細(xì)胞培養(yǎng)基及其添加物

細(xì)胞培養(yǎng)基和添加物細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分不同培養(yǎng)基之間的區(qū)別常用的幾種培養(yǎng)基及其組成成分細(xì)胞培養(yǎng)基中的添加劑及其作用細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分氨基酸維生素碳水化合物

無機(jī)鹽緩沖系統(tǒng)

HEPES(NaHCO3)與CO2體系進(jìn)行緩沖常用培養(yǎng)基1、RPMI-1640MediumRPMI是RoswellParkMemorialInstitute的縮寫，代指洛斯維.帕克紀(jì)念研究所。

2、MinimumEssentialMedium(MEM)也稱最低必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha3、dulbecco‘smodifiedeaglemedium(DMEM)其特點(diǎn)主要包括以下：（1）氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍；（3）含有糖酵解途徑中的重要物質(zhì)——丙酮酸；（4）含有微量的鐵離子。5、DMEM/F12DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基(DME/F12medium)，作為開發(fā)無血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES緩沖液。6、McCoy’s5A7、Iscove’sModifiedDulbeccoMedium(IMDM)Guilber和Iscove將Dulbecco’Medium改良為Iscove’sMedium，此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液。8、M-199Medium9、LeibovitzMedium(L-15)L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。10、Ham’sF-10培養(yǎng)基：適應(yīng)小鼠細(xì)胞、人類二倍體的培養(yǎng)。11、Ham’sF-12培養(yǎng)基：可以在加入很少血清的情況下應(yīng)用，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，是無血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液。細(xì)胞培養(yǎng)基中的添加劑及其作用1.L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?是細(xì)胞生長的必須氨基酸，為培養(yǎng)的細(xì)胞提供重要的能量來源。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解，降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。2.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I?這個(gè)二肽有多穩(wěn)定?GlutaMAX-I即谷丙氨酸二肽，是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。3.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。4.Hank′s平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks′液就可以了。5.培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞生長的影響?由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí)，需要注意一點(diǎn)：培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。6.培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響?答：一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。7.Hepes的作用HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動(dòng)。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境，CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時(shí)可以維持pH7.0左右。8.NaHCO3培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng)，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時(shí)溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%)，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值。9.NEAA：非必須氨基酸NEAA(非必需氨基酸)是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養(yǎng)基不同，10.氯化鈣氯化鈣對(duì)成骨細(xì)胞培養(yǎng)有毒性，所以成骨細(xì)胞的培養(yǎng)基中應(yīng)不含氯化鈣。11.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。酚紅本身對(duì)生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響，可以通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長，當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅