基因工程的基本操作步驟趙莉公開課ower

1.2基因工程的基本程序任課教師：趙莉1、基因工程包括哪些步驟？3、基因工程中的核心環(huán)節(jié)是哪一步？4、基因表達載體導(dǎo)入到受體細胞有哪些方法？5、目的基因?qū)胧荏w細胞就會成功表達嗎？如何檢測和鑒定？2、什么是目的基因？獲取的方法有哪些方法？思考討論問題：銀燭秋光冷畫屏，輕羅小扇撲流螢；天階夜色涼如水，坐看牛郎織女星?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛞?、目的基因的獲取二、基因表達載體的構(gòu)建三、將目的基因?qū)胧荏w細胞四、目的基因的檢測與鑒定主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因(一）目的基因

目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、植物抗病基因（抗病毒、抗細菌)、人胰島素基因等。一、目的基因的獲?。ǘ┇@取目的基因的方法1、從基因文庫中直接獲取2、PCR技術(shù)擴增3、人工合成——核心二、基因表達載體的構(gòu)建科學家在培育抗蟲棉時，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達。資料:然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入抗蟲基因啟動子，導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力?？茖W家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入抗蟲基因終止子，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了抗蟲能力。

編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子啟動子：位于基因首端一段能與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。RNA聚合酶:能夠識別啟動子上的結(jié)合位點并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì).終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，它能阻礙RNA聚合酶的移動，并使其從DNA模板鏈上脫離下來，使轉(zhuǎn)錄終止。終止子編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子終止子AGGTCACGTCGTCCAGTGCAGCRNA聚合合酶AGGUCACGUCG基因表達載載體的組成成：b、目的基基因a、啟動子子c、終止子子d、標記基基因e、復(fù)制原原點1、下列屬于獲獲取目的基基因的方法法的是①利用mRNA反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄形成②從基因組組文庫中提提取③從受體細細胞中提取?、芾肞CR技術(shù)⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄⑥人工合成成A.①②③③⑤B.①②②⑤⑥C.①②③③④D.①②②④⑥小試牛刀2、有關(guān)基因工工程的敘述述中，錯誤誤的是A、DNA連接酶將將黏性末端端的堿基對對連接起來來B、限限制性性內(nèi)切切酶用用于目目的基基因的的獲得得C、目目的基基因須須由運運載體體導(dǎo)入入受體體細胞胞D、人人工合合成目目的基基因不不用限限制性性內(nèi)切切酶小試牛牛刀3、1997年年，科科學家家將動動物體體內(nèi)的的能夠夠合成成胰島島素的的基因因與大大腸桿桿菌的的DNA分分子重重組，，并且且在大大腸桿桿菌中中表達達成功功。請請據(jù)右右下圖圖回答答問題題。(1)此圖圖表示示的是是采取取__________合成基基因的的方法法獲取取__________基因的的過程程。(2)圖圖中①①DNA是是以為為__________________模板，，形成成單鏈鏈DNA，，在酶酶的作作用下下合成成雙鏈鏈DNA，，從而而獲得得了所所需要要的目目的基基因。。人工目的控制胰胰島素素合成成的信信使RNA小試牛牛刀(3)圖圖中③③代表表，它往往往含基因，，以便便對目的基基因的的檢測測。重組DNA分子子標記歡迎各各位領(lǐng)領(lǐng)導(dǎo)老老師蒞蒞臨我我校再見1、從從基因因文庫庫中直直接獲獲?。?））基因因文庫庫的概概念部分基因文庫：基因組DNA文庫：將含有有某種種生物物不同基因的的許多多DNA片片斷，，導(dǎo)入入到受受體菌菌的群體中，各個受受體菌菌分別含含有這這種生生物的的不同基基因，稱為為基因因文庫庫含有一一種生生物的的全部基因只包含含了一一種生生物的的部分基基因，如:cDNA文庫庫（2））基因文文庫的的建立立方法法提取某某種生生物的的全部部DNA用適當當?shù)南尴拗泼该该盖星幸欢ù蟠笮〉牡腄NA片片段將DNA片片段與與運載載體連連接導(dǎo)入受受體菌菌中儲儲存基因組組文庫庫方法一一：直直接分分離法法(鳥鳥槍法法)某種生生物的的單鏈鏈mRNA單鏈互互補DNA雙鏈cDNA片片段導(dǎo)入受受體菌菌中儲儲存與運載載體連連接cDNA文文庫反（逆逆）轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄酶酶DNA聚合合酶方法二：：反轉(zhuǎn)錄錄法--cDNA的合合成流程程圖解PCR技技術(shù)—聚合酶鏈鏈式反應(yīng)應(yīng)PCR擴擴增儀DNA雙雙鏈復(fù)制制的基本本原理一段已知知目的基基因的核核苷酸序序列四種脫氧氧核苷酸酸一對引物物熱穩(wěn)定DNA聚聚合酶(Taq酶）模板DNA2、利用用PCR技術(shù)擴擴增目的的基因原理：前提：原料：條件：利用PCR技術(shù)術(shù)擴增目目的基因因5’3’G—GT—C3’5’A—GC—C5’3’引物ⅡG—G高溫變性性低溫退火中溫延伸1.目的的基因DNA受受熱變性性，解鏈鏈；5’3’A—G

引物Ⅰ2.引物物與單鏈鏈互補結(jié)結(jié)合；3.合成成鏈在DNA聚聚合酶作作用下進進行延伸伸。蛋白質(zhì)的的氨基酸酸序列mRNA的核苷苷酸序列列結(jié)構(gòu)基因因的核苷苷酸序列列目的基因因推測推測化學合成成3、人工合成成9、靜夜四四無鄰，，荒居舊舊業(yè)貧。。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、雨中黃黃葉樹，，燈下白白頭人。。。05:58:5205:58:5205:5812/23/20225:58:52AM11、以我我獨沈沈久，，愧君君相見見頻。。。12月月-2205:58:5205:58Dec-2223-Dec-2212、故人人江海海別，，幾度度隔山山川。。。05:58:5205:58:5205:58Friday,December23,202213、乍見翻疑夢夢，相悲各問問年。。12月-2212月-2205:58:5205:58:52December23,202214、他鄉(xiāng)生生白發(fā)，，舊國見見青山。。。23十十二月20225:58:53上午午05:58:5312月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月225:58上上午12月-2205:58December23,202216、行動出成果果，工作出財財富。。2022/12/235:58:5305:58:5323December202217、做前，能夠夠環(huán)視四周；；做時，你只只能或者最好好沿著以腳為為起點的射線線向前。。5:58:53上午5:58上上午05:58:5312月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時停停止成成功?。?。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、很多多事情情努力力了未未必有有結(jié)果果，但但是不不努力力卻什什么改改變也也沒有有。。。05:58:5305:58:5305:5812/23/20225:58:53AM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點點點小小努力力的積累。。。12月-2205:58:5305:58Dec-2223-Dec-2212、世間成事事，不求其其絕對圓滿滿，留一份份不足，可可得無限完完美。。05:58:5305:58:5305:58Friday,December23,202213、不不知知香香積積寺寺，，數(shù)數(shù)里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2205:58:5305:58:53December23,202214、意意志志堅堅強強的的人人能能把把世世界界放放在在手手中中像像泥泥塊塊一一樣樣任任意意揉揉捏捏。。23十十二二月月20225:58:53上上午午05:58:5312月月-2215、楚塞三三湘接，，荊門九九派通。。。。十二月225:58上午午12月-2205:58December23,202216、少年十十五二十十時，步步行奪得得胡馬騎騎。。2022/12/235:58:5305:58:5323December202217、空山新新雨后，，天氣晚晚來秋。。。5:58:53上午午5:58上午午05:58:5312月-229、楊柳柳散和和風，，青山山澹吾吾慮。。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、閱讀讀一切切好書書如同同和過過去最最杰出出的人人談話話。05:58:5305:58:5305:5812/23/20225:58:53AM11、越越是是沒沒有有本本領(lǐng)領(lǐng)的的就就越越加加自自命命不不凡凡。。12月月-2205:58:5305:58Dec-2223-Dec-2212、越越是是無無能能的的人人，，越越喜喜歡歡挑挑剔剔別別人人的的錯錯兒兒。。05:58:5305:58:5305:58Friday,December23,202213、知知人人者者智智，，自自知知者者明明。。勝勝人人者者有有力力，，自自勝勝者者強強。。12月月-2212月月-2205:58:5305:58:53December23,202214、意意志志堅堅強強的的人人能能把把世世界界放放在在手手中中像像泥泥塊塊一一樣樣任任意意揉揉捏捏。。23十十二二月月20225:58:53上上午午05:58:5312月月-2215、最最具具挑挑戰(zhàn)戰(zhàn)性性的的挑挑戰(zhàn)戰(zhàn)莫莫過過于于提提升升自自我我。。。。十二二月月225:58上上午午12月月-2205:58December23,202216、業(yè)余生活要要有意義，不不要越軌。2022/12/235:58:5305:58:5323Dec