12基因工程的基本操作程序

1.2基因工程的基本操作程序目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測與鑒定1第二課時基因文庫包括

回

眸mRNAPCRcDNA(互補(bǔ)DNA)生物材料DNA人工合成一定大小范圍DNA1、獲取目的基因基因組文庫cDNA文庫限制酶切割反轉(zhuǎn)錄（鳥槍法）a、目的基因b、啟動子c、終止子d、標(biāo)記基因2、構(gòu)建表達(dá)載體核心復(fù)制原點(diǎn)啟動子終止子標(biāo)記基因插入基因基因表達(dá)載體模式圖3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測與鑒定Ti質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法攜帶外源基因的DNA含目的基因的重組Ti質(zhì)粒農(nóng)桿菌植物細(xì)胞表現(xiàn)性狀將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞T-DNA什么叫轉(zhuǎn)化？導(dǎo)入動物細(xì)胞顯微注射儀將目的基因注射到動物細(xì)胞（受精卵）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

微生物細(xì)胞

繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少。作為受體細(xì)胞。如：大腸桿菌。Ca2+處理被吸收導(dǎo)入微生物細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞檢測鑒定—①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA

上是否插入了目的基因②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法——方法——方法——DNA分子雜交分子雜交抗原-抗體雜交8目的基因的檢測與鑒定１、染色體ＤＮＡ上是否插入目的基因。方法：目的基因的檢測與鑒定DNA分子雜交技術(shù)基因組DNA提取做為探針雜交含目的基因的DNA顯示雜交帶轉(zhuǎn)基因生物DNA分子雜交技術(shù)，是利用DNA探針的特異性，對某一DNA序列進(jìn)行探查的新技術(shù)。

DNA探針是利用同位素、生物素等標(biāo)記的特定DNA片斷。

DNA探針與待測的非標(biāo)記單鏈DNA（或RNA）按堿基順序互補(bǔ)結(jié)合而形成標(biāo)記DNA-DNA（或標(biāo)記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。用檢測系統(tǒng)（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應(yīng)結(jié)果。

DNA分子雜交技術(shù)檢測2、目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。提取做為探針雜交含目的基因的DNA顯示雜交帶轉(zhuǎn)基因生物mRNA目的基因的檢測與鑒定檢測３、是否翻譯成蛋白質(zhì)。提取轉(zhuǎn)基因生物蛋白質(zhì)相應(yīng)抗體雜交顯示雜交帶目的基因的檢測與鑒定檢測對個體生物學(xué)水平的鑒定：接種實(shí)驗(yàn)是否具有抗蟲特性。目的基因的檢測與鑒定尋根問底——為什么要構(gòu)建基因文庫？直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？

提示：構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過PCR方式從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，往往就需要構(gòu)建基因文庫。14思考與探究：1.作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2）通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；153.利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈