穩(wěn)心顆粒對心力衰竭兔心肌細胞鈣調控蛋白的影響課件

研究背景心肌細胞收縮/舒張功能與心肌細胞內鈣循環(huán)密切相關心衰時心肌細胞鈣離子循環(huán)異常是心肌舒縮功能障礙的細胞學基礎穩(wěn)心顆粒抗心律失常時能改善心衰患者和動物的心功能穩(wěn)心顆粒與西藥聯(lián)合應用治療CHF具有協(xié)同增強心功能的作用研究背景心肌細胞收縮/舒張功能與心肌細胞內鈣循環(huán)密切相關Bers(2002)Nature415:198-205鈣循環(huán)Bers(2002)Nature415:198-20通過左心容量和壓力超負荷方法制作家兔心衰模型及穩(wěn)心顆粒對心衰家兔心功能的作用探討穩(wěn)心顆粒對心衰時鈣調控蛋白的影響研究目的通過左心容量和壓力超負荷方法制作家兔心衰模型及穩(wěn)心顆粒對心衰實驗動物

新西蘭大耳白兔，3月齡，雌雄不拘，體重2.0～3.0kg分組假手術組（shame）8只假手術穩(wěn)心顆粒組(HF-drug)

8只心衰組(HF)

10只心衰穩(wěn)心顆粒組(HF-drug)

10只

材料和方法實驗動物材料和方法主要器材

多道生理記錄儀（中國四川錦江通用實業(yè)有限公司）超聲心動圖儀（Vivid7，美國GE公司）基因擴增儀（Bioneer，EDC-810)

DNA電泳儀（Bio-RAD，Sub-CellModel96）酶標儀（PerKinElmer，Wallac1420）凝膠成像儀（Bio-RAD，UniversalHoodⅡ）

材料和方法主要器材材料和方法材料和方法主要藥品和試劑穩(wěn)心顆粒（山東步長制藥有限公司）肝素鈉注射液（天津生物化學制藥有限公司）

鈣調控蛋白引物（InvitrogenBiot）鈣調控蛋白一抗（abcam公司）組織總蛋白提取試劑盒（谷歌生物公司）材料和方法主要藥品和試劑穩(wěn)心顆粒心衰動物模型制作

新西蘭大耳兔主動脈瓣關閉不全腹主動脈縮窄EF<45%LVESD>1.20cm脈壓增大50%心衰動物模型制作新西蘭大耳兔主動脈瓣關閉不全腹主動脈縮窄E超聲資料左室舒張末內徑LVEDD左室收縮末內徑LVESD左室舒張末容積LVEDV左室收縮末容積LVESV左室射血分數LVEF左室短軸縮短分數LVFS檢測指標超聲資料檢測指標RT-PCR和Westernblot肌漿網鈣泵SERCA2a雷諾定受體RyR2受磷蛋白PLB鈉鈣交換體NCX基因和蛋白表達情況檢測指標RT-PCR和Westernblot檢測指標計量數據均以均數±標準差表示采用單因素方差分析所有數據均采用SPSS13.0分析P<0.05有統(tǒng)計學意義統(tǒng)計學處理計量數據均以均數±標準差表示統(tǒng)計學處理穩(wěn)心顆粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0.13

1.31±0.10

1.84±0.08※1.55±0.07﹟LVESD(mm)0.78±0.070.81±0.081.54±0.12※

1.05±0.07﹟LVEDV(ml)4.18±1.074.08±0.80

10.34±1.19※

6.68±0.79﹟

LVESV(ml)1.06±0.271.16±0.31

5.90±0.75※

3.04±0.51﹟

LVEF(%)74.47±2.5074.05±4.19

44.39±2.04※

55.15±2.28﹟

LVFS(%)39.72±2.23

39.49±3.63

20.39±1.01※

26.35±1.28﹟

與假手術組相比，※P<0.05；與心衰組相比，﹟P<0.05假手術組（n=8）假手術穩(wěn)心顆粒組（n=8）心衰組（n=7）心衰穩(wěn)心顆粒組（n=7）

結果穩(wěn)心顆粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0穩(wěn)心顆粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS*P<0.05,與假手術組比較，＃P<0.05,與心衰組比較

結果穩(wěn)心顆粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS心衰組RyR2mRNA表達降低,穩(wěn)心顆粒對RyR2表達無影響RyR2β-actin

1.

shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug149bp184bp

12341234*P<0.05

結果心衰組RyR2mRNA表達降低,穩(wěn)心顆粒對RyR2表達無影心衰組SERCA2a表達降低，心衰穩(wěn)心顆粒組

SERCA2a表達水平上調

143bp184bpSERCA2aβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug*P<0.05,與假手術組比較，＃P<0.05,與心衰組比較123

4

1234

結果心衰組SERCA2a表達降低，心衰穩(wěn)心顆粒組

SE各組間PLB表達無顯差異146bp184bpPLBβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug

12341234P>0.05

結果各組間PLB表達無顯差異146bp184bpPLBβ-act心衰組NCXmRNA和蛋白水平表達降低

穩(wěn)心顆粒對NCX表達無影響133bp184bpNCXβ-actin*P<0.05vs假手術組1.

shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug123

41234結果心衰組NCXmRNA和蛋白水平表達降低

穩(wěn)心顆粒對NC本研究采用主動脈瓣返流聯(lián)合腹主動脈縮窄致左室壓力和容量超負荷的方法成功制作家兔心衰模型

穩(wěn)心顆?？稍黾尤萘亢蛪毫Τ摵尚乃ネ玫腖VEF和LVFS，改善左室收縮功能結論本研究采用主動脈瓣返流聯(lián)合腹主動脈縮窄致左室壓力和容量超負荷結論穩(wěn)心顆粒改善心衰心功能的機制SERCA2a表達↑SR攝鈣能力↑SR鈣容量↑鈣瞬變↑穩(wěn)心顆粒收縮功能↑舒張期Ca2+濃度↓舒張功能↑胞漿Ca2+清除率↑結論穩(wěn)心顆粒改善心衰心功能的機制SERCA2aPLB表達水平不變SERCA表達水平↑PLB/SERCA2a水平比值↓PLB對SERCA2a的抑制作用↓SERCA2a功能↑穩(wěn)心顆粒改善心衰心功能的機制結論PLB表達水平不變SERCA表達水平↑PLB/SER 心衰組NCXmRNA和蛋白表達減少，可能與心衰分期有關，相關的機制還需要進一步研究。結論 心衰組NCXmRNA和蛋白表達減少，可能與心衰分期有關穩(wěn)心顆?？梢欢ǔ潭壬细纳迫萘亢蛪毫Τ摵纤录彝眯乃ツＰ偷男墓δ?/p>

穩(wěn)心顆?？梢种芐ERCA2a表達下降并增強其活性，進而改善心衰時鈣循環(huán)，改善心肌收縮功能和舒張功能結論穩(wěn)心顆?？梢欢ǔ潭壬细纳迫萘亢蛪毫Τ摵纤录彝眯乃ツＰ偷男奈礄z測鈣調控蛋白的磷酸化程度未測定胞漿內鈣離子濃度和相關離子通道電流的變化局限性未檢測鈣調控蛋白的磷酸化程度局限性謝謝！謝謝！研究背景心肌細胞收縮/舒張功能與心肌細胞內鈣循環(huán)密切相關心衰時心肌細胞鈣離子循環(huán)異常是心肌舒縮功能障礙的細胞學基礎穩(wěn)心顆粒抗心律失常時能改善心衰患者和動物的心功能穩(wěn)心顆粒與西藥聯(lián)合應用治療CHF具有協(xié)同增強心功能的作用研究背景心肌細胞收縮/舒張功能與心肌細胞內鈣循環(huán)密切相關Bers(2002)Nature415:198-205鈣循環(huán)Bers(2002)Nature415:198-20通過左心容量和壓力超負荷方法制作家兔心衰模型及穩(wěn)心顆粒對心衰家兔心功能的作用探討穩(wěn)心顆粒對心衰時鈣調控蛋白的影響研究目的通過左心容量和壓力超負荷方法制作家兔心衰模型及穩(wěn)心顆粒對心衰實驗動物

新西蘭大耳白兔，3月齡，雌雄不拘，體重2.0～3.0kg分組假手術組（shame）8只假手術穩(wěn)心顆粒組(HF-drug)

8只心衰組(HF)

10只心衰穩(wěn)心顆粒組(HF-drug)

10只

材料和方法實驗動物材料和方法主要器材

多道生理記錄儀（中國四川錦江通用實業(yè)有限公司）超聲心動圖儀（Vivid7，美國GE公司）基因擴增儀（Bioneer，EDC-810)

DNA電泳儀（Bio-RAD，Sub-CellModel96）酶標儀（PerKinElmer，Wallac1420）凝膠成像儀（Bio-RAD，UniversalHoodⅡ）

材料和方法主要器材材料和方法材料和方法主要藥品和試劑穩(wěn)心顆粒（山東步長制藥有限公司）肝素鈉注射液（天津生物化學制藥有限公司）

鈣調控蛋白引物（InvitrogenBiot）鈣調控蛋白一抗（abcam公司）組織總蛋白提取試劑盒（谷歌生物公司）材料和方法主要藥品和試劑穩(wěn)心顆粒心衰動物模型制作

新西蘭大耳兔主動脈瓣關閉不全腹主動脈縮窄EF<45%LVESD>1.20cm脈壓增大50%心衰動物模型制作新西蘭大耳兔主動脈瓣關閉不全腹主動脈縮窄E超聲資料左室舒張末內徑LVEDD左室收縮末內徑LVESD左室舒張末容積LVEDV左室收縮末容積LVESV左室射血分數LVEF左室短軸縮短分數LVFS檢測指標超聲資料檢測指標RT-PCR和Westernblot肌漿網鈣泵SERCA2a雷諾定受體RyR2受磷蛋白PLB鈉鈣交換體NCX基因和蛋白表達情況檢測指標RT-PCR和Westernblot檢測指標計量數據均以均數±標準差表示采用單因素方差分析所有數據均采用SPSS13.0分析P<0.05有統(tǒng)計學意義統(tǒng)計學處理計量數據均以均數±標準差表示統(tǒng)計學處理穩(wěn)心顆粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0.13

1.31±0.10

1.84±0.08※1.55±0.07﹟LVESD(mm)0.78±0.070.81±0.081.54±0.12※

1.05±0.07﹟LVEDV(ml)4.18±1.074.08±0.80

10.34±1.19※

6.68±0.79﹟

LVESV(ml)1.06±0.271.16±0.31

5.90±0.75※

3.04±0.51﹟

LVEF(%)74.47±2.5074.05±4.19

44.39±2.04※

55.15±2.28﹟

LVFS(%)39.72±2.23

39.49±3.63

20.39±1.01※

26.35±1.28﹟

與假手術組相比，※P<0.05；與心衰組相比，﹟P<0.05假手術組（n=8）假手術穩(wěn)心顆粒組（n=8）心衰組（n=7）心衰穩(wěn)心顆粒組（n=7）

結果穩(wěn)心顆粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0穩(wěn)心顆粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS*P<0.05,與假手術組比較，＃P<0.05,與心衰組比較

結果穩(wěn)心顆粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS心衰組RyR2mRNA表達降低,穩(wěn)心顆粒對RyR2表達無影響RyR2β-actin

1.

shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug149bp184bp

12341234*P<0.05

結果心衰組RyR2mRNA表達降低,穩(wěn)心顆粒對RyR2表達無影心衰組SERCA2a表達降低，心衰穩(wěn)心顆粒組

SERCA2a表達水平上調

143bp184bpSERCA2aβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug*P<0.05,與假手術組比較，＃P<0.05,與心衰組比較123

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結果心衰組SERCA2a表達降低，心衰穩(wěn)心顆粒組

SE各組間PLB表達無顯差異146bp184bpPLBβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug

12341234P>0.05

結果各組間PLB表達無顯差異146bp184bpPLBβ-act心衰組NCXmRNA和蛋白水平表達降低

穩(wěn)心顆粒對NCX表達無影響133bp184bpNCXβ-actin*P<0.05vs假手術組1.

shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug1