Stepone安裝培訓(xùn)課件

定量PCR技術(shù)原理定量PCR的數(shù)學(xué)原理

定量PCR的化學(xué)原理

儀器的維護(hù)內(nèi)容提要定量PCR的數(shù)學(xué)原理

定量PCR的化學(xué)原理

儀器的維護(hù)內(nèi)容提要平臺期線性增長期基線期指數(shù)增長期平臺期線性增長期基線期指數(shù)增長期PCR動力學(xué)曲線和四個階段線性圖譜對數(shù)圖譜基線閾值CT值[DNA]0基線就是擴(kuò)增曲線的水平部分對數(shù)圖譜線性圖譜什么是基線？默認(rèn)閾值=基線（背景）信號標(biāo)準(zhǔn)偏差x10

什么是閾值？擴(kuò)增產(chǎn)物遵循理論方程：Y=X(1+E)nY=擴(kuò)增產(chǎn)物，X=起始濃度，E=擴(kuò)增效率，n=循環(huán)數(shù)

指數(shù)增長期PCR擴(kuò)增的數(shù)學(xué)模型Ct值lg[起始濃度的]CT=-klgX0+b標(biāo)準(zhǔn)曲線與目標(biāo)序列互補(bǔ)TaqMan---水解型雜交探針

5′端標(biāo)記有報告基團(tuán)(Reporter,R)，如FAM、VIC等

3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(Quencher,Q)

探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收，無熒光，R與Q分開，發(fā)熒光探針法TaqMan作用機(jī)理SYBRGreenI作用機(jī)理染料法SYBRGreenI作用機(jī)理SYBRGreenI作用機(jī)理Tm值：50%DNA變成單鏈時的溫度，此溫度與雙鏈DNA的長度、GC含量有關(guān)，可部分代表序列的特異性

PCR過程中，控制溫度緩慢升高，雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA，SYBRGreen被釋放，熒光信號減弱

對熔解曲線求一階導(dǎo)數(shù)，峰值代表斜率改變最大值，即Tm.熔解曲線只有染料法才需要做融解曲線，探針法沒必要熔解曲線儀器的日常維護(hù)

每周

檢查計(jì)算機(jī)磁盤空間，歸檔或備份實(shí)驗(yàn)文件關(guān)閉控制計(jì)算機(jī)，30秒后再次打開計(jì)算機(jī)電源用不脫毛布塊清潔儀器表面整理計(jì)算機(jī)硬盤驅(qū)動器碎片

每月

執(zhí)行背景校準(zhǔn)

1.5年

執(zhí)行空間校準(zhǔn)執(zhí)行染料校準(zhǔn)儀器的日常維護(hù)-背景校準(zhǔn)操作步驟將背景反應(yīng)板放入儀器中，在軟件界面，依次選擇Instrument

→InstrumentMaintenanceManager

在彈出的新窗口，點(diǎn)擊Background，再選擇StartCalibration

勾選Thebackgroundplateisloadedintotheinstrument，選擇

STARTRUN

，儀器開始進(jìn)行背景校正

數(shù)據(jù)分析，Passed代表通過校準(zhǔn)，F(xiàn)ailed代表失敗。點(diǎn)擊“Finish”完成校準(zhǔn)。如果Failed，需要清除污染。儀器的日常維護(hù)-清楚污染操作步驟儀器的日常維護(hù)-空間校準(zhǔn)操作步驟將空間校準(zhǔn)板放入儀器中，在軟件界面，依次選擇Instrument

→InstrumentMaintenanceManager

在彈出的新窗口，點(diǎn)擊Spatial，再選擇StartCalibration

勾選Thebackgroundplateisloadedintotheinstrument，選擇

STARTRUN

，儀器開始進(jìn)行空間校準(zhǔn)

數(shù)據(jù)分析，Passed代表通過校準(zhǔn)，F(xiàn)ailed代表失敗。點(diǎn)擊“Finish”完成校準(zhǔn)，并進(jìn)行保存儀器的日常維護(hù)-空間校準(zhǔn)儀器的日常維護(hù)-染料校準(zhǔn)儀器的日常維護(hù)-染料校準(zhǔn)儀器的日常維護(hù)-染料校準(zhǔn)儀器的日常維護(hù)-染