼續(xù)起到脆化組織的作用，以至于損壞組織，給制片工作帶來不利。在沖洗時，沖洗劑的選擇應依固定液的種類和性質而有所不同。沖洗54沖洗時應注意以下事項：水溶性的固定劑：需用流水沖洗。酒精溶劑的固定劑：應用同濃度的酒精浸洗。含苦味酸的固定劑：（苦味酸與甲醛混合液除外），須用70％酒精浸洗。含有升汞固定劑：水或酒精中加碘以洗去組織內汞的沉淀。含有鉻酸的固定劑：沖洗時置于暗處，以免產生沉淀或使組織硬化而影響制片。沖洗時應注意以下事項：55三、脫水脫水就是用脫水劑完全除去組織內的水分，為下一步透明及浸蠟創(chuàng)造條件。此外，脫水還可以使組織再次發(fā)生一定的硬化，脫水劑必須是與水在任何比例下均能混合的液體。三、脫水脫水就是用脫水劑完全除去組織內的水分，為下一步透明及561.常用的脫水劑酒精（常用）丙酮(Acetone)正丁醇(γ-Butyalcohol)二氧乙環(huán)(Dioxan)1.常用的脫水劑酒精（常用）572.組織的搖震為加快脫水進程可將標本放入各級酒精內借助機器或手工震搖，還可以加溫促進脫水。即將標本裝在塞緊的玻璃瓶置于包埋箱或溫箱內，因液體受熱產生的正壓可增加溶液的對流。但熱酒精會使組織過硬，并有爆裂危險，除急診外，最好不用此方法。2.組織的搖震為加快脫水進程可將標本放入各級酒精內借助機器58四、透明目的是使石蠟滲透到組織中去，達到包埋的支持作用。將組織投入可以同酒精又能同石蠟相混合的媒劑中，組織中的酒精就被該媒劑取代，待酒精完全被該媒劑完全取代后，組織即成透明狀態(tài)透明后就可以將組織浸入溶解的石蠟進行浸蠟四、透明目的是使石蠟滲透到組織中去，達到包埋的支持作用。59透明劑二甲苯：能與酒精，丙酮相混合，又是石蠟的溶劑。對組織的收縮性強，作用迅速，組織在二甲苯中時間不宜過長。(常用)氯仿：作用緩和，不易呈現(xiàn)透明現(xiàn)象香柏油：處理細柔組織的最佳透明劑。透明劑60五、浸蠟組織經媒劑的透明作用之后，移入熔化的石蠟內浸漬，石蠟逐漸浸入組織間隙，取代透明劑，這一程序就叫浸蠟。石蠟的質量和熔度與切片質量密切相關。為了增加石蠟的韌性，可在石蠟中加入一些混合劑，常用蜂蠟，硬脂酸，松香等。五、浸蠟組織經媒劑的透明作用之后，移入熔化的石蠟內浸漬，石蠟61六、包埋包埋，就是將已經經過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個程序稱為包埋。包埋劑凝固后，進一步加強了組織的硬度和韌度而便于進行切片。六、包埋包埋，就是將已經經過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從621.石蠟包埋法包埋的方法有自動包埋機包埋和手工包埋兩種。手工包埋法：1.組織浸入石蠟后，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內。從恒溫箱取出置于三角架上，其下點燃酒精燈，以保持石蠟的溶解狀態(tài)。2.準備好包埋框，將包埋用的鑷子在酒精燈上加溫（防止鑷子粘蠟）后，左手持蠟杯，右手把加溫的鑷子放在蠟口（直立狀）倒蠟時讓石蠟沿鑷子注入包埋框內。1.石蠟包埋法包埋的方法有自動包埋機包埋和手工包埋兩種。633.迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內，切面朝下放正置入框底并輕輕壓平，以保證不再有氣泡。4.待石蠟表面凝固前將標簽貼于其上，需注意勿使標簽與標本混淆，當蠟塊冷至蠟面有一層透明蠟膜時，浸入冷水中迅速使其冷卻，否則蠟內常形成結晶。5.蠟塊完全硬固后除去銅框，以保證蠟徹底凝固，立即修切，準備制成切片或儲藏備用。3.迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內，切面朝下放正置入框底并輕642.石蠟包埋流程組織取材，固定于福爾馬林數小時后再換以新鮮福爾馬林固定數小時。組織流水沖洗6－12小時。70％酒精2－4小時。85％酒精2－4小時。95％酒精（Ⅰ）2－4小時。（可過夜）95％酒精（Ⅱ）2－4小時。（可過夜）2.石蠟包埋流程組織取材，固定于福爾馬林數小時后再換以新鮮福65100％酒精（Ⅰ）2－4小時。100％酒精（Ⅱ）2小時。二甲苯（Ⅰ）0.5－1小時。二甲苯（Ⅱ）0.5小時。浸蠟（Ⅰ）2小時。浸蠟（Ⅱ）2小時。組織包埋。（上述只供參考）100％酒精（Ⅰ）2－4小時。66七、切片一般的切片厚度要求在4—6微米。石蠟切片不但可以達到這個要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。還便于制作大批的或是連續(xù)的切片。以石蠟包埋的組織塊便于長期保存。所以石蠟切片是目前各種切片制作方法中最普通常用的一種方法。七、切片一般的切片厚度要求在4—6微米。石蠟切片不但可以達到671.切片前的準備恒溫水浴鍋首先預熱至35℃—40℃。蠟塊整修，將蠟塊組織面的石蠟用刀修去，使組織全部暴露出切面并修平，以減少切片刀的磨損。載玻片應事先洗滌干凈，無油膩和不透明現(xiàn)象。將鋒利的刀片裝入切片刀夾鉗內，調整角度和位置后隨即緊固。備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。1.切片前的準備恒溫水浴鍋首先預熱至35℃—40℃。682.切片的步驟將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內，調整到稍離開切片能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口要垂直平行。再調整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架，固定好機頭。根據需要調整切片厚度。2.切片的步驟將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內，調整到稍離開切69搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再進行切制。實踐中可用右手轉動切片機手輪，左手用毛筆托起蠟片，協(xié)調地進行切片操作。切下的切片帶，一端用鑷子輕輕拉起，應盡可能將切片帶拉直展開，用毛筆將切片帶從刀口向上挑起，拉下切片帶，然后輕拖鋪于恒溫水面上。搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，703.注意事項切片質量的好壞，除與技術熟練程度和切片機的好壞有關外，切片刀是決定的因素切片機的各個零件和螺絲應旋緊，否則將會產生震動在搖動切片機時，用力要求均勻一致在夏秋季節(jié)進行切片時，應使用冰塊加強冷卻3.注意事項切片質量的好壞，除與技術熟練程度和切片機的好壞有714.貼片將單張或數張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，鋪于恒溫水中，（光亮的一面朝下）立即用毛筆輕輕拉展以切片無皺褶為最好。如有皺褶時用鑷子細心地逐個輕輕撥開，注意不可撥破組織。然后分開每張切片，選取其中最完整的，沒有皺褶的切片。4.貼片將單張或數張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，鋪于恒72待切片在恒溫水內充分攤開展平后，將載玻片垂直插入水中輕靠切片，并用毛筆將切片一邊撥于玻片上，隨即將玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份時用毛筆，撥正切片位置。如組織較小，可在玻片上多貼幾片或幾排，但排列應密集、整齊。用鉛筆在玻片一端的毛玻璃上寫上標本編號將附貼好的切片置于恒溫箱內干燥（溫度一般高于石蠟熔點2-4℃）待切片在恒溫水內充分攤開展平后，將載玻片垂直插入水中輕靠切片73八、染色染色就是利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細胞內的某種成分發(fā)生作用，經過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細結構能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細胞的各種成分。染色劑與組織細胞相結合而使組織細胞著色的過程與物理和化學作用兩者都有關系。八、染色染色就是利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細741.染色過程蘇木素浸染4-10分鐘自來水洗片刻1％鹽酸乙醇分化3-5秒鐘自來水沖洗片刻-數小時飽和碳酸鋰溶液1分鐘自來水沖洗15分鐘0.5％伊紅酒精浸染1-2分鐘1.染色過程蘇木素浸染7595％乙醇11-2分鐘95％乙醇21-2分鐘100％乙醇11-2分鐘100％乙醇21-2分鐘二甲苯11-2分鐘二甲苯21-2分鐘樹膠封片95％乙醇11-2分鐘76常規(guī)蘇木素-伊紅染色HE染液配制1.Har