紫外-熒光檢測器課件

紫外、熒光檢測器

肖雪目錄紫外檢測器熒光檢測器太陽電磁波

白熾透明的太陽是由波長小于10nm到1011nm的一組電磁波組成。1、光-波長200-400nm400-800nm2、什么樣的物質(zhì)有紫外、可見吸收1、σ-σ*所需能量最大，不易激發(fā)，如飽和烴，只含有σ鍵，其躍遷出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外區(qū)，波長小于200nm，例如AmaxCH4=125nm等。2、n-σ*躍遷，雜原子O、N、S、X都含有n非鍵軌道，如C-Cl，C-OH等都發(fā)生n-σ*躍遷，其躍遷所需能量比σ-σ*小但是主要還是在200nm以下。3、n→π*躍遷，只有分子中同時存在雜原子（有n非鍵軌道）和雙鍵π電子時才有可能發(fā)生n-π*躍遷，如C=O，N=N，N=O等，其吸收能量小，大部分在200~700nm之間，但是εmax較小，是弱吸收。4、π-π*躍遷是雙鍵中π電子由π成鍵軌道向反鍵軌道的躍遷，能量比n→π*躍遷大，比n-σ*小，因此這種躍遷也大部分出現(xiàn)在在近紫外區(qū)，其εmax較大，大多數(shù)是強吸收峰。根據(jù)π-π*產(chǎn)生的體系不同，吸收帶可表示以下幾種：（1）、共軛非封閉體系中的π-π*（K帶）如丁二烯CH2=CH-CH=CH2，λmax=217nm。（2）、B帶（苯吸收）芳香族和雜環(huán)芳香族化合物光譜的特征吸收。芳環(huán)的B帶吸收在230~270nm，如苯乙烯，λmax=244nm、λmax=282nm。（3）、封閉共軛體系（如芳香族和雜環(huán)芳香族化合物）苯丙氨酸（Phe，F(xiàn)）λmax=257nm酪氨酸（Tyr，Y）λmax=275nm色氨酸（Trp，W）λmax=280nm3、紫外檢測器發(fā)射紫外光的燈（汞、氘、氙燈）選擇波長原理：光源發(fā)出的光通過棱鏡分解折射出不同波長的光，經(jīng)過狹縫調(diào)節(jié)后，只能讓對某組分有最大吸收波長的光通過狹縫照射到樣品上，樣品池中的組分吸收了該波長的光，使其通過樣品池后強度下降，使得檢測器中的光電敏感元件輸出電流發(fā)生變化，這種改變就是測定的結(jié)果，這種改變符合比爾定律。3、紫外檢測器原理：雙光路一路是樣品池，一路是參比池，兩路對等，光源以完全相等的兩束光投射到測量池和參比池上，若兩池中都是純流動相（有的參比池中充滿空氣作為參比物），它們的吸收值是相等或幾乎沒有吸收，則兩光照射到光電敏感器上的強度相等，無信號輸出。即使有噪音也相互抵消，基線平穩(wěn)。當(dāng)有組分進(jìn)入樣品池，吸收紫外光使兩邊的光電敏感接受到的照射強度不等，像天平失衡，電路上著重電泳補償，于是有信號。優(yōu)點：有了參比池可以減小紫外檢測器的噪聲，抵抗外來干擾，提高檢測器的靈敏度3、紫外檢測器棱鏡發(fā)在樣品池后，不需要在棱鏡后加狹縫檢測器是排成一組陣列的二極管，如256個二組管，每個可看成一個單元。被測定組分通過樣品池后照射到多色器上被分解折射成不同波長單色光。每個二極管都接收到波長不同，強度不等的光，被測組分通過樣品池后的吸收紫外光的情況能夠由多色器全波長分解掃描表現(xiàn)出來，不需要設(shè)定特定的波長。二極管陣列檢測器可顯示三維色譜圖，能夠檢查色譜峰的純度。可同時進(jìn)行多波長測定。重現(xiàn)性好。但是靈敏度一般你于普通的紫外檢測器。4、熒光檢測器熒光檢測器多采用90°角的光路，這樣避開了激發(fā)光和發(fā)射光之間的干擾。所用燈與紫外檢測器一樣，一般用氙燈，也是光電倍增管作為敏感器。優(yōu)點有極高的靈敏度和良好的