免疫化學(xué)診斷技術(shù)的分類與局限課件

免疫化學(xué)診斷技術(shù)的進展

AutomatedChemiluminescenceSystem免疫化學(xué)診斷技術(shù)的進展AutomatedChemilum利用抗原抗體反應(yīng)和分離技術(shù)測定(量)與疾病有關(guān)的化學(xué)分子。免疫化學(xué)診斷技術(shù)利用抗原抗體反應(yīng)和分離技術(shù)測定(量)與疾病有關(guān)的化學(xué)分子。免免疫同位素標(biāo)記測定法化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光偏振熒光時間分辨熒光電化學(xué)發(fā)光直接化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)診斷技術(shù)的分類

免疫同位素標(biāo)記測定法免疫化學(xué)診斷技術(shù)的分類免疫同位素標(biāo)記測定法放射免疫法已有30多年歷史。比較其它傳統(tǒng)的方法，它有特異性好，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，可靠性強等特點，故在臨床科研上廣泛使用。免疫同位素標(biāo)記測定法放射免疫法已有30多年歷史。比較其它傳統(tǒng)免疫同位素標(biāo)記法之局限半衰期短；試劑批內(nèi)與批間差異大；反應(yīng)過程長；靈敏度有限；放射性廢物的處理；免疫同位素標(biāo)記法之局限半衰期短；免疫化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光偏振熒光時間分辨熒光電化學(xué)發(fā)光直接化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光(EMCLIA)原理：抗體包被的塑料固相加入待測樣本-抗原加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體洗加入底物-4-Mup,發(fā)光產(chǎn)品：雅培Axsym,梅里埃Vidas,強生Vitros,DPCImmulite2000,羅氏ES300免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光(EMCL原理：標(biāo)記在小分子抗原上的熒光素經(jīng)485nm的激發(fā)偏振光照射後，發(fā)出光子，經(jīng)過偏振儀形成525~550nm的偏振光；這一偏振光的強度與熒光素受激發(fā)時分子轉(zhuǎn)動的速度呈反比，游離的熒光素標(biāo)記抗原，分子小，轉(zhuǎn)動速度快，激發(fā)後發(fā)射的光子散向四面八方，因此偏振光信號弱；在測定過程中待測抗原小分子，熒光標(biāo)記抗原小分子和特導(dǎo)性沆體大分子同時加入到一反應(yīng)杯中，待測抗原越少，與抗體競爭結(jié)合的量越少，而熒光標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合就越多，而熒光標(biāo)記的小分子抗原與大分子抗體結(jié)合後，其分子的轉(zhuǎn)動速度減慢，由此熒光偏振信號強。產(chǎn)品：雅培Axsym免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-偏振熒光(FPIA)原理：免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-偏振熒光(F原理：標(biāo)記物為三價稀土離子如：銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鏑(Dy3+)和鋱(Tb3+)等，它們可利用具有雙功能基團結(jié)構(gòu)的螫合劑，在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結(jié)合，形成稀土離子—螫合劑—抗原結(jié)合物。當(dāng)標(biāo)記稀土離子的抗原與待測抗原共同與抗體競爭結(jié)合，形成抗原抗體免疫復(fù)合物，其中含有標(biāo)記稀土離子，然後利用時間分辨熒光分析儀，可測出復(fù)合物中稀土離子發(fā)射熒光的強度，以此確定待測抗原的含量。產(chǎn)品：EG&G的DELFIA免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-時間分辨熒光(TRFIA)原理：免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-時間分辨熒光(TRF原理：先將特異性抗體包被在磁性微珠。另外將發(fā)光劑[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記在特異性抗體上。將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體共同溫育，形成磁性微珠包被抗體—抗原—發(fā)光劑標(biāo)記杭體復(fù)合物。加入TPA緩沖液和TPA在電極表面進行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光。產(chǎn)品：羅氏Elecsys免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-電化學(xué)發(fā)光(ECLIA)原理：免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-電化學(xué)發(fā)光(E免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-直接化學(xué)發(fā)光(CLIA)原理：利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒子分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法。以丫啶酯為發(fā)光的標(biāo)記物，固相載體為極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯(lián)免中的雙抗體夾心法和競爭結(jié)合法相似。單克隆抗體或抗原包被磁性微?？乖贵w結(jié)合，洗滌分離加入氧化劑發(fā)光：經(jīng)過加入氧化劑（H2O2）和pH糾正液（NaOH）使成鹼性，這時丫啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光，集光器和光電倍增管接收。記錄5秒鐘內(nèi)所產(chǎn)生的光子能。產(chǎn)品：拜耳ACS:180SE,AdviaCentaur,AdviaIMS免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-直接化學(xué)發(fā)光(CLIA全自動化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)拜耳ACS(AutomatedChemiluminescenceSystem)免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-直接化學(xué)發(fā)光(CLIA)全自動化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

直接化學(xué)發(fā)光的機理

-ACRIDINEESTER丫啶酯最簡易最快速非常穩(wěn)定；與抗體或抗原結(jié)合不影響發(fā)光；N+CH3BrCOOCH3CH3R丫啶酯：在pH>10時，快速充分釋放光子。直接化學(xué)發(fā)光的機理

-ACRIDINE丫啶酯-ACRIDINEESTER不需催化劑穩(wěn)定性高產(chǎn)光強線性好本底低反應(yīng)快結(jié)合后不影響發(fā)光靈敏度高-可達10-15摩爾直接化學(xué)發(fā)光的機理丫啶酯-ACRIDINEESTER不需催化劑直接化學(xué)丫丫

啶啶

酯酯

一一

秒

鐘

直直

接接

閃閃

光光

，，強強

度度

是是

碘碘125125在在

一一

分分

鐘鐘

發(fā)發(fā)

出出

光光

子子

的的

十十

萬萬

倍倍06.05.02.01.00200,000400,000600,000800,0001,000,0003.04.0秒100200300400500600直

接

閃

光

慢

發(fā)

光

光

強

度直接化學(xué)發(fā)光的機理直

接

閃

光

慢

發(fā)

光

丫丫啶啶酯酯一一秒鐘直直接接直接化學(xué)發(fā)光的機理由

于

超

低

本

底,,直

接

化

學(xué)

發(fā)

光

具

有

高

靈敏

性TracerConcentration(moles/L)sensitivitylimitoffluorescencesensitivitylimitofchemiluminescenceFluorescenceBackgroundNoiseLevelChemiluminescenceBackgroundLevel

1010998877665544332211001010-15.51010-171010-161010-151010-141010-131010-121010-101010-91010-81010-11Relative

Light

Intensitytracersignal直接化學(xué)發(fā)光的機理由于超低本底,,直接直接化學(xué)發(fā)光的機理直直

接接

化化

學(xué)學(xué)

發(fā)發(fā)

光光

不不

受受

pHpH

和和

溫溫

度度

影影

響響nn減輕漂移減輕漂移nn提高重復(fù)性提高重復(fù)性00202040406060808010010012012088991010111112121313pHpHpHpHTemperatureDegreesCTemperatureDegreesC120120100100808060604040202000151520202525303035354040直

接

閃

光慢慢

發(fā)發(fā)

光光

直直

接接

閃閃

光光慢慢

發(fā)發(fā)

光光RelativeRelative

LIght

LIght

Intensity(%)

Intensity(%)溫溫

度度

Relative

Light

Intensity直接化學(xué)發(fā)光的機理直直接接化化學(xué)學(xué)發(fā)發(fā)光丫啶

酯直接發(fā)光CL(AE)電

化

學(xué)

發(fā)

光

ECL(TU+TPA)信

號

的

產(chǎn)

生丫啶

酯

與

H2O2

的

簡

單反

應(yīng)需

三

個

電

板

去

激

發(fā)

由

幾

個分

子

態(tài)

參

加

的

復(fù)

雜

反

應(yīng)速

度不

到2秒5秒，

但

洗

電

極

需4060秒靈

敏

度10-15

M，足

以

滿

足

免疫

試

驗

的

要

求10-11

-10-17

M本

底極

低較

高，過

剩

的

TPA會

發(fā)

光特

異

性不

受

溫

度

與

pH的影響受

pH,金

屬

及

螯

合

物

影

響直接化學(xué)發(fā)光與電化學(xué)發(fā)光比較丫啶

酯直接發(fā)光CL(AE)電

化

學(xué)

發(fā)

光

ECL(TU+TPA)信

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pH的影響受

pH,金

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及

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合

物

影

響丫啶酯直接發(fā)光CL(AE)電化學(xué)發(fā)光ECL(T微顆粒粗顆粒YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY功能抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合與未結(jié)合的分離特點縮短擴散距離提高捕獲效率表面面積為包覆的試管和玻璃珠之50倍有利于結(jié)合動力學(xué)提供更高之靈敏度微磁顆粒技術(shù)微顆粒粗顆粒YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY扁平的設(shè)計結(jié)合相磁場狄窄空間以利快速抽吸吸液探針以便最怏速,最干凈地分離結(jié)合物與未結(jié)合物以便獲得高靈敏度及高重復(fù)性試杯的最佳設(shè)計

-配合微磁粒體技術(shù)

扁平的設(shè)計結(jié)合相磁場狄窄空間以利快速抽吸吸液探針以便最降低人抗鼠抗體(HAMA)的干擾

為大分子的測定提供了高靈敏度和高特異性單抗多抗直接發(fā)光FSH超廣磁粒反應(yīng)過程的結(jié)構(gòu)設(shè)計

-

單-多抗體標(biāo)記法降低人抗鼠抗體(HAMA)的干擾

為是一種確保高靈敏度同時又廣譜的設(shè)計BGG血清結(jié)合蛋白

T3AET3T3AET3T2T2T2BGGT2T2直接發(fā)光反應(yīng)過程的結(jié)構(gòu)設(shè)計

-

抗體一步標(biāo)記法磁顆粒是一種確保高靈敏度同時又廣譜的ACS:180SE之特性隨機存取直接化學(xué)發(fā)光臺型設(shè)計180測試/小時十五分鐘內(nèi)首次結(jié)果自動重復(fù)功能自動機內(nèi)稀釋凝塊識別兼容原樣品試管條碼識別60個樣品容量 緊急樣品容納機上容納十三種項目試劑清單微量固相廢物質(zhì)控報告儲存機上儲存質(zhì)詢，電影演示一小時離機雙向界面宿主詢問廣譜試驗項目系列實驗室自動化匹配ACS:180SE之特性隨機存取緊急樣臨床應(yīng)用

項目按疾病分類甲狀腺功能

T4,T3,TUp,FT4,FT3,TSH,TSH-3生殖系統(tǒng)

ThCG,LH2,FSH,Estradiol,Estradiol6-II,Progesterone,Prolactin,Testosterone內(nèi)分泌

Cortisol(serum+urine)

貧血

B12,Ferritin,Folate,RBCFolate心血管

CK-MB,Myoglobin,TroponinI

腫瘤標(biāo)記

CEA,AFP,PSA2,fPSA,CA15-3,CA125,CA19-9

藥濃度監(jiān)測

Digoxin,Theophylline,Phenobarbital,Phenytoin,Vancomycin,Gentamicin,Digitoxin,Carbamazepine

骨代謝

Deoxypyridinoline

過敏

TotalIgE 臨床應(yīng)用

項目按疾病分類甲狀腺功能發(fā)展中新項目Insulin,C-peptide,anti-insulinDHEA-SulfateSHBGTobramycin,QuinidineHomocysteinebeta-2microglobulinE3Anti-TPOAnti-TGEquimolarPSAComplexPSAHER-2/neu發(fā)展中新項目Insulin,C-peptide免疫化學(xué)定量分析之進化2.5hours0.12U/mL79年IRMA50minutes.03U/mL88年半自動Magic7.5minutes.03U/mL91年ACS:1802days1.0U/mL70年代中商業(yè)化RIA5days1.0U/mL60年代初研究RIA以TSH甲狀腺刺激素試驗為例免疫化學(xué)定量分析之進化2.5hours79年50minu免疫化學(xué)方法靈敏度之提高10-16

M10-11

M10-12

M免疫熒光免疫媒標(biāo)放射免疫直接化學(xué)發(fā)光10-11-10-17

M免疫傳感技術(shù)免疫PCR技術(shù)?M電化學(xué)發(fā)光免疫熒光偏振免疫化學(xué)方法靈敏度之提高10-16M10-11M10ACS:180系列發(fā)展史1974-首創(chuàng)微玻璃珠放免法1978-首次FT4放免法1979-首次TSH放免法1982-首次維生素12/葉酸固相法1983-MAGIC上市1986-首次直接化學(xué)發(fā)光免疫分析儀-MAGICLITE1991-首次全直動隨機存取之化學(xué)發(fā)光免疫分析儀-ACS1992-首次全直動維生素12/葉酸測定1993-延長操作附件1994-首次凝塊探測功能1994-ACS通過ISO9001標(biāo)準(zhǔn)ACS:180系列發(fā)展史1974-首創(chuàng)微玻璃

心血管系統(tǒng)如何能更快更準(zhǔn)確更全面的診斷AMI心血管系統(tǒng)如何能更快更準(zhǔn)確更全面的診斷AMI時心電圖并不能典型歸類診斷急性心肌梗塞之困難一半有不穩(wěn)定胸口窒息痛的病人，入院病人重發(fā)梗塞診斷困難引致不能及時診斷AMI延遲適當(dāng)?shù)闹委煛⒆o理臨床需要盡早分辨、準(zhǔn)確診斷AMI方法時心電圖并不能典型歸類診斷急性心肌梗塞之困難一半有不穩(wěn)定肌肉組織心肌心肌細胞特異性標(biāo)志肌鈣蛋白

I

C

T肌鈣蛋白I釋放入血c心肌壞死（氨基酸順序40％差異）肌肉組織心肌心肌細胞特異性標(biāo)志肌鈣蛋白ICT肌鈣蛋心肌細胞肌紅蛋白肌酐激霉MB心肌壞死釋放入血（含量大）血液濃度明顯升高(CK-MB)心肌細胞肌紅蛋白肌酐激霉MB心肌壞死釋放入血（含量大）血65432104812162024487296h肌紅蛋白CK-MB肌鈣蛋白濃度急性心肌梗塞后各項指標(biāo)變化604812162024肌紅蛋白升高高峰回落肌酐激霉MB肌鈣蛋白I1-2h4-8h6-8h5-12h10-24h12-24h18-30h48-72h5-7d肌紅蛋白升高高峰回落肌酐激霉MB肌鈣蛋白I1-2h4-8h肌紅蛋白的臨床意義早期診斷特異性低靈敏度高急性心梗后最早(1-2h)出現(xiàn)的標(biāo)記最早能排除非急性心梗陰性預(yù)測率為99%體內(nèi)周期短，對重發(fā)梗塞特別靈敏肌紅蛋白測定能有效分辨非急性心梗，使急性心梗病人能盡早得到治療.有效觀察溶栓療效肌紅蛋白的臨床意義早期診斷特異性低靈敏度高急性心梗后最肌鈣蛋白I的臨床意義診斷急性心肌梗塞特異性>98%特異性強、確診率高靈敏度低急性心梗發(fā)病后6h才出現(xiàn)，應(yīng)與肌紅蛋白一同使用肌鈣蛋白I升高即可確診為急性心肌梗塞，得到治療體內(nèi)周期長，對外地病人延誤求診亦能診斷對極輕微的心肌創(chuàng)傷都能檢出肌鈣蛋白I的臨床意義診斷急性心肌梗塞特異性>98%特胸痛ECG發(fā)病肌鈣蛋白I肌紅蛋白CK-MB急性心梗+–++<8h>8h隨訪+復(fù)發(fā)心梗胸痛ECG發(fā)病肌鈣蛋白I肌紅蛋白急性心梗+–++<8h>肌紅蛋白注意事項肌酐激霉MB骨骼肌損傷肌紅蛋白升高腎功能衰竭CK-MB

增高肌紅蛋白注意事項肌酐激霉MB骨骼肌損傷肌紅蛋白升高腎功能衰甲狀腺功能診斷

T3T4TSHTSH-3

FrT3FrT4Tup甲狀腺功能診斷T3FrT3腫瘤標(biāo)志物

CA-199CA-153CA-125

PSAAFPCEA腫瘤標(biāo)志物CA-199PSA

CA

系列一組糖粘蛋白類腫瘤標(biāo)志物，為細胞膜上的糖脂質(zhì)，因分別被鼠單克隆抗體199、153、125識別得名。CA系列一組糖粘蛋白類腫瘤標(biāo)志物，為細胞膜上的糖脂乳癌腫瘤標(biāo)志物存在于胎兒胰、腸、卵巢、子宮、膽上皮等處及乳腺癌組織。

CA125存在胚胎體腔上皮細胞中，出生后消失，卵巢癌細胞中重新出現(xiàn)。卵巢癌腫瘤標(biāo)志物

CA199分布于胎兒胰、膽囊、肝、腸及正常人胰、膽管上皮等處。胃腸癌腫瘤標(biāo)志物

CA153乳癌腫瘤標(biāo)志物存在于胎兒胰、腸、卵巢、子宮、膽上皮等處及乳腺CA199檢測的臨床意義消化道腫瘤的診斷胰癌81.8%肝癌78.5%胃癌59.4%腸癌58.6%消化道腫瘤療效觀察的指標(biāo)CA199檢測的臨床意義消化道腫瘤的診斷胰癌CA153檢測的臨床意義乳腺癌的診斷乳腺癌術(shù)后療效觀察、復(fù)發(fā)監(jiān)測陽性率50~55%與分期有關(guān)Ⅰ20.7%Ⅱ57.1%Ⅲ75.6%結(jié)腸、胰腺、卵巢、子宮癌可升高CA153檢測的臨床意義乳腺癌的診斷乳腺癌術(shù)后療效觀CA125檢測的臨床意義卵巢癌的篩查和診斷卵巢癌療效觀察的指標(biāo)卵巢癌82%卵巢良性病6%術(shù)后CA125升降標(biāo)志著腫瘤的復(fù)發(fā)與痊愈，符合率為85~93%。卵巢癌預(yù)后的判定指標(biāo)CA125檢測的臨床意義卵巢癌的篩查和診斷卵巢癌療效前列腺特異抗原(PSA)PSA是唯一由前列腺上皮產(chǎn)生的單體糖蛋白前列腺增生癥可有PAS輕度增高PAS明顯升高是癌腫浸潤進展的標(biāo)志有助于前列腺癌的臨床分期和療效觀察敏感性87.8%特異性70.2%前列腺癌的篩選指標(biāo)之一前列腺特異抗原(PSA)PSA是唯一由前列腺上皮產(chǎn)生的單體骨型膠原脫氧吡啶啉(Deoxypyridinoline)釋放入血經(jīng)尿排出吸收、分解反映骨吸收率的生化指標(biāo)骨代謝DPD骨型膠原脫氧吡啶啉(Deoxypyridinoline)釋骨質(zhì)疏松癥骨形成率骨吸收率>骨代謝負(fù)平衡尿DPD明顯升高骨量減少骨質(zhì)疏松癥骨形成率骨吸收率>骨代謝負(fù)平衡尿DPD明顯升高骨骨質(zhì)疏松癥的療效觀察DPD

<25%DPD

>25%療效好、維持治療療效差、調(diào)整治療骨質(zhì)疏松癥的療效觀察DPD<25%DPD>25生殖系統(tǒng)

HCG

FSH

LH

PRL

E2

T

P生殖系統(tǒng)HCGFSHLHPRLE2TP

地高辛

洋地黃

茶堿

苯妥英

苯巴比妥

可馬西平

萬古霉素

慶大霉素藥物濃度監(jiān)測地高辛苯巴比妥藥物濃度監(jiān)測鐵蛋白(Ferritin)

血液系統(tǒng)維生素B12葉酸(Folate)紅細胞葉酸(RBCFolate)鐵蛋白(Ferritin)血液系統(tǒng)維生素B12葉酸免疫化學(xué)診斷技術(shù)的進展

AutomatedChemiluminescenceSystem免疫化學(xué)診斷技術(shù)的進展AutomatedChemilum利用抗原抗體反應(yīng)和分離技術(shù)測定(量)與疾病有關(guān)的化學(xué)分子。免疫化學(xué)診斷技術(shù)利用抗原抗體反應(yīng)和分離技術(shù)測定(量)與疾病有關(guān)的化學(xué)分子。免免疫同位素標(biāo)記測定法化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光偏振熒光時間分辨熒光電化學(xué)發(fā)光直接化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)診斷技術(shù)的分類

免疫同位素標(biāo)記測定法免疫化學(xué)診斷技術(shù)的分類免疫同位素標(biāo)記測定法放射免疫法已有30多年歷史。比較其它傳統(tǒng)的方法，它有特異性好，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，可靠性強等特點，故在臨床科研上廣泛使用。免疫同位素標(biāo)記測定法放射免疫法已有30多年歷史。比較其它傳統(tǒng)免疫同位素標(biāo)記法之局限半衰期短；試劑批內(nèi)與批間差異大；反應(yīng)過程長；靈敏度有限；放射性廢物的處理；免疫同位素標(biāo)記法之局限半衰期短；免疫化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光偏振熒光時間分辨熒光電化學(xué)發(fā)光直接化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光法酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光(EMCLIA)原理：抗體包被的塑料固相加入待測樣本-抗原加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體洗加入底物-4-Mup,發(fā)光產(chǎn)品：雅培Axsym,梅里埃Vidas,強生Vitros,DPCImmulite2000,羅氏ES300免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光(EMCL原理：標(biāo)記在小分子抗原上的熒光素經(jīng)485nm的激發(fā)偏振光照射後，發(fā)出光子，經(jīng)過偏振儀形成525~550nm的偏振光；這一偏振光的強度與熒光素受激發(fā)時分子轉(zhuǎn)動的速度呈反比，游離的熒光素標(biāo)記抗原，分子小，轉(zhuǎn)動速度快，激發(fā)後發(fā)射的光子散向四面八方，因此偏振光信號弱；在測定過程中待測抗原小分子，熒光標(biāo)記抗原小分子和特導(dǎo)性沆體大分子同時加入到一反應(yīng)杯中，待測抗原越少，與抗體競爭結(jié)合的量越少，而熒光標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合就越多，而熒光標(biāo)記的小分子抗原與大分子抗體結(jié)合後，其分子的轉(zhuǎn)動速度減慢，由此熒光偏振信號強。產(chǎn)品：雅培Axsym免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-偏振熒光(FPIA)原理：免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-偏振熒光(F原理：標(biāo)記物為三價稀土離子如：銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鏑(Dy3+)和鋱(Tb3+)等，它們可利用具有雙功能基團結(jié)構(gòu)的螫合劑，在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結(jié)合，形成稀土離子—螫合劑—抗原結(jié)合物。當(dāng)標(biāo)記稀土離子的抗原與待測抗原共同與抗體競爭結(jié)合，形成抗原抗體免疫復(fù)合物，其中含有標(biāo)記稀土離子，然後利用時間分辨熒光分析儀，可測出復(fù)合物中稀土離子發(fā)射熒光的強度，以此確定待測抗原的含量。產(chǎn)品：EG&G的DELFIA免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-時間分辨熒光(TRFIA)原理：免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-時間分辨熒光(TRF原理：先將特異性抗體包被在磁性微珠。另外將發(fā)光劑[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記在特異性抗體上。將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體共同溫育，形成磁性微珠包被抗體—抗原—發(fā)光劑標(biāo)記杭體復(fù)合物。加入TPA緩沖液和TPA在電極表面進行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光。產(chǎn)品：羅氏Elecsys免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-電化學(xué)發(fā)光(ECLIA)原理：免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-電化學(xué)發(fā)光(E免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-直接化學(xué)發(fā)光(CLIA)原理：利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒子分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法。以丫啶酯為發(fā)光的標(biāo)記物，固相載體為極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯(lián)免中的雙抗體夾心法和競爭結(jié)合法相似。單克隆抗體或抗原包被磁性微?？乖贵w結(jié)合，洗滌分離加入氧化劑發(fā)光：經(jīng)過加入氧化劑（H2O2）和pH糾正液（NaOH）使成鹼性，這時丫啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光，集光器和光電倍增管接收。記錄5秒鐘內(nèi)所產(chǎn)生的光子能。產(chǎn)品：拜耳ACS:180SE,AdviaCentaur,AdviaIMS免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-直接化學(xué)發(fā)光(CLIA全自動化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)拜耳ACS(AutomatedChemiluminescenceSystem)免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

-直接化學(xué)發(fā)光(CLIA)全自動化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)免疫化學(xué)發(fā)光法簡介

直接化學(xué)發(fā)光的機理

-ACRIDINEESTER丫啶酯最簡易最快速非常穩(wěn)定；與抗體或抗原結(jié)合不影響發(fā)光；N+CH3BrCOOCH3CH3R丫啶酯：在pH>10時，快速充分釋放光子。直接化學(xué)發(fā)光的機理

-ACRIDINE丫啶酯-ACRIDINEESTER不需催化劑穩(wěn)定性高產(chǎn)光強線性好本底低反應(yīng)快結(jié)合后不影響發(fā)光靈敏度高-可達10-15摩爾直接化學(xué)發(fā)光的機理丫啶酯-ACRIDINEESTER不需催化劑直接化學(xué)丫丫

啶啶

酯酯

一一

秒

鐘

直直

接接

閃閃

光光

，，強強

度度

是是

碘碘125125在在

一一

分分

鐘鐘

發(fā)發(fā)

出出

光光

子子

的的

十十

萬萬

倍倍06.05.02.01.00200,000400,000600,000800,0001,000,0003.04.0秒100200300400500600直

接

閃

光

慢

發(fā)

光

光

強

度直接化學(xué)發(fā)光的機理直

接

閃

光

慢

發(fā)

光

丫丫啶啶酯酯一一秒鐘直直接接直接化學(xué)發(fā)光的機理由

于

超

低

本

底,,直

接

化

學(xué)

發(fā)

光

具

有

高

靈敏

性TracerConcentration(moles/L)sensitivitylimitoffluorescencesensitivitylimitofchemiluminescenceFluorescenceBackgroundNoiseLevelChemiluminescenceBackgroundLevel

1010998877665544332211001010-15.51010-171010-161010-151010-141010-131010-121010-101010-91010-81010-11Relative

Light

Intensitytracersignal直接化學(xué)發(fā)光的機理由于超低本底,,直接直接化學(xué)發(fā)光的機理直直

接接

化化

學(xué)學(xué)

發(fā)發(fā)

光光

不不

受受

pHpH

和和

溫溫

度度

影影

響響nn減輕漂移減輕漂移nn提高重復(fù)性提高重復(fù)性00202040406060808010010012012088991010111112121313pHpHpHpHTemperatureDegreesCTemperatureDegreesC120120100100808060604040202000151520202525303035354040直

接

閃

光慢慢

發(fā)發(fā)

光光

直直

接接

閃閃

光光慢慢

發(fā)發(fā)

光光RelativeRelative

LIght

LIght

Intensity(%)

Intensity(%)溫溫

度度

Relative

Light

Intensity直接化學(xué)發(fā)光的機理直直接接化化學(xué)學(xué)發(fā)發(fā)光丫啶

酯直接發(fā)光CL(AE)電

化

學(xué)

發(fā)

光

ECL(TU+TPA)信

號

的

產(chǎn)

生丫啶

酯

與

H2O2

的

簡

單反

應(yīng)需

三

個

電

板

去

激

發(fā)

由

幾

個分

子

態(tài)

參

加

的

復(fù)

雜

反

應(yīng)速

度不

到2秒5秒，

但

洗

電

極

需4060秒靈

敏

度10-15

M，足

以

滿

足

免疫

試

驗

的

要

求10-11

-10-17

M本

底極

低較

高，過

剩

的

TPA會

發(fā)

光特

異

性不

受

溫

度

與

pH的影響受

pH,金

屬

及

螯

合

物

影

響直接化學(xué)發(fā)光與電化學(xué)發(fā)光比較丫啶

酯直接發(fā)光CL(AE)電

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光

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pH,金

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響丫啶酯直接發(fā)光CL(AE)電化學(xué)發(fā)光ECL(T微顆粒粗顆粒YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY功能抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合與未結(jié)合的分離特點縮短擴散距離提高捕獲效率表面面積為包覆的試管和玻璃珠之50倍有利于結(jié)合動力學(xué)提供更高之靈敏度微磁顆粒技術(shù)微顆粒粗顆粒YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY扁平的設(shè)計結(jié)合相磁場狄窄空間以利快速抽吸吸液探針以便最怏速,最干凈地分離結(jié)合物與未結(jié)合物以便獲得高靈敏度及高重復(fù)性試杯的最佳設(shè)計

-配合微磁粒體技術(shù)

扁平的設(shè)計結(jié)合相磁場狄窄空間以利快速抽吸吸液探針以便最降低人抗鼠抗體(HAMA)的干擾

為大分子的測定提供了高靈敏度和高特異性單抗多抗直接發(fā)光FSH超廣磁粒反應(yīng)過程的結(jié)構(gòu)設(shè)計

-

單-多抗體標(biāo)記法降低人抗鼠抗體(HAMA)的干擾

為是一種確保高靈敏度同時又廣譜的設(shè)計BGG血清結(jié)合蛋白

T3AET3T3AET3T2T2T2BGGT2T2直接發(fā)光反應(yīng)過程的結(jié)構(gòu)設(shè)計

-

抗體一步標(biāo)記法磁顆粒是一種確保高靈敏度同時又廣譜的ACS:180SE之特性隨機存取直接化學(xué)發(fā)光臺型設(shè)計180測試/小時十五分鐘內(nèi)首次結(jié)果自動重復(fù)功能自動機內(nèi)稀釋凝塊識別兼容原樣品試管條碼識別60個樣品容量 緊急樣品容納機上容納十三種項目試劑清單微量固相廢物質(zhì)控報告儲存機上儲存質(zhì)詢，電影演示一小時離機雙向界面宿主詢問廣譜試驗項目系列實驗室自動化匹配ACS:180SE之特性隨機存取緊急樣臨床應(yīng)用

項目按疾病分類甲狀腺功能

T4,T3,TUp,FT4,FT3,TSH,TSH-3生殖系統(tǒng)

ThCG,LH2,FSH,Estradiol,Estradiol6-II,Progesterone,Prolactin,Testosterone內(nèi)分泌

Cortisol(serum+urine)

貧血

B12,Ferritin,Folate,RBCFolate心血管

CK-MB,Myoglobin,TroponinI

腫瘤標(biāo)記

CEA,AFP,PSA2,fPSA,CA15-3,CA125,CA19-9

藥濃度監(jiān)測

Digoxin,Theophylline,Phenobarbital,Phenytoin,Vancomycin,Gentamicin,Digitoxin,Carbamazepine

骨代謝

Deoxypyridinoline

過敏

TotalIgE 臨床應(yīng)用

項目按疾病分類甲狀腺功能發(fā)展中新項目Insulin,C-peptide,anti-insulinDHEA-SulfateSHBGTobramycin,QuinidineHomocysteinebeta-2microglobulinE3Anti-TPOAnti-TGEquimolarPSAComplexPSAHER-2/neu發(fā)展中新項目Insulin,C-peptide免疫化學(xué)定量分析之進化2.5hours0.12U/mL79年IRMA50minutes.03U/mL88年半自動Magic7.5minutes.03U/mL91年ACS:1802days1.0U/mL70年代中商業(yè)化RIA5days1.0U/mL60年代初研究RIA以TSH甲狀腺刺激素試驗為例免疫化學(xué)定量分析之進化2.5hours79年50minu免疫化學(xué)方法靈敏度之提高10-16

M10-11

M10-12

M免疫熒光免疫媒標(biāo)放射免疫直接化學(xué)發(fā)光10-11-10-17

M免疫傳感技術(shù)免疫PCR技術(shù)?M電化學(xué)發(fā)光免疫熒光偏振免疫化學(xué)方法靈敏度之提高10-16M10-11M10ACS:180系列發(fā)展史1974-首創(chuàng)微玻璃珠放免法1978-首次FT4放免法1979-首次TSH放免法1982-首次維生素12/葉酸固相法1983-MAGIC上市1986-首次直接化學(xué)發(fā)光免疫分析儀-MAGICLITE1991-首次全直動隨機存取之化學(xué)發(fā)光免疫分析儀-ACS1992-首次全直動維生素12/葉酸測定1993-延長操作附件1994-首次凝塊探測功能1994-ACS通過ISO9001標(biāo)準(zhǔn)ACS:180系列發(fā)展史1974-首創(chuàng)微玻璃

心血管系統(tǒng)如何能更快更準(zhǔn)確更全面的診斷AMI心血管系統(tǒng)如何能更快更準(zhǔn)確更全面的診斷AMI時心電圖并不能典型歸類診斷急性心肌梗塞之困難一半有不穩(wěn)定胸口窒息痛的病人，入院病人重發(fā)梗塞診斷困難引致不能及時診斷AMI延遲適當(dāng)?shù)闹委?、護理臨床需要盡早分辨、準(zhǔn)確診斷AMI方法時心電圖并不能典型歸類診斷急性心肌梗塞之困難一半有不穩(wěn)定肌肉組織心肌心肌細胞特異性標(biāo)志肌鈣蛋白

I

C

T肌鈣蛋白I釋放入血c心肌壞死（氨基酸順序40％差異）肌肉組織心肌心肌細胞特異性標(biāo)志肌鈣蛋白ICT肌鈣蛋心肌細胞肌紅蛋白肌酐激霉MB心肌壞死釋放入血（含量大）血液濃度明顯升高(CK-MB)心肌細胞肌紅蛋白肌酐激霉MB心肌壞死釋放入血（含量大）血65432104812162024487296h肌紅蛋白CK-MB肌鈣蛋白濃度急性心肌梗塞后各項指標(biāo)變化604812162024肌紅蛋白升高高峰回落肌酐激霉MB肌鈣蛋白I1-2h4-8h6-8h5-12h10-24h12-24h18-30h48-72h5-7d肌紅蛋白升高高峰回落肌酐激霉MB肌鈣蛋白I1-2h4-8h肌紅蛋白的臨床意義早期診斷特異性低