實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌及藥敏試驗(yàn)22課件

實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌和藥敏試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌和藥敏試驗(yàn)第一部分消毒滅菌1.掌握常用的消毒與滅菌技術(shù)2.熟悉紫外線殺菌試驗(yàn)的原理3.了解細(xì)菌L型的誘導(dǎo)和菌落類(lèi)型第一部分消毒滅菌1.掌握常用的消毒與滅菌技術(shù)擦拭法高壓蒸汽滅菌法常用消毒滅菌的方法物理法

化學(xué)法浸泡法熏蒸法噴霧法熱力消毒法生物凈化法輻射消毒法燃燒法烤箱法煮沸法干熱法濕熱法日光曝曬法紫外線燈照射法電子滅菌燈法電離輻射法擦拭法高壓蒸汽滅菌法常用消毒滅菌的方法物理法化學(xué)法浸泡法種類(lèi)方法效果用途干熱焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒灼滅菌接種環(huán)，試管口干烤干烤箱，熱空氣160~170oC×2h電磁波熱效應(yīng)滅菌滅菌玻璃器皿等耐高溫的物品醫(yī)療器械濕熱煮沸法100oC×5~10分鐘，沸水消毒(芽胞殺不死）飲水和食具高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌器103.4Kpa(15磅/吋2/1.05Kg/cm2)121.3oC×15~20分鐘滅菌（芽胞殺死）耐高溫、耐濕物品（基礎(chǔ)培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)輔料等）紅外線種類(lèi)方法效果用途焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒高壓蒸汽滅菌法的使用：p58加水→裝鍋→加蓋→排氣→滅菌→起鍋高壓蒸汽滅菌法的使用：p58加水→裝鍋→加蓋→排氣→滅菌→起實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌及藥敏試驗(yàn)22課件高壓蒸汽滅菌鍋使用步驟及注意事項(xiàng)：①先將筒內(nèi)注水，然后把要滅菌的物品裝入內(nèi)筒，再把蓋擰緊，打開(kāi)排氣閥門(mén)，開(kāi)始加熱。②水沸騰后，排氣閥門(mén)開(kāi)始排出氣體，待筒內(nèi)氣體全部排出后，關(guān)閉排氣閥門(mén)。（見(jiàn)書(shū)表2-6）③筒內(nèi)壓力維持103.4kPa，121℃，15~30min，即可達(dá)到滅菌的目的。④關(guān)閉熱源，自然放涼，待壓力表指針下降到零時(shí)，方可開(kāi)蓋取物。高壓蒸汽滅菌鍋使用步驟及注意事項(xiàng)：①先將筒內(nèi)注水，然后把要滅：260~266nm（最佳殺菌波長(zhǎng)）殺菌原理：使DNA上相鄰的T堿基通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合成二聚體，干擾DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。特點(diǎn)：穿透力弱，對(duì)皮膚、眼有損傷。適用范圍：適用于空氣和物體表面消毒。紫外線（ultravioletray，UV）：260~266nm（最佳殺菌波長(zhǎng)）紫外線（ultra濾過(guò)除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或氣體及孔徑<0.22μm的顆粒通過(guò)，細(xì)菌不能濾過(guò)。不能除病毒、支原體適用范圍：血清、毒素、輸液、生物制品、抗生素以及空氣等的除菌。濾過(guò)除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或第二部分藥敏試驗(yàn)1.掌握藥敏試驗(yàn)的原理、步驟、結(jié)果及意義第二部分藥敏試驗(yàn)1.掌握藥敏試驗(yàn)的原理、步驟、結(jié)果及實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌及藥敏試驗(yàn)22課件常用抗菌藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗(yàn)法（Etest）聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)特殊耐藥菌及耐藥酶的表型檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)等常用抗菌藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauert1、紙片擴(kuò)散法（K-B法）原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度1、紙片擴(kuò)散法（K-B法）原理：方法：菌液制備：挑取孵育16-24h的血平板上數(shù)個(gè)菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)；涂布接種：無(wú)菌棉拭蘸取菌液，在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60o，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周；貼含藥紙片：平板在室溫下干燥3-5min，用無(wú)菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm；孵育：35oC16-18h，量取抑菌圈直徑。方法：注意事項(xiàng)1紙片應(yīng)分布均勻，中心距離不小于24mm。2含菌平板必須避免過(guò)濃或過(guò)稀。3紙片貼完后應(yīng)在15min內(nèi)將平板反過(guò)來(lái)，置于37度溫箱中。4紙片一旦接觸培養(yǎng)基就不應(yīng)再挪動(dòng)位置。5要注意無(wú)菌操作。注意事項(xiàng)1紙片應(yīng)分布均勻，中心距離不小于24mm。結(jié)果：抑菌圈大腸桿菌金葡菌

慶大霉素青霉素環(huán)丙沙星（直徑mm）結(jié)論：？？？結(jié)果：抑菌圈大腸桿菌慶大霉素青霉素結(jié)果判讀：用刻度尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；報(bào)告：細(xì)菌對(duì)該抗生素是敏感（susceptible，S）；耐藥（resistant，R）；還是中介（intermediate，I）。結(jié)果判讀：18六、如何理解MIC值及藥敏結(jié)果？

每種藥物均提供定性和定量?jī)煞N結(jié)果。定性：敏感（S）表示該藥物對(duì)該細(xì)菌有抑制或殺滅作用。使用常規(guī)劑量可以達(dá)到有效的治療效果。

中介（中度敏感，I）表示細(xì)菌對(duì)該藥物治療的敏感性低于敏感菌株，必須加大劑量以達(dá)到更高的血藥濃度才能在特定的生理部位獲得有效的臨床效力；對(duì)于使用劑量有嚴(yán)格限制的藥物則必須重復(fù)測(cè)試以確定敏感還是耐藥。

耐藥（R）表示藥物常規(guī)劑量所達(dá)到的藥物濃度不能抑制或殺死細(xì)菌，即使加大劑量也不能達(dá)到治療效果或者超過(guò)了人體的正常耐受水平。定量：MIC（最低抑菌濃度）表示在體外達(dá)到抑制細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的最低的藥物濃度。臨床治療要求的血藥濃度一般為MIC值（μg/ml）的4-8倍。對(duì)于不同部位的不同藥物，其濃度可能更高或更低。應(yīng)具體情況具體分析，不可一概而論。

18六、如何理解MIC值及藥敏結(jié)果？每種藥物均提供定性和定19長(zhǎng)期使用抗生素的病人應(yīng)該怎樣做藥敏試驗(yàn)？

對(duì)于ICU病房的病人，可能每天都要做細(xì)菌學(xué)檢查。因?yàn)檫@些病人多數(shù)免疫力較差，容易受條件致病菌的侵犯，而且反復(fù)發(fā)作。此外病原菌常呈多重耐藥性其感染有以下幾個(gè)特點(diǎn)；

1.長(zhǎng)期使用抗生素的病人，不同時(shí)期（即使在很短的時(shí)間內(nèi)）感染的病原菌種類(lèi)可能不同，耐藥性因此也不相同。

2、同一株細(xì)菌，在長(zhǎng)時(shí)間用藥時(shí)，僅需要3-4天就可以從對(duì)某種藥物敏感發(fā)展為耐藥。

3.長(zhǎng)期使用抗生素容易誘發(fā)細(xì)菌產(chǎn)生L型變異。常規(guī)培養(yǎng)陰性時(shí)，進(jìn)行L型細(xì)菌培養(yǎng)能夠提高檢出率。19長(zhǎng)期使用抗生素的病人應(yīng)該怎樣做藥敏試驗(yàn)？對(duì)于ICU病房形成條件：生物學(xué)特性：與醫(yī)學(xué)關(guān)系：細(xì)胞壁中肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物因素的直接破壞或合成抑制而形成。形態(tài)多形性；染色革蘭陰性；培養(yǎng)高滲培養(yǎng)基；菌落油煎蛋樣

仍有一定致病性細(xì)菌L型－細(xì)胞壁缺陷細(xì)菌臨床分離葡萄球菌L型葡萄球菌L型回復(fù)后形成條件：生物學(xué)特性：與醫(yī)學(xué)關(guān)系：細(xì)胞壁中肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或?qū)嶒?yàn)三消毒滅菌及藥敏試驗(yàn)22課件本次實(shí)驗(yàn)課結(jié)束

明天看試驗(yàn)結(jié)果，值日同學(xué)留下

實(shí)驗(yàn)四化膿性球菌和

腸道桿菌的病原學(xué)檢測(cè)（1）

再見(jiàn)！

本次實(shí)驗(yàn)課結(jié)束

明天看試驗(yàn)結(jié)果，值日同學(xué)留下

實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌和藥敏試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌和藥敏試驗(yàn)第一部分消毒滅菌1.掌握常用的消毒與滅菌技術(shù)2.熟悉紫外線殺菌試驗(yàn)的原理3.了解細(xì)菌L型的誘導(dǎo)和菌落類(lèi)型第一部分消毒滅菌1.掌握常用的消毒與滅菌技術(shù)擦拭法高壓蒸汽滅菌法常用消毒滅菌的方法物理法

化學(xué)法浸泡法熏蒸法噴霧法熱力消毒法生物凈化法輻射消毒法燃燒法烤箱法煮沸法干熱法濕熱法日光曝曬法紫外線燈照射法電子滅菌燈法電離輻射法擦拭法高壓蒸汽滅菌法常用消毒滅菌的方法物理法化學(xué)法浸泡法種類(lèi)方法效果用途干熱焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒灼滅菌接種環(huán)，試管口干烤干烤箱，熱空氣160~170oC×2h電磁波熱效應(yīng)滅菌滅菌玻璃器皿等耐高溫的物品醫(yī)療器械濕熱煮沸法100oC×5~10分鐘，沸水消毒(芽胞殺不死）飲水和食具高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌器103.4Kpa(15磅/吋2/1.05Kg/cm2)121.3oC×15~20分鐘滅菌（芽胞殺死）耐高溫、耐濕物品（基礎(chǔ)培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)輔料等）紅外線種類(lèi)方法效果用途焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒高壓蒸汽滅菌法的使用：p58加水→裝鍋→加蓋→排氣→滅菌→起鍋高壓蒸汽滅菌法的使用：p58加水→裝鍋→加蓋→排氣→滅菌→起實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌及藥敏試驗(yàn)22課件高壓蒸汽滅菌鍋使用步驟及注意事項(xiàng)：①先將筒內(nèi)注水，然后把要滅菌的物品裝入內(nèi)筒，再把蓋擰緊，打開(kāi)排氣閥門(mén)，開(kāi)始加熱。②水沸騰后，排氣閥門(mén)開(kāi)始排出氣體，待筒內(nèi)氣體全部排出后，關(guān)閉排氣閥門(mén)。（見(jiàn)書(shū)表2-6）③筒內(nèi)壓力維持103.4kPa，121℃，15~30min，即可達(dá)到滅菌的目的。④關(guān)閉熱源，自然放涼，待壓力表指針下降到零時(shí)，方可開(kāi)蓋取物。高壓蒸汽滅菌鍋使用步驟及注意事項(xiàng)：①先將筒內(nèi)注水，然后把要滅：260~266nm（最佳殺菌波長(zhǎng)）殺菌原理：使DNA上相鄰的T堿基通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合成二聚體，干擾DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。特點(diǎn)：穿透力弱，對(duì)皮膚、眼有損傷。適用范圍：適用于空氣和物體表面消毒。紫外線（ultravioletray，UV）：260~266nm（最佳殺菌波長(zhǎng)）紫外線（ultra濾過(guò)除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或氣體及孔徑<0.22μm的顆粒通過(guò)，細(xì)菌不能濾過(guò)。不能除病毒、支原體適用范圍：血清、毒素、輸液、生物制品、抗生素以及空氣等的除菌。濾過(guò)除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或第二部分藥敏試驗(yàn)1.掌握藥敏試驗(yàn)的原理、步驟、結(jié)果及意義第二部分藥敏試驗(yàn)1.掌握藥敏試驗(yàn)的原理、步驟、結(jié)果及實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌及藥敏試驗(yàn)22課件常用抗菌藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗(yàn)法（Etest）聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)特殊耐藥菌及耐藥酶的表型檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)等常用抗菌藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauert1、紙片擴(kuò)散法（K-B法）原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度1、紙片擴(kuò)散法（K-B法）原理：方法：菌液制備：挑取孵育16-24h的血平板上數(shù)個(gè)菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)；涂布接種：無(wú)菌棉拭蘸取菌液，在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60o，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周；貼含藥紙片：平板在室溫下干燥3-5min，用無(wú)菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm；孵育：35oC16-18h，量取抑菌圈直徑。方法：注意事項(xiàng)1紙片應(yīng)分布均勻，中心距離不小于24mm。2含菌平板必須避免過(guò)濃或過(guò)稀。3紙片貼完后應(yīng)在15min內(nèi)將平板反過(guò)來(lái)，置于37度溫箱中。4紙片一旦接觸培養(yǎng)基就不應(yīng)再挪動(dòng)位置。5要注意無(wú)菌操作。注意事項(xiàng)1紙片應(yīng)分布均勻，中心距離不小于24mm。結(jié)果：抑菌圈大腸桿菌金葡菌

慶大霉素青霉素環(huán)丙沙星（直徑mm）結(jié)論：？？？結(jié)果：抑菌圈大腸桿菌慶大霉素青霉素結(jié)果判讀：用刻度尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；報(bào)告：細(xì)菌對(duì)該抗生素是敏感（susceptible，S）；耐藥（resistant，R）；還是中介（intermediate，I）。結(jié)果判讀：40六、如何理解MIC值及藥敏結(jié)果？

每種藥物均提供定性和定量?jī)煞N結(jié)果。定性：敏感（S）表示該藥物對(duì)該細(xì)菌有抑制或殺滅作用。使用常規(guī)劑量可以達(dá)到有效的治療效果。

中介（中度敏感，I）表示細(xì)菌對(duì)該藥物治療的敏感性低于敏感菌株，必須加大劑量以達(dá)到更高的血藥濃度才能在特定的生理部位獲得有效的臨床效力；對(duì)于使用劑量有嚴(yán)格限制的藥物則必須重復(fù)測(cè)試以確定敏感還是耐藥。

耐藥（R）表示藥物常規(guī)劑量所達(dá)到的藥物濃度不能抑制或殺死細(xì)菌，即使加大劑量也不能達(dá)到治療效果或者超過(guò)了人體的正常耐受水平。定量：MIC（最低抑菌濃度）表示在體外達(dá)到抑制細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的最低的藥物濃度。臨床治療要求的血藥濃度一般為MIC值（μg/ml）