幽門螺桿菌檢測-課件

幽門螺桿菌檢測ppt課件幽門螺桿菌檢測ppt課件1講課內(nèi)容第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)

第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測方法第三節(jié)幽門螺桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用123講課內(nèi)容第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)12第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)

幽門螺桿菌（Helicobacterpylori簡稱HP），呈弧形或S形，有1—2個微小彎曲，屬微需氧菌，在pH值為6—8時繁殖最為活躍，該菌具有豐富的尿素酶，可分解食物中的尿素產(chǎn)生氨，該菌生長于胃粘液深層，胃粘膜表面，多在胃竇部以胃小凹、上皮皺褶的內(nèi)折及腺腔內(nèi)為多。

第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)幽門螺桿菌（Helicobac3H.Pylori感染和十二指腸潰瘍H.Pylori感染 D/G細(xì)胞功能改變 遺傳易感性 ↑壁細(xì)胞總體增加B型慢性胃竇炎 ↑胃泌素 胃酸分泌量H.Pylori的遷移 十二指腸粘膜胃上皮化生 十二指腸球炎 十二指腸球潰瘍 H.Pylori感染和十二指腸潰瘍H.Pylori感染 4H.Pylori感染和胃癌的關(guān)系

淺表性胃炎正常胃粘膜 基因損傷

H.Pylori感染 彌漫性胃癌 萎縮性胃炎環(huán)境因素 胃粘膜腸上皮化生高CagA+-HP滴度宿主因素的H.pylori菌株感染 腸型早期胃癌 進(jìn)展期胃癌H.Pylori感染和胃癌的關(guān)系 淺表性胃炎53.HP的毒力作用取決于①定植能力②菌株的基因型③細(xì)菌的圓球體樣型態(tài)④對抗菌藥物的敏感性3.HP的毒力作用取決于6第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測侵入性檢測方法非侵入性檢測方法快速尿素酶試驗病理切片染色培養(yǎng)黏膜涂片革蘭氏染色基因方法:PCR等13C-或14C-尿素呼氣試驗Hp糞便抗原試驗Hp血清抗體試驗第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測侵入性檢測方法非侵入性檢測方法快7試驗原理HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。操作過程活檢同時取2塊組織進(jìn)行檢測（胃竇和胃體各1塊），標(biāo)本放置于試劑后觀察顏色變化。注意事項檢測結(jié)果受試劑pH值、取材部位、組織大小、細(xì)菌量、觀察時間、環(huán)境溫度等因素影響（一）快速尿素酶試驗RUT一、創(chuàng)傷性檢查

試驗原理HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，8胃鏡檢查胃黏膜取材,直接涂片革蘭氏染色，也可包埋切片，常規(guī)HE染色或銀染，直接鏡檢觀察Hp。直接鏡檢（二）組織學(xué)檢查1.免疫組化染色特異性高。2.HE染色可同時作病理診斷；3.熒光原位雜交（FISH）具有較高敏感性胃鏡檢查胃黏膜取材,直接涂片革蘭氏染色，也可包埋切片，91.在胃鏡取胃粘膜放在轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中。2.接種于Hp牛腦浸液培養(yǎng)基，分區(qū)劃線。3.置5-12％CO2培養(yǎng)箱35-37℃，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血環(huán)。培養(yǎng)過程診斷Hp最可靠的方法，可作為驗證其他診斷性試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”。一般用于藥敏試驗和科研。（三）細(xì)菌培養(yǎng)1.在胃鏡取胃粘膜放在轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)過程診斷Hp最可靠的10幽門螺桿菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根據(jù)幽門螺桿菌不同的耙基因，設(shè)計不同的引物，從而建立不同的PCR系統(tǒng)，擴(kuò)增產(chǎn)物可經(jīng)凝膠電泳分析.原理與方法（四）聚合酶鏈反應(yīng)試驗(PCR檢測技術(shù))1.與細(xì)菌培養(yǎng)和組織學(xué)染色鏡檢比較無明顯優(yōu)越性。2.現(xiàn)在可收集胃液PCR檢測幽門螺桿菌敏感性高，但可能與口腔和胃內(nèi)其它尿素酶陽性菌叢起交叉反應(yīng)幽門螺桿菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDN11注：HP的基因分型（HP菌屬亞群）及致病性

分布比例VacA基因CacA基因致病性Ⅰ型56%++胃炎、十二指腸潰瘍、胃癌Ⅱ型16%--胃炎中間表達(dá)型28%+/-+/-

VacA基因表達(dá)空泡毒素87KDCagA基因表達(dá)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白128KDCagA基因僅出現(xiàn)于VacA產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)時，是VacA產(chǎn)生效果的標(biāo)志注：HP的基因分型（HP菌屬亞群）及致病性

分布比例VacA12原理和過程HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，能分解胃中的尿素，當(dāng)整粒攝入含同位素碳-13的尿素膠囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解為氨和碳-13—二氧化碳，碳-13—二氧化碳被小腸上段吸收后，進(jìn)入血循環(huán)，并隨呼氣排出，分析呼氣中的碳-13就可診斷該細(xì)菌的存在特點(diǎn)和注意事項1.易于操作；可反映全胃Hp感染狀況。2.檢測前一個周內(nèi)應(yīng)停用抗生素、鉍劑、質(zhì)子泵抑制劑等藥。3.孕婦、哺乳期婦女及兒童不宜做。（一）13C-或14C-尿素呼氣試驗二、非創(chuàng)傷性檢查原理和過程HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，能分解胃中的尿素，當(dāng)整粒攝入13多采用ELISA雙抗體夾心法，或膠體金試條法。留取晨糞便，用稀釋液稀釋，再加入試條或微孔板檢測。原理與方法（二）幽門螺桿菌糞便抗原檢測1.糞便抗原檢測靈敏度高、準(zhǔn)確性好，HP死亡但抗原成分仍保留下來，故在治療前后都可用。2.適用于所有年齡和類型的患者（兒童）。多采用ELISA雙抗體夾心法，或膠體金試條法。留取晨糞便14多采用ELISA雙抗原夾心法，或膠體金試條法。可快速檢測人血清、血漿或全血中幽門螺桿菌抗體。原理與方法（三）幽門螺桿菌血清抗體檢測1.檢測的抗體是IgG，反映一段時間內(nèi)Hp感染情況，部分試劑盒可同時檢測CagA和VacA抗體。2.主要適用于流行病學(xué)調(diào)查。多采用ELISA雙抗原夾心法，或膠體金試條法?？煽焖贆z測15第三節(jié)幽門螺桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用第三節(jié)幽門螺桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用16小結(jié)：幾種HP檢測方法的比較方法糞便HP抗原檢測快速尿素酶試驗組織培養(yǎng)銀染法血清抗體檢C-尿素呼吸試驗用途糞便HP抗原檢測

胃粘膜活組織中HP引起的尿素酶活性化檢查胃粘膜活組織中的HP檢查胃粘膜組織切片中的HP檢測血清或血漿中HP感染引起的IgG檢測HP的尿素酶活性樣本糞便胃或十二指腸活檢組織

胃或十二指腸活檢組織

胃或十二指腸活檢組織

血清或血漿口服13C-尿素方法酶免疫法PH值變化組織培養(yǎng)組織切片染色法酶免疫法氣相色譜/質(zhì)譜設(shè)備或技要求實(shí)驗技師胃腸專家胃鏡取材厭氧培養(yǎng)條件和技術(shù)胃腸專家胃鏡取材和判斷經(jīng)驗實(shí)驗技師靜脈穿刺氣相色譜質(zhì)譜儀結(jié)果判定光譜法肉眼觀察肉眼觀察顯微鏡觀察光譜法或肉眼觀察質(zhì)譜法

靈敏度、特異性94%97%81-95.7%65.7-92%

82.9%96.3%

87.5%89.7%50%70.4%78.1%91.4%小結(jié)：幾種HP檢測方法的比較方法糞便HP抗原檢測快速尿素酶試17幽門螺桿菌檢測ppt課件幽門螺桿菌檢測ppt課件18講課內(nèi)容第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)

第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測方法第三節(jié)幽門螺桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用123講課內(nèi)容第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)119第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)

幽門螺桿菌（Helicobacterpylori簡稱HP），呈弧形或S形，有1—2個微小彎曲，屬微需氧菌，在pH值為6—8時繁殖最為活躍，該菌具有豐富的尿素酶，可分解食物中的尿素產(chǎn)生氨，該菌生長于胃粘液深層，胃粘膜表面，多在胃竇部以胃小凹、上皮皺褶的內(nèi)折及腺腔內(nèi)為多。

第一節(jié)幽門螺桿菌特點(diǎn)幽門螺桿菌（Helicobac20H.Pylori感染和十二指腸潰瘍H.Pylori感染 D/G細(xì)胞功能改變 遺傳易感性 ↑壁細(xì)胞總體增加B型慢性胃竇炎 ↑胃泌素 胃酸分泌量H.Pylori的遷移 十二指腸粘膜胃上皮化生 十二指腸球炎 十二指腸球潰瘍 H.Pylori感染和十二指腸潰瘍H.Pylori感染 21H.Pylori感染和胃癌的關(guān)系

淺表性胃炎正常胃粘膜 基因損傷

H.Pylori感染 彌漫性胃癌 萎縮性胃炎環(huán)境因素 胃粘膜腸上皮化生高CagA+-HP滴度宿主因素的H.pylori菌株感染 腸型早期胃癌 進(jìn)展期胃癌H.Pylori感染和胃癌的關(guān)系 淺表性胃炎223.HP的毒力作用取決于①定植能力②菌株的基因型③細(xì)菌的圓球體樣型態(tài)④對抗菌藥物的敏感性3.HP的毒力作用取決于23第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測侵入性檢測方法非侵入性檢測方法快速尿素酶試驗病理切片染色培養(yǎng)黏膜涂片革蘭氏染色基因方法:PCR等13C-或14C-尿素呼氣試驗Hp糞便抗原試驗Hp血清抗體試驗第二節(jié)幽門螺桿菌感染的檢測侵入性檢測方法非侵入性檢測方法快24試驗原理HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。操作過程活檢同時取2塊組織進(jìn)行檢測（胃竇和胃體各1塊），標(biāo)本放置于試劑后觀察顏色變化。注意事項檢測結(jié)果受試劑pH值、取材部位、組織大小、細(xì)菌量、觀察時間、環(huán)境溫度等因素影響（一）快速尿素酶試驗RUT一、創(chuàng)傷性檢查

試驗原理HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，25胃鏡檢查胃黏膜取材,直接涂片革蘭氏染色，也可包埋切片，常規(guī)HE染色或銀染，直接鏡檢觀察Hp。直接鏡檢（二）組織學(xué)檢查1.免疫組化染色特異性高。2.HE染色可同時作病理診斷；3.熒光原位雜交（FISH）具有較高敏感性胃鏡檢查胃黏膜取材,直接涂片革蘭氏染色，也可包埋切片，261.在胃鏡取胃粘膜放在轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中。2.接種于Hp牛腦浸液培養(yǎng)基，分區(qū)劃線。3.置5-12％CO2培養(yǎng)箱35-37℃，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血環(huán)。培養(yǎng)過程診斷Hp最可靠的方法，可作為驗證其他診斷性試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”。一般用于藥敏試驗和科研。（三）細(xì)菌培養(yǎng)1.在胃鏡取胃粘膜放在轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)過程診斷Hp最可靠的27幽門螺桿菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根據(jù)幽門螺桿菌不同的耙基因，設(shè)計不同的引物，從而建立不同的PCR系統(tǒng)，擴(kuò)增產(chǎn)物可經(jīng)凝膠電泳分析.原理與方法（四）聚合酶鏈反應(yīng)試驗(PCR檢測技術(shù))1.與細(xì)菌培養(yǎng)和組織學(xué)染色鏡檢比較無明顯優(yōu)越性。2.現(xiàn)在可收集胃液PCR檢測幽門螺桿菌敏感性高，但可能與口腔和胃內(nèi)其它尿素酶陽性菌叢起交叉反應(yīng)幽門螺桿菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDN28注：HP的基因分型（HP菌屬亞群）及致病性

分布比例VacA基因CacA基因致病性Ⅰ型56%++胃炎、十二指腸潰瘍、胃癌Ⅱ型16%--胃炎中間表達(dá)型28%+/-+/-

VacA基因表達(dá)空泡毒素87KDCagA基因表達(dá)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白128KDCagA基因僅出現(xiàn)于VacA產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)時，是VacA產(chǎn)生效果的標(biāo)志注：HP的基因分型（HP菌屬亞群）及致病性

分布比例VacA29原理和過程HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，能分解胃中的尿素，當(dāng)整粒攝入含同位素碳-13的尿素膠囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解為氨和碳-13—二氧化碳，碳-13—二氧化碳被小腸上段吸收后，進(jìn)入血循環(huán)，并隨呼氣排出，分析呼氣中的碳-13就可診斷該細(xì)菌的存在特點(diǎn)和注意事項1.易于操作；可反映全胃Hp感染狀況。2.檢測前一個周內(nèi)應(yīng)停用抗生素、鉍劑、質(zhì)子泵抑制劑等藥。3.孕婦、哺乳期婦女及兒童不宜做。（一）13C-或14C-尿素呼氣試驗二、非創(chuàng)傷性檢查原理和過程HP能產(chǎn)生豐富尿素酶，能分解胃中的尿素，當(dāng)整粒攝入30多采用ELISA雙抗體夾心法，或膠體金試條法。留取晨糞便，用稀釋液稀釋，再加入試條或微孔板檢測。原理與方法（二）幽門螺桿菌糞便抗原檢測1.糞便抗原檢測靈敏度高、準(zhǔn)確性好，HP死亡但抗原成分仍保留下來，故在治療前后都可用。2.適用于所有年齡和類型的患者（兒童）。多采用ELISA雙抗體夾心法，或膠體金試條法。留取晨糞便31多采用ELISA雙抗原夾心法，或膠體金試條法?？煽焖贆z測人血清、血漿或全血中幽門螺桿菌抗體。原理與方法（三）幽門螺桿菌血清抗體檢測1.