聚酰胺薄層色譜法課件

中藥制劑分析實驗中藥制劑分析實驗1基本要求:熟練掌握各種分析方法和操作技術，培養(yǎng)獨立開展中成藥分析工作的能力。注意事項：

1.實驗前做好預習，明確目的要求，熟悉原理和操作要點。

2.嚴格按實驗規(guī)程操作，細心觀察實驗現(xiàn)象。

3.及時做好完整而確切的原始記錄。

4.取用試劑、藥品應仔細觀察標簽，杜絕錯蓋瓶蓋的現(xiàn)象。

5.愛護儀器，小心使用。精密儀器須經教師同意，用畢簽名。

6.注意防火、防爆。發(fā)現(xiàn)事故苗頭及時報告，不要擅自處理。

7.愛護公物，節(jié)約水、電、藥品和試劑。

8.實驗完畢應認真清理實驗臺，經老師同意后，方可離開。值日生整理試劑臺、打掃衛(wèi)生、檢查水、電、門窗。

9.認真總結實驗結果，填寫實驗報告，并按規(guī)定時間上交。中藥制劑分析實驗基本要求及注意事項基本要求:熟練掌握各種分析方法和操作技術，培養(yǎng)獨立開展中成藥2實驗一、二妙丸的鑒別

與揮發(fā)油的測定實驗一、二妙丸的鑒別

與揮發(fā)油的測定3一、目的要求

1.掌握薄層色譜法在中成藥鑒別中的應用。

2.熟悉揮發(fā)油測定方法。二、原理

1.處方：蒼術（炒）500g，黃柏（炒）500g。

2.制法：粉碎，過篩，混勻，水泛丸，干燥，即得。

3.功能與主治：燥濕清熱。用于濕熱、足膝紅腫熱痛、下肢丹毒、白帶、陰囊濕癢。一、目的要求二、原理4蒼術:菊科植物茅蒼術AtractylodeslanceaThunb.DC.或北蒼術AtractylodeschinensisDC.Koidz.的干燥根莖。成分：揮發(fā)油中主要含有蒼術酮、蒼術素、β-桉油醇、茅術醇等。4.藥材來源及化學成分黃柏:蕓香科植物黃皮樹PhellodendronChinensSchneid.的干燥樹皮。成分：小檗堿、藥根堿、巴馬亭堿、黃連堿等小檗堿蒼術酮β-桉油醇茅術醇蒼術素蒼術:菊科植物茅蒼術Atractylodeslancea55.黃柏的鑒別：

TLC法，以小檗堿和黃柏對照藥材作對照。6.揮發(fā)油的提取：水蒸氣蒸餾法。7.揮發(fā)油組成測定：TLC法，經香草醛濃硫酸顯色后，蒼術酮顯橙紅色，蒼術素顯污綠色，β-桉油醇和茅術醇顯紫紅色。5.黃柏的鑒別：6三、實驗內容

1.黃柏的鑒別供試品溶液：取本品0.1g，置具塞試管中，加甲醇5ml，超聲提取10分鐘，取濾液。

色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（50∶10∶0.5），展開缸預先用氨蒸氣預飽和檢視：紫外光燈（365nm）下。點樣量：5μl結果：供試品色譜中，在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點。鹽酸小檗堿對照品溶液2.黃柏對照藥材溶液3.供試品溶液

123三、實驗內容鹽酸小檗堿對照品溶液12372.揮發(fā)油的測定

取燒瓶，加水300ml與玻璃珠數粒，稱取供試品約60g，置燒瓶中，振搖混合后，連接揮發(fā)油測定器與冷凝管。從冷凝管上端加水約200ml，使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶為止。用直火緩緩加熱至沸，并保持微沸1小時，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量，并計算供試品中揮發(fā)油的含量（%）。揮發(fā)油含量=V/W×100%

其中V=揮發(fā)油的體積(ml)；W=供試品的重量(g)2.揮發(fā)油的測定83.蒼術揮發(fā)油組成吸取揮發(fā)油少量，置干燥小瓶中，加乙醚1ml，加少量無水硫酸鈉，上清液作為供試品溶液。吸取供試品溶液5μl，點于硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（85︰15）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，供試品的色譜中，出現(xiàn)橙紅色、污綠色二個主斑點。3.蒼術揮發(fā)油組成9四、實驗記錄

1.繪制黃柏鑒別的薄層色譜圖。

2.繪制揮發(fā)油測定儀器裝置圖，記錄實驗中的重要步驟及出現(xiàn)的問題，計算本品揮發(fā)油的含量。

3.繪制蒼術揮發(fā)油薄層色譜圖。五、思考題

1.本法測定揮發(fā)油的原理是什么？若揮發(fā)油相對密度為1.0以上如何設計實驗？

2.揮發(fā)油測定的意義。

3.什么是對照品和對照藥材？四、實驗記錄10實驗二、注射用雙黃連（凍干）的鑒別與檢查實驗二、注射用雙黃連（凍干）的鑒別與檢查11一、目的要求

1.掌握薄層色譜法在中成藥鑒別中的應用

2.熟悉注射劑雜質檢查的目的、原理及操作方法

二、原理

1.處方：黃芩，金銀花，連翹

2.制法：略

3.功能與主治：清熱解毒，疏風解表。用于外感風熱所致的發(fā)熱、咳嗽、咽痛；上呼吸道感染、輕型肺炎、扁桃體炎見上述證侯者一、目的要求二、原理12金銀花:忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica、紅腺忍冬L.hypoglauca

、山銀花

L.confusa

或毛花柱忍冬L.dasystyla的干燥花蕾或帶初開的花。成分：主要含有綠原酸（Chlorogenicacid）、異綠原酸（Isochlorogenicacid）木犀草素（Luteolin）以及揮發(fā)油。4.藥材來源及化學成分黃芩:為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根。

成分：黃芩苷、漢黃芩苷、千層紙素A葡萄糖醛酸苷等黃芩苷

綠原酸金銀花:忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica、13連翹：木犀科植物連翹Forsythiasuspense

的干燥果實

成分：主要含有連翹酯苷（Forsythoside）A、B、C和D、連翹酚（Forsythol）、連翹苷（Phillyrin）、齊墩果酸（Oleanolicacid）和熊果酸（Ursolicacid）等

ForsythosideA

R1=R2=HR3=Rha連翹：木犀科植物連翹Forsythiasuspense的145.黃芩與金銀花的鑒別：聚酰胺薄層色譜法，以黃芩苷和綠原酸對照品溶液、黃芩和金銀花陰性對照液作對照12345黃芩與金銀花的薄層鑒別1、黃芩苷2、綠原酸3、供試品4、黃芩陰性對照液5、金銀花陰性對照液6.連翹的鑒別：硅膠薄層色譜法，以連翹對照藥材溶液作對照5.黃芩與金銀花的鑒別：123157.注射劑雜質檢查項目：蛋白質——加磺基水楊酸或鞣酸檢查鞣質——加雞蛋清或明膠氯化鈉試液檢查重金屬——不得超過百萬分之十砷鹽——不得超過百萬分之二草酸鹽——加氯化鈣檢查鉀離子檢查——加四苯硼酸鈉檢查樹脂檢查——加鹽酸或冰醋酸檢查7.注射劑雜質檢查項目：16三、實驗內容

1.黃芩與金銀花的鑒別

2.連翹的鑒別

3.檢查

(1)蛋白質

(2)鞣質

(3)樹脂

(4)草酸鹽供試品溶液2.連翹對照藥材溶液12三、實驗內容供試品溶液1217四、實驗記錄

1.繪制黃芩與金銀花鑒別的薄層色譜圖

2.繪制連翹薄層色譜圖

3.記錄注射用雙黃連（凍干）的檢查實驗結果。五、思考題

1.鑒別黃芩時為什么可用聚酰胺薄膜色譜？

2.注射劑中雜質檢查項目主要有哪些？

四、實驗記錄18實驗三大山楂丸的鑒別實驗三大山楂丸的鑒別19一、目的要求掌握常用分析方法在中成藥鑒別中的應用。二、原理

1.處方：山楂1000g，神曲（焦）150g，麥芽（炒）150g。

2.制法：粉碎，過篩，混勻。取蔗糖600g，加水270ml與煉蜜600g，混合，濾過，與上述粉末混勻，制成大蜜丸，即得。

3.功能與主治：開胃消食。用于食積內停所致的食欲不振，消化不良，脘腹脹悶。

一、目的要求二、原理204.藥材來源及化學成分山楂:薔薇科植物山里紅CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥成熟果實

。成分：黃酮類-金絲桃苷、牡荊素等有機酸–熊果酸、齊墩果酸、山楂酸等熊果酸（烏蘇酸）牡荊素金絲桃苷4.藥材來源及化學成分熊果酸牡荊素金絲桃苷215.鑒別方法顯微鑒別：藥材原粉入藥，保留各單味藥的顯微特征，可作為鑒別依據。B.顏色反應：鹽酸－鎂粉反應。C.TLC法:以熊果酸為對照，經硫酸乙醇顯色后，熊果酸顯紫紅色。5.鑒別方法22三、實驗內容1.顯微鑒別：取本品1丸，切碎，120℃干燥2小時，放冷至室溫，粉碎至細粉，取少許細粉用水合氯醛試液透化后滴加適量稀甘油，置顯微鏡下觀察。神曲中小麥的粉末特征：淀粉粒單粒類圓形，略扁，直徑約至43μm，臍點呈長裂縫狀；復粒較小，由2～6分粒組成。橫細胞表面觀呈長條形，直徑7～22μm，長40～243μm，垂周壁連珠狀增厚。麥芽的粉末特征：稃片外表皮淡黃色，表面觀由長細胞與兩個短細胞相間排列。長細胞長條形，壁厚，深波狀彎曲。三、實驗內容23六神曲中小麥：a.淀粉粒b.果皮橫細胞及管細胞2.麥芽（稃片外表皮表面觀）3.山楂：a.石細胞b.纖維c.果皮表皮細胞d.方晶六神曲中小麥：24聚酰胺薄層色譜法課件25聚酰胺薄層色譜法課件262.顏色反應取本品4.5g，剪碎，加乙醇20ml，加熱10分鐘，濾過。取濾液1ml，加少量鎂粉與濃鹽酸2～3滴，加熱4～5分鐘后，即顯橙紅色。

3.TLC法供試品溶液的制備：取2項下溶液蒸干，殘渣加水5ml，加熱溶解，加乙酸乙酯5ml振搖提取2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解。色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：三氯甲烷-丙酮（9︰1）顯色：噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱顯色。點樣量：2μl結果：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點。2.顏色反應取本品4.5g，剪碎，加乙醇20ml，加熱27四、實驗記錄

1.繪制顯微鑒別圖。

2.繪制薄層色譜圖。四、實驗記錄28實驗四大山楂丸中總黃酮的含量測定實驗四大山楂丸中總黃酮的含量測定29一、目的要求掌握總黃酮成分含量測定的原理和方法。牡荊素金絲桃苷二、原理山楂黃酮類:C3-OH、C5-OH或3′，4′鄰二酚羥基,與Al3+產生顏色反應,吸收一定波長的可見光。本實驗以與山楂中總黃酮結構類似的槲皮素為對照品,從槲皮素標準曲線讀出總黃酮的量,換算出成藥中總黃酮的含量。一、目的要求牡荊素金絲桃苷二、原理30三、實驗內容1.標準曲線的繪制

精密量取0.2mg/ml的槲皮素對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置10ml量瓶中,各加50%乙醇溶液至5ml,精密加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml,搖勻,放置6分鐘,加入10%硝酸鋁溶液0.3ml,再放置6分鐘,加入1mol/L氫氧化鈉溶液4ml，再加50%乙醇溶液至刻度,搖勻,放置15分鐘,以相應試劑為空白，置比色杯中,于500nm波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。三、實驗內容31B.供試品溶液的制備：取120℃干燥2小時的大山楂丸粗粉1.0g,置50ml錐形瓶中，加95%乙醇20ml，超聲提取15分鐘,濾過；濾渣再加50%乙醇10ml，超聲提取5分鐘,濾過,合并濾液，移入50ml量瓶中，放涼至室溫，補加蒸餾水至刻度，搖勻，即得。

C.測定法：

精密吸取供試品溶液1ml,置10ml量瓶中,以下同標準曲線項下操作,測定其吸收度,由標準曲線中讀出供試品中槲皮素的含量，即得，計算大山楂丸中總黃酮的含量。B.供試品溶液的制備：32四、實驗記錄

1.繪制標準曲線。

2.計算總黃酮的含量。五、思考題

1.

采用本方法所測定的總黃酮含量是相對含量還是絕對含量?說明結果的意義。

2.

影響本實驗含量測定準確性的因素有哪些?四、實驗記錄33實驗五

牛黃解毒片的理化鑒別

Physical-chemicalIdentificationofNiuhuanJieduTablets

實驗五牛黃解毒片的理化鑒別

Physical-chemic34一、目的要求掌握中成藥理化鑒別的常用方法。二、原理

1.處方：牛黃5g，大黃200g，黃芩150g，石膏200g，雄黃50g，冰片28g，桔梗100g，甘草50g

。

2.制法：雄黃水飛成細粉；大黃粉碎成細粉；人工牛黃、冰片研細；其余黃芩等四味加水煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏，加入大黃、雄黃粉末，制成顆粒，干燥，再加入人工牛黃、冰片粉末，混勻，壓制成片，包糖衣或薄膜衣，即得。

3.功能與主治：清熱解毒

。

一、目的要求二、原理354.藥材來源及化學成分人工牛黃

:膽酸（cholicacid）和去氧膽酸（deoxycholicacid）均是主要有效成分

。膽酸去氧膽酸

4.藥材來源及化學成分膽酸去氧膽酸36大黃

:含蒽醌類衍生物，少部分以游離態(tài)蒽醌衍生物存在，如大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素等，大部分以結合蒽醌衍生物的形式存在。結合蒽醌衍生物為游離蒽醌的糖苷、或雙蒽酮苷。

番瀉苷A（sennosideA）

大黃素（emodin）番瀉苷A大黃素37Borntrager反應Borntrager反應38冰片:含龍腦和異龍腦

。

異龍腦（d-borneol）

龍腦（l-borneol）

異龍腦龍腦395.鑒別方法:理化方法及薄層色譜法

顏色反應：羥基蒽醌的Borntragger反應。微量升華microsublimation

TLC法5.鑒別方法:理化方法及薄層色譜法40三、實驗內容1.大黃的鑒別

：顏色反應：取本品10片，刮去糖衣，研細，取樣品粉末1.0g，置錐形瓶中，加乙醇15ml，溫熱20分鐘，濾過。取濾液2ml，加5%氫氧化鈉試液，即顯橙紅色，再加30％過氧化氫溶液，加熱紅色不褪，加酸成酸性時，則紅色消褪，變?yōu)辄S色。三、實驗內容41TLC法供試品溶液的制備：取本品1片，研細，加甲醇20ml，超聲處理10分鐘，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘渣加水10ml使溶解，加鹽酸1ml，加熱水解20分鐘，放冷，用乙醚10ml振搖提取,取乙醚液蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解。對照藥材溶液：取大黃對照藥材0.1g，同法制作。

對照品溶液：大黃素對照品甲醇溶液（1mg/ml）

色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液。

檢視：紫外光燈（365nm）下觀察。點樣量：

4μlTLC法422.人工牛黃的鑒別TLC法供試品溶液的制備：取本品3片，研細，加三氯甲烷10ml研磨，濾過。濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解。對照品溶液：膽酸對照品乙醇溶液（1mg/ml）

色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20∶25∶3∶2）的上層溶液

檢視：噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約10分鐘，置紫外光燈（365nm）下觀察。點樣量：5μl2.人工牛黃的鑒別433.冰片的鑒別

微量升華取本品1片，研細，進行微量升華，所得的白色升華物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1～2滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。

3.冰片的鑒別44四、實驗記錄1.記錄牛黃解毒片的鑒別實驗結果。2.繪制薄層色譜圖。四、實驗記錄45實驗六牛黃解毒片中羥基蒽醌的含量測定實驗六牛黃解毒片中羥基蒽醌的含量測定46一、目的要求掌握羥基蒽醌含量測定的原理和方法。二、原理

1.處方：牛黃5g，大黃200g，黃芩150g，石膏200g，雄黃50g，冰片28g，桔梗100g，甘草50g

。本品主藥為牛黃、大黃、黃芩、石膏大黃瀉火通便，清中上焦熱毒且品種較復雜，全國應用除藥典規(guī)定三種正品大黃外，某些地區(qū)尚使用代用品土大黃故決定對其進行含量測定一、目的要求二、原理47大黃中的蒽醌類衍生物大黃酸（rhein）大黃素（emodin）游離態(tài)蒽醌大黃中的蒽醌類衍生物大黃酸（rhein）大黃素（emodin48結合蒽醌衍生物番瀉苷A（sennosideA）番瀉苷B（sennosideB）結合蒽醌衍生物番瀉苷A（sennosideA）番瀉苷B49評價大黃的質量須從這兩類成分來考慮少部分以游離態(tài)蒽醌衍生物存在，如大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素大部分以結合蒽醌衍生物的形式存在游離蒽醌衍生物不具有瀉下作用結合蒽醌是大黃的主要瀉下成分，其中以雙蒽酮苷的瀉下作用最強評價大黃的質量須從這兩類成分來考慮少部分以游離態(tài)蒽醌衍生物存50蒽醌類衍生物的理化性質游離蒽醌衍生物具有升華性蒽醌衍生物具有弱酸性反應Borntrager反應羥基蒽醌衍生物遇堿性試劑（如氫氧化鈉碳酸鈉、氫氧化銨）顯紅色或紅紫色加酸成酸性后，紅色褪去蒽醌類衍生物的理化性質游離蒽醌衍生物具有升華性51Borntrager反應Borntrager反應52二、原理利用羥基蒽醌衍生物在堿性溶液中生成紅色或紫紅色物質在510～530nm有最大吸收，采用分光光度法，以大黃素為對照品，測定羥基蒽醌的含量。二、原理53三、實驗內容A.供試品溶液的制備：

精密稱取樣品粉末0.5g，置50ml錐形瓶中，加入三氯甲烷25ml，超聲提取10分鐘,濾過,濾渣再加三氯甲烷5ml，超聲提取5分鐘，濾過，合并兩次提取液，于分液漏斗中，分別用5％NaOH-2％NH4OH混合堿液15ml、5ml振搖提取兩次，直至混合堿液無色，合并混合堿液，棄去三氯甲烷液，將混合堿液在水浴上加熱5分鐘至三氯甲烷揮散盡，放置10分鐘，移入25ml量瓶中，加5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

三、實驗內容54B.對照品溶液的制備：

精密稱取大黃素對照品甲醇溶液(0.1mg/ml)3ml于25ml量瓶中,加混合堿液至刻度，搖勻,在水浴上加熱5分鐘，放置至室溫，作為對照品溶液。

B.對照品溶液的制備：55B.測定法：

以5％NaOH-2％NH4OH混合堿液為空白，將供試品溶液與大黃素對照品溶液在530nm處同時測定吸收度。按外標一點法，計算如下：樣品中相當于大黃素的游離羥基蒽醌量=

B.測定法：56外標一點法若已知標準曲線是通過原點的直線只需測定一個量的對照品溶液，用外標一點法進行含量測定外標一點法是將對照品與待測樣品，在同一條件下進行測定用對照品比較供試品進行定量的方法外標一點法若已知標準曲線是通過原點的直線57一般是外標（對照品）采用一個濃度同時測定3～4次分別測得各自吸收度，并求出平均值再用下式計算樣品含量一般是外標（對照品）采用一個濃度58

m樣，m標分別為供試品及對照品量A樣，A標為供試品及對照品的吸收度m樣，m標分別為供試品及對照品量59四、實驗記錄

記錄含量測定實驗數據，計算羥基蒽醌的含量。

五、思考題1.簡述采用分光光度法測定羥基蒽醌的原理。2.能否采用分光光度法測定牛黃解毒片中結合型羥基蒽醌含量？

四、實驗記錄60小結注射用雙黃連（凍干）二妙丸大山楂丸牛黃解毒片小結注射用雙黃連（凍干）61中成藥的鑒別目的是檢定制劑的真實性有三大類制劑的性狀檢查顯微鑒別法理化鑒別法理化鑒別法可分為：一般化學反應法升華法光譜法色譜法中成藥的鑒別目的是檢定制劑的真實性理化鑒別法可分為：62中成藥的檢查目的是確保用藥安全及有效，包括三方面有效性純度要求安全性檢查可分為：制劑通則檢查一般雜質檢查特殊雜質檢查微生物限度檢查殘留農藥檢查中成藥的檢查目的是確保用藥安全及有效，包括三方面檢查可分為：63注射劑雜質檢查項目：蛋白質——加磺基水楊酸或鞣酸檢查鞣質——加雞蛋清或明膠氯化鈉試液檢查重金屬——不得超過百萬分之十砷鹽——不得超過百萬分之二草酸鹽——加氯化鈣檢查鉀離子檢查——加四苯硼酸鈉檢查樹脂檢查——加鹽酸或冰醋酸檢查注射劑雜質檢查項目：64中成藥的含量測定中成藥的含量測定是利用各種分析方法對中成藥中有代表性的成分有效成分或毒性成分進行含量測定中成藥的含量測定中成藥的含量測定是65常用定量分析方法

化學分析法可見－紫外分光光度法

薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜法

熒光分析法原子吸收分光光度法常用定量分析方法化學分析法66實驗七綜合設計實驗設計:

止喘靈注射液的質量分析方法：1~10號安神補腦液的質量分析方法：11~20號復方丹參片的質量分析方法：21~30號實驗七綜合設計實驗設計:67設計要求每2人一組，制作ppt，選擇一人講解，講解時間控制在5分鐘以內（ppt保存在此電腦中，做為實驗報告）。仔細查閱文獻，詳細分析處方組成，制法。根據文獻及處方組成、制法設計鑒別、含量測定方案。方法盡量不要雷同。設計要求每2人一組，制作ppt，選擇一人講解，講解時間控制在68復方丹參片的質量分析姓名:班級:學號:復方丹參片的質量分析姓名:69處方：丹參450g、三七141g、冰片8g制法：功能與主治：處方：丹參450g、三七141g、冰片8g70藥材來源及化學成分丹參：三七：冰片；

藥材來源及化學成分71鑒別方法顯微鑒別：檢三七顏色反應：TLC法:檢丹參酮ⅡA和冰片檢三七皂苷鑒別方法72

含量測定:復方丹參片中丹參酮ⅡA含量測定

（HPLC)復方丹參片中三七總皂苷的含量測定

(固相萃取分光光度法)含量測定:73實驗內容1.鑒別2.含量測定實驗內容1.鑒別74參考文獻1.2.可參考藥典及中文期刊，可上網查維普等數據庫。參考文獻1.75中藥制劑分析實驗中藥制劑分析實驗76基本要求:熟練掌握各種分析方法和操作技術，培養(yǎng)獨立開展中成藥分析工作的能力。注意事項：

1.實驗前做好預習，明確目的要求，熟悉原理和操作要點。

2.嚴格按實驗規(guī)程操作，細心觀察實驗現(xiàn)象。

3.及時做好完整而確切的原始記錄。

4.取用試劑、藥品應仔細觀察標簽，杜絕錯蓋瓶蓋的現(xiàn)象。

5.愛護儀器，小心使用。精密儀器須經教師同意，用畢簽名。

6.注意防火、防爆。發(fā)現(xiàn)事故苗頭及時報告，不要擅自處理。

7.愛護公物，節(jié)約水、電、藥品和試劑。

8.實驗完畢應認真清理實驗臺，經老師同意后，方可離開。值日生整理試劑臺、打掃衛(wèi)生、檢查水、電、門窗。

9.認真總結實驗結果，填寫實驗報告，并按規(guī)定時間上交。中藥制劑分析實驗基本要求及注意事項基本要求:熟練掌握各種分析方法和操作技術，培養(yǎng)獨立開展中成藥77實驗一、二妙丸的鑒別

與揮發(fā)油的測定實驗一、二妙丸的鑒別

與揮發(fā)油的測定78一、目的要求

1.掌握薄層色譜法在中成藥鑒別中的應用。

2.熟悉揮發(fā)油測定方法。二、原理

1.處方：蒼術（炒）500g，黃柏（炒）500g。

2.制法：粉碎，過篩，混勻，水泛丸，干燥，即得。

3.功能與主治：燥濕清熱。用于濕熱、足膝紅腫熱痛、下肢丹毒、白帶、陰囊濕癢。一、目的要求二、原理79蒼術:菊科植物茅蒼術AtractylodeslanceaThunb.DC.或北蒼術AtractylodeschinensisDC.Koidz.的干燥根莖。成分：揮發(fā)油中主要含有蒼術酮、蒼術素、β-桉油醇、茅術醇等。4.藥材來源及化學成分黃柏:蕓香科植物黃皮樹PhellodendronChinensSchneid.的干燥樹皮。成分：小檗堿、藥根堿、巴馬亭堿、黃連堿等小檗堿蒼術酮β-桉油醇茅術醇蒼術素蒼術:菊科植物茅蒼術Atractylodeslancea805.黃柏的鑒別：

TLC法，以小檗堿和黃柏對照藥材作對照。6.揮發(fā)油的提?。核魵庹麴s法。7.揮發(fā)油組成測定：TLC法，經香草醛濃硫酸顯色后，蒼術酮顯橙紅色，蒼術素顯污綠色，β-桉油醇和茅術醇顯紫紅色。5.黃柏的鑒別：81三、實驗內容

1.黃柏的鑒別供試品溶液：取本品0.1g，置具塞試管中，加甲醇5ml，超聲提取10分鐘，取濾液。

色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（50∶10∶0.5），展開缸預先用氨蒸氣預飽和檢視：紫外光燈（365nm）下。點樣量：5μl結果：供試品色譜中，在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點。鹽酸小檗堿對照品溶液2.黃柏對照藥材溶液3.供試品溶液

123三、實驗內容鹽酸小檗堿對照品溶液123822.揮發(fā)油的測定

取燒瓶，加水300ml與玻璃珠數粒，稱取供試品約60g，置燒瓶中，振搖混合后，連接揮發(fā)油測定器與冷凝管。從冷凝管上端加水約200ml，使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶為止。用直火緩緩加熱至沸，并保持微沸1小時，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量，并計算供試品中揮發(fā)油的含量（%）。揮發(fā)油含量=V/W×100%

其中V=揮發(fā)油的體積(ml)；W=供試品的重量(g)2.揮發(fā)油的測定833.蒼術揮發(fā)油組成吸取揮發(fā)油少量，置干燥小瓶中，加乙醚1ml，加少量無水硫酸鈉，上清液作為供試品溶液。吸取供試品溶液5μl，點于硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（85︰15）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，供試品的色譜中，出現(xiàn)橙紅色、污綠色二個主斑點。3.蒼術揮發(fā)油組成84四、實驗記錄

1.繪制黃柏鑒別的薄層色譜圖。

2.繪制揮發(fā)油測定儀器裝置圖，記錄實驗中的重要步驟及出現(xiàn)的問題，計算本品揮發(fā)油的含量。

3.繪制蒼術揮發(fā)油薄層色譜圖。五、思考題

1.本法測定揮發(fā)油的原理是什么？若揮發(fā)油相對密度為1.0以上如何設計實驗？

2.揮發(fā)油測定的意義。

3.什么是對照品和對照藥材？四、實驗記錄85實驗二、注射用雙黃連（凍干）的鑒別與檢查實驗二、注射用雙黃連（凍干）的鑒別與檢查86一、目的要求

1.掌握薄層色譜法在中成藥鑒別中的應用

2.熟悉注射劑雜質檢查的目的、原理及操作方法

二、原理

1.處方：黃芩，金銀花，連翹

2.制法：略

3.功能與主治：清熱解毒，疏風解表。用于外感風熱所致的發(fā)熱、咳嗽、咽痛；上呼吸道感染、輕型肺炎、扁桃體炎見上述證侯者一、目的要求二、原理87金銀花:忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica、紅腺忍冬L.hypoglauca

、山銀花

L.confusa

或毛花柱忍冬L.dasystyla的干燥花蕾或帶初開的花。成分：主要含有綠原酸（Chlorogenicacid）、異綠原酸（Isochlorogenicacid）木犀草素（Luteolin）以及揮發(fā)油。4.藥材來源及化學成分黃芩:為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根。

成分：黃芩苷、漢黃芩苷、千層紙素A葡萄糖醛酸苷等黃芩苷

綠原酸金銀花:忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica、88連翹：木犀科植物連翹Forsythiasuspense

的干燥果實

成分：主要含有連翹酯苷（Forsythoside）A、B、C和D、連翹酚（Forsythol）、連翹苷（Phillyrin）、齊墩果酸（Oleanolicacid）和熊果酸（Ursolicacid）等

ForsythosideA

R1=R2=HR3=Rha連翹：木犀科植物連翹Forsythiasuspense的895.黃芩與金銀花的鑒別：聚酰胺薄層色譜法，以黃芩苷和綠原酸對照品溶液、黃芩和金銀花陰性對照液作對照12345黃芩與金銀花的薄層鑒別1、黃芩苷2、綠原酸3、供試品4、黃芩陰性對照液5、金銀花陰性對照液6.連翹的鑒別：硅膠薄層色譜法，以連翹對照藥材溶液作對照5.黃芩與金銀花的鑒別：123907.注射劑雜質檢查項目：蛋白質——加磺基水楊酸或鞣酸檢查鞣質——加雞蛋清或明膠氯化鈉試液檢查重金屬——不得超過百萬分之十砷鹽——不得超過百萬分之二草酸鹽——加氯化鈣檢查鉀離子檢查——加四苯硼酸鈉檢查樹脂檢查——加鹽酸或冰醋酸檢查7.注射劑雜質檢查項目：91三、實驗內容

1.黃芩與金銀花的鑒別

2.連翹的鑒別

3.檢查

(1)蛋白質

(2)鞣質

(3)樹脂

(4)草酸鹽供試品溶液2.連翹對照藥材溶液12三、實驗內容供試品溶液1292四、實驗記錄

1.繪制黃芩與金銀花鑒別的薄層色譜圖

2.繪制連翹薄層色譜圖

3.記錄注射用雙黃連（凍干）的檢查實驗結果。五、思考題

1.鑒別黃芩時為什么可用聚酰胺薄膜色譜？

2.注射劑中雜質檢查項目主要有哪些？

四、實驗記錄93實驗三大山楂丸的鑒別實驗三大山楂丸的鑒別94一、目的要求掌握常用分析方法在中成藥鑒別中的應用。二、原理

1.處方：山楂1000g，神曲（焦）150g，麥芽（炒）150g。

2.制法：粉碎，過篩，混勻。取蔗糖600g，加水270ml與煉蜜600g，混合，濾過，與上述粉末混勻，制成大蜜丸，即得。

3.功能與主治：開胃消食。用于食積內停所致的食欲不振，消化不良，脘腹脹悶。

一、目的要求二、原理954.藥材來源及化學成分山楂:薔薇科植物山里紅CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥成熟果實

。成分：黃酮類-金絲桃苷、牡荊素等有機酸–熊果酸、齊墩果酸、山楂酸等熊果酸（烏蘇酸）牡荊素金絲桃苷4.藥材來源及化學成分熊果酸牡荊素金絲桃苷965.鑒別方法顯微鑒別：藥材原粉入藥，保留各單味藥的顯微特征，可作為鑒別依據。B.顏色反應：鹽酸－鎂粉反應。C.TLC法:以熊果酸為對照，經硫酸乙醇顯色后，熊果酸顯紫紅色。5.鑒別方法97三、實驗內容1.顯微鑒別：取本品1丸，切碎，120℃干燥2小時，放冷至室溫，粉碎至細粉，取少許細粉用水合氯醛試液透化后滴加適量稀甘油，置顯微鏡下觀察。神曲中小麥的粉末特征：淀粉粒單粒類圓形，略扁，直徑約至43μm，臍點呈長裂縫狀；復粒較小，由2～6分粒組成。橫細胞表面觀呈長條形，直徑7～22μm，長40～243μm，垂周壁連珠狀增厚。麥芽的粉末特征：稃片外表皮淡黃色，表面觀由長細胞與兩個短細胞相間排列。長細胞長條形，壁厚，深波狀彎曲。三、實驗內容98六神曲中小麥：a.淀粉粒b.果皮橫細胞及管細胞2.麥芽（稃片外表皮表面觀）3.山楂：a.石細胞b.纖維c.果皮表皮細胞d.方晶六神曲中小麥：99聚酰胺薄層色譜法課件100聚酰胺薄層色譜法課件1012.顏色反應取本品4.5g，剪碎，加乙醇20ml，加熱10分鐘，濾過。取濾液1ml，加少量鎂粉與濃鹽酸2～3滴，加熱4～5分鐘后，即顯橙紅色。

3.TLC法供試品溶液的制備：取2項下溶液蒸干，殘渣加水5ml，加熱溶解，加乙酸乙酯5ml振搖提取2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解。色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：三氯甲烷-丙酮（9︰1）顯色：噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱顯色。點樣量：2μl結果：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點。2.顏色反應取本品4.5g，剪碎，加乙醇20ml，加熱102四、實驗記錄

1.繪制顯微鑒別圖。

2.繪制薄層色譜圖。四、實驗記錄103實驗四大山楂丸中總黃酮的含量測定實驗四大山楂丸中總黃酮的含量測定104一、目的要求掌握總黃酮成分含量測定的原理和方法。牡荊素金絲桃苷二、原理山楂黃酮類:C3-OH、C5-OH或3′，4′鄰二酚羥基,與Al3+產生顏色反應,吸收一定波長的可見光。本實驗以與山楂中總黃酮結構類似的槲皮素為對照品,從槲皮素標準曲線讀出總黃酮的量,換算出成藥中總黃酮的含量。一、目的要求牡荊素金絲桃苷二、原理105三、實驗內容1.標準曲線的繪制

精密量取0.2mg/ml的槲皮素對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置10ml量瓶中,各加50%乙醇溶液至5ml,精密加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml,搖勻,放置6分鐘,加入10%硝酸鋁溶液0.3ml,再放置6分鐘,加入1mol/L氫氧化鈉溶液4ml，再加50%乙醇溶液至刻度,搖勻,放置15分鐘,以相應試劑為空白，置比色杯中,于500nm波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。三、實驗內容106B.供試品溶液的制備：取120℃干燥2小時的大山楂丸粗粉1.0g,置50ml錐形瓶中，加95%乙醇20ml，超聲提取15分鐘,濾過；濾渣再加50%乙醇10ml，超聲提取5分鐘,濾過,合并濾液，移入50ml量瓶中，放涼至室溫，補加蒸餾水至刻度，搖勻，即得。

C.測定法：

精密吸取供試品溶液1ml,置10ml量瓶中,以下同標準曲線項下操作,測定其吸收度,由標準曲線中讀出供試品中槲皮素的含量，即得，計算大山楂丸中總黃酮的含量。B.供試品溶液的制備：107四、實驗記錄

1.繪制標準曲線。

2.計算總黃酮的含量。五、思考題

1.

采用本方法所測定的總黃酮含量是相對含量還是絕對含量?說明結果的意義。

2.

影響本實驗含量測定準確性的因素有哪些?四、實驗記錄108實驗五

牛黃解毒片的理化鑒別

Physical-chemicalIdentificationofNiuhuanJieduTablets

實驗五牛黃解毒片的理化鑒別

Physical-chemic109一、目的要求掌握中成藥理化鑒別的常用方法。二、原理

1.處方：牛黃5g，大黃200g，黃芩150g，石膏200g，雄黃50g，冰片28g，桔梗100g，甘草50g

。

2.制法：雄黃水飛成細粉；大黃粉碎成細粉；人工牛黃、冰片研細；其余黃芩等四味加水煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏，加入大黃、雄黃粉末，制成顆粒，干燥，再加入人工牛黃、冰片粉末，混勻，壓制成片，包糖衣或薄膜衣，即得。

3.功能與主治：清熱解毒

。

一、目的要求二、原理1104.藥材來源及化學成分人工牛黃

:膽酸（cholicacid）和去氧膽酸（deoxycholicacid）均是主要有效成分

。膽酸去氧膽酸

4.藥材來源及化學成分膽酸去氧膽酸111大黃

:含蒽醌類衍生物，少部分以游離態(tài)蒽醌衍生物存在，如大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素等，大部分以結合蒽醌衍生物的形式存在。結合蒽醌衍生物為游離蒽醌的糖苷、或雙蒽酮苷。

番瀉苷A（sennosideA）

大黃素（emodin）番瀉苷A大黃素112Borntrager反應Borntrager反應113冰片:含龍腦和異龍腦

。

異龍腦（d-borneol）

龍腦（l-borneol）

異龍腦龍腦1145.鑒別方法:理化方法及薄層色譜法

顏色反應：羥基蒽醌的Borntragger反應。微量升華microsublimation

TLC法5.鑒別方法:理化方法及薄層色譜法115三、實驗內容1.大黃的鑒別

：顏色反應：取本品10片，刮去糖衣，研細，取樣品粉末1.0g，置錐形瓶中，加乙醇15ml，溫熱20分鐘，濾過。取濾液2ml，加5%氫氧化鈉試液，即顯橙紅色，再加30％過氧化氫溶液，加熱紅色不褪，加酸成酸性時，則紅色消褪，變?yōu)辄S色。三、實驗內容116TLC法供試品溶液的制備：取本品1片，研細，加甲醇20ml，超聲處理10分鐘，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘渣加水10ml使溶解，加鹽酸1ml，加熱水解20分鐘，放冷，用乙醚10ml振搖提取,取乙醚液蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解。對照藥材溶液：取大黃對照藥材0.1g，同法制作。

對照品溶液：大黃素對照品甲醇溶液（1mg/ml）

色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液。

檢視：紫外光燈（365nm）下觀察。點樣量：

4μlTLC法1172.人工牛黃的鑒別TLC法供試品溶液的制備：取本品3片，研細，加三氯甲烷10ml研磨，濾過。濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解。對照品溶液：膽酸對照品乙醇溶液（1mg/ml）

色譜條件：薄層板：硅膠G展開劑：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20∶25∶3∶2）的上層溶液

檢視：噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約10分鐘，置紫外光燈（365nm）下觀察。點樣量：5μl2.人工牛黃的鑒別1183.冰片的鑒別

微量升華取本品1片，研細，進行微量升華，所得的白色升華物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1～2滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。

3.冰片的鑒別119四、實驗記錄1.記錄牛黃解毒片的鑒別實驗結果。2.繪制薄層色譜圖。四、實驗記錄120實驗六牛黃解毒片中羥基蒽醌的含量測定實驗六牛黃解毒片中羥基蒽醌的含量測定121一、目的要求掌握羥基蒽醌含量測定的原理和方法。二、原理

1.處方：牛黃5g，大黃200g，黃芩150g，石膏200g，雄黃50g，冰片28g，桔梗100g，甘草50g

。本品主藥為牛黃、大黃、黃芩、石膏大黃瀉火通便，清中上焦熱毒且品種較復雜，全國應用除藥典規(guī)定三種正品大黃外，某些地區(qū)尚使用代用品土大黃故決定對其進行含量測定一、目的要求二、原理122大黃中的蒽醌類衍生物大黃酸（rhein）大黃素（emodin）游離態(tài)蒽醌大黃中的蒽醌類衍生物大黃酸（rhein）大黃素（emodin123結合蒽醌衍生物番瀉苷A（sennosideA）番瀉苷B（sennosideB）結合蒽醌衍生物番瀉苷A（sennosideA）番瀉苷B124評價大黃的質量須從這兩類成分來考慮少部分以游離態(tài)蒽醌衍生物存在，如大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素大部分以結合蒽醌衍生物的形式存在游離蒽醌衍生物不具有瀉下作用結合蒽醌是大黃的主要瀉下成分，其中以雙蒽酮苷的瀉下作用最強評價大黃的質量須從這兩類成分來考慮少部分以游離態(tài)蒽醌衍生物存125蒽醌類衍生物的理化性質游離蒽醌衍生物具有升華性蒽醌衍生物具有弱酸性反應Borntrager反應羥基蒽醌衍生物遇堿性試劑（如氫氧化鈉碳酸鈉、氫氧化銨）顯紅色或紅紫色加酸成酸性后，紅色褪去蒽醌類衍生物的理化性質游離蒽醌衍生物具有升華性126Borntrager反應Borntrager反應127二、原理利用羥基蒽醌衍生物在堿性溶液中生成紅色或紫紅色物質在510～530nm有最大吸收，采用分光光度法，以大黃素為對照品，測定羥基蒽醌的含量。二、原理128三、實驗內容A.供試品溶液的制備：

精密稱取樣品粉末0.5g，置50ml錐形瓶中，加入三氯甲烷25ml