預(yù)防醫(yī)學(xué)肺炎鏈球菌研究現(xiàn)況及血清分型

肺炎鏈球菌研究現(xiàn)況及血清分型邵祝軍2021-3-20傳染病監(jiān)測(cè)：流行病學(xué)+實(shí)驗(yàn)室環(huán)境傳播監(jiān)測(cè)人群健康人群暴露未暴露感染未感染病例攜帶者2呼吸道傳染病室腦膜炎奈瑟菌百日咳肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌白喉軍團(tuán)菌克雷伯桿菌細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作內(nèi)容病原學(xué)：采樣、運(yùn)輸、培養(yǎng)、別離、鑒定、分型、保存抗生素耐藥性檢測(cè)免疫學(xué)：血清學(xué)、免疫效果評(píng)價(jià)分子生物學(xué)測(cè)：PCR檢測(cè)、分型、聚類、遺傳變異、進(jìn)化分析肺炎鏈球菌〔Streptococcuspneumoniae)又名肺炎球菌(Pneumococcus)或肺炎雙球菌。多成雙或短鏈排列,革蘭染色陽性肺炎球菌主要抗原：①莢膜多糖：致病的主要根底及血清分型依據(jù)，超過90種血清型，僅少數(shù)血清型致?、诰w抗原：C多糖，可與C反響蛋白發(fā)生沉淀反響。M蛋白：型特異性蛋白α溶血〔草綠溶血環(huán)〕。Optochin敏感試驗(yàn)陽性。膽汁溶解試驗(yàn)：自溶酶，膽汁或脫氧膽酸鹽可激活自溶酶，加速菌體自溶。膽汁溶解試驗(yàn)陽性?？膳c甲型溶血性鏈球菌區(qū)別。肺炎球菌血清型PCV7:4,6B,9V,14,18C,19F,23FPHiD10:4,6B,9V,14,18C,19F,23F,1,5,7FPCV13:4,6B,9V,14,18C,19F,23F,1,5,7F,

3,

6A,19A 91differentcapsuletypes(serotypes).

1 10F 18B 28A 40 2 11A 18C 28F 41

3 11B 18F 29 41F

4 11C 19A 31 42

5 11D 19B 32A 43

6A 11F 19C 32F 44

6B 12A 19F 33A 45 6C 12B 20 33B 46 7A 12F 21 33C 47A 7B 13 22A 33D 47F 7C 14 22F 33F 48

7F 15A 23A 34 8 15B 23B 35A 9A 15C 23F 35B 9L 15F 24A 35C 9N 16A 24B 35F

9V 16F 24F 36 10A 17A 25A 37 10B 17F 25F 38 10C 18A 27 39肺炎球菌莢膜肺炎球菌的傳播鼻咽部：定植部位氣管吸入肺炎球菌

疾病患者無癥狀攜帶者氣溶膠

鼻腔播散廣泛存在的并易于傳播5-72%的健康成人和27-58%的健康兒童的鼻咽部攜帶1單種血清型可在鼻咽部長期存在肺炎球菌可通過頻繁密切的接觸在人與人之間傳播1.PneumococcalDisease.CDC.PinkBookChapters(12thedition,2021).健康人群暴露未暴露感染未感染病例攜帶者肺炎球菌的致病機(jī)理細(xì)菌黏附和穿透粘膜細(xì)菌血中生存細(xì)菌穿過血腦屏障MeningococcalDisease,NancyE.Rosenstein,NEnglJMed,2001中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎肺炎菌血癥/敗血癥腦膜炎疾病嚴(yán)重程度X1000X100X10患病率侵襲性非侵襲性肺炎鏈球菌感染性疾病Annualincidenceofmeningitisin<2-year-olds7-10/100,000-UnitedStatesAmericanAcademyofPediatrics.Pediatrics.2000;106:367-376&MMWR.1997;46:1-24預(yù)計(jì)年病例數(shù)WHO對(duì)全球尚未普種/或即將有疫苗可預(yù)防疾病的分類極高度優(yōu)先高度優(yōu)先中度優(yōu)先肺炎鏈球菌性疾病人乳頭瘤病毒感染甲型肝炎瘧疾*霍亂戊型肝炎*登革熱*流行性腦脊髓膜炎（B）*乙型腦炎腮腺炎流行性腦脊髓膜炎（ACW135Y）風(fēng)疹狂犬病水痘輪狀病毒感染季節(jié)性流行性感冒傷寒黃熱病WHO.WeeklyEpidemiolRec2021;83:1–16Lancet2021;374:893–902WHO.ReportofameetingonprioritiesforpneumococcalandHaemophilusinfluenzaetypeb(Hib)vaccinedevelopmentandintroduction.Geneva,February9–12,1999.WHO/V&B/01.14.(accessedJuly30,2021).WHO.Pneumococcalvaccines.WklyEpidemiolRec2003;78:110–19.WHO.Pneumococcalconjugatevaccineforchildhoodimmunization—WHOpositionpaper.WklyEpidemiolRec2007;82:93–104.1450萬肺炎球菌感染病例，發(fā)病率為2331/10萬。肺炎病例1380萬〔95.6%〕，占到所有肺炎病例〔16000萬〕的8.6%。腦膜炎病例〔10.3萬〕0.7%，發(fā)病率估計(jì)為17/10萬。NPNM病例〔53.8萬〕3.7%82.6萬死亡，5歲以下兒童死亡病例的11%〔不包括HIV陽性兒童)。2000年，全球5歲以下兒童肺炎鏈球菌感染疾病負(fù)擔(dān)估計(jì)2000年，全球5歲以下肺炎球菌病發(fā)病病例數(shù)India:27%China:12%Nigeria:5%Pakistan:5%Bangladesh:4%Indonesia:3%Ethiopia:3%Congo:3%Kenya:2%Philippines:2%2000年全球5歲以下兒童肺炎球菌感染死亡病例數(shù)國家〔死亡病例數(shù)〕India(142000)Nigeria(86000)Ethiopia(57000)Congo(51000)Afghanistan(31000)China(30000)Pakistan(27000)Bangladesh(21000)Angola(20000)Uganda(19000)2021年全球5歲以下兒童死亡病因2021年，全球小于5歲的兒童死亡879萬〔不包括HIV感染〕，597萬死于傳染病〔68%〕。前5位的國家：印度、尼日利亞、剛果、巴基斯坦、中國。Source:REBlacketal,Global,regional,andnationalcausesofchildmortalityin2021:asystematicanalysis,Lancet,2021MargaretKendrickHostetter，NEJM,2021WHO：2021年疫苗可預(yù)防疾病肺炎球菌病:476000Hib:199000百日咳:195000麻疹:118000新生兒破傷風(fēng):59000破傷風(fēng)(non-neonatal):2000輪狀病毒：453000WHO估計(jì)，2021年全球5歲以下兒童150萬死于疫苗可預(yù)防疾病，占5歲以下兒童死亡的17%IPD病例的危害75%的IPD病例和83%的肺炎球菌腦膜炎病例發(fā)生在2歲以下的兒童中，對(duì)于肺炎而言，8.7%~52.4%的病例發(fā)生在小于6個(gè)月的嬰幼兒。IPD病例：病死率高，開展中國家，菌血癥20%，腦膜炎50%，嬰幼兒是高危人群，興旺國家，菌血癥成人病死率15~20%，老年人中30%~40%。后遺癥中耳炎：公共衛(wèi)生問題肺炎球菌感染定義：血液或其他無菌部位標(biāo)本〔CSF〕別離到細(xì)菌，但是對(duì)于無菌血癥的肺炎病例，判斷起來比較困難。RusselFetal2021，SAGEmeeting,8–10November2021肺炎球菌病疾病負(fù)擔(dān)WHO估計(jì)，2021年全球5歲以下兒童死亡880萬，其中，5.4%〔47.6萬〕死于肺炎球菌感染，多數(shù)在開展中國家，非洲和亞洲。HIV感染加重疾病負(fù)擔(dān)。肺炎球菌是兒童重癥肺炎的主要致病菌，約50%的重癥肺炎的病原菌是肺炎鏈球菌，在致死病例中可能超過50%。疾病負(fù)擔(dān)估算的影響因素：病例的定義、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力、監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的敏感性等。1.WHO.WeeklyEpidemiolApril2021,87:129-1442.WHO.WeeklyEpidemiolRec2007;82:93-1043.UNICEF/WHO.Pneumonia:Theforgottenkillerofchildren,2006Sep衛(wèi)生部2021年?中國婦幼衛(wèi)生事業(yè)開展報(bào)告?導(dǎo)致5歲以下兒童死亡的前5位死因順位是：①早產(chǎn)或低出生體重，②肺炎，③出生窒息，④先天性心臟病，⑤意外窒息，占全部死亡原因的60.7%預(yù)防策略接種肺炎球菌疫苗是優(yōu)選的預(yù)防方式降低肺炎球菌感染的嚴(yán)重危害…

抗生素的耐藥性…WHO對(duì)多價(jià)肺炎球菌多糖疫苗推薦人群為2歲以上的肺炎球菌性疾病高危人群，包括：65歲以上健康老年人，尤其是在公共機(jī)構(gòu)中生活的老年人慢性呼吸系統(tǒng)疾病、糖尿病、腎病綜合征和某種免疫功能缺陷的患者，尤其是功能性或解剖學(xué)上無脾者“由于肺炎球菌疾病在兒童和成人中的高負(fù)擔(dān)，WHO優(yōu)先考慮在興旺和開展中國家進(jìn)行肺炎球菌疾病的預(yù)防〞*WHOPositionPaperon23-valentpneumococcalpolysaccharidevaccine.WklyEpidemiolRec肺炎球菌疫苗開展史1911194519761983200020212021Wholecellvaccine4-valentPPV6-,12-,14-ValentPPVMerck:23-valentPPVPPVPCVWyeth:PCV7GSK:PCV10Pfizer:PCV13疫苗46B9V1418C19F23F157F36A19A22F33F2,8,9N,10A,11A,12F,15B,17F,20載體Prevnar(PCV7)√√√√√√√CRM197Synflorix(PCV10)√√√√√√√√√√蛋白D,DT,TTPrevnar13(PCV13)√√√√√√√√√√√√√CRM197V114（PCV15)√√√√√√√√√√√√√√√CRM197PPV23√√√√√√√√√√√√√√√

無WrightAE,etal.Lancet.1914;1:1-10,87-95.MacLeodCM,etal.JExpMed.1945;82:445-465.CDC.MMWR.1981;30:410-412,417-419.AustrianR,etal.TransAssocAmPhysicians.1976;89:184-194.Hillemanetal.BullWHO.1978://merckvaccines/Products/pneumovax23/Pages/home.aspx;://ema.europa.eu:.目前市場(chǎng)上的肺炎球菌疫苗肺炎球菌多糖疫苗：用于>2歲Pneumovax23:默克/默沙東Pneumo23：賽諾菲-巴斯德惠益康(23價(jià))：

成都生物研究所肺炎球菌結(jié)合疫苗：用于≤5歲Prevenar：

輝瑞-惠氏Prevenar13：輝瑞-惠氏Synflorix：葛蘭素史克全球5歲以下兒童IPD病例肺炎球菌主要血清型分布6~11個(gè)血清型引起70%的IPD病例。1,5,6A,6B,14,19F,23FHopeL.Johnson，PlosMedicine，2021~2歲兒童肺炎球菌病主要血清型分布2歲~5歲兒童肺炎球菌病主要血清型分布14,6B,19F,23F,6A,5,18C,19A,1,9V14,1,6B,18C,23F,19F,6A,5,4,9V,IPD病例肺炎球菌血清型構(gòu)成具有地域性差異HausdorffWPetal.CID,2000亞洲兒童IPD病例歐洲兒童和成人IPD病例中國肺炎球菌病疾病現(xiàn)況疾病負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)有限或不系統(tǒng)發(fā)病數(shù)及發(fā)病率病例的地域、年齡分布特征血清型分布和構(gòu)成

菌株耐藥情況

目前使用疫苗的血清型別覆蓋率

疫苗研發(fā)模仿跟風(fēng)抗生素耐藥血清型變遷6A6B,19F19A細(xì)菌性呼吸道傳染病實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)培養(yǎng)基、細(xì)菌的接種、別離培養(yǎng)細(xì)菌鑒定、血清分型耐藥性檢測(cè)PCR及RealtimePCR技術(shù)用于標(biāo)本的病原學(xué)檢測(cè)和血清分型細(xì)菌的分子分型26疾病癥候群監(jiān)測(cè)未知病原醫(yī)院病例調(diào)查實(shí)驗(yàn)室檢查√27不同“癥候群疾病〞病原體相互交錯(cuò)“發(fā)熱呼吸道〞癥候群“發(fā)熱伴出疹〞癥候群“發(fā)熱伴出血〞癥候群“腹瀉〞癥候群“腦炎腦膜炎〞癥候群流感麻疹流腦肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌肺結(jié)核……種瓜得瓜，種豆得豆，種瓜亦可以得豆？28醫(yī)院是傳染病監(jiān)測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)病例診斷標(biāo)本采集是核心〔無菌操作，標(biāo)本足量，應(yīng)充分考慮到臨床常規(guī)檢測(cè)的標(biāo)本量的需求〕標(biāo)本床前接種培養(yǎng)〔培養(yǎng)皿或血培養(yǎng)瓶〕，應(yīng)注意防止污染和干擾細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本登記、分裝、保存別離菌株鑒定和結(jié)果判斷〔侵襲性和非侵襲性病例〕結(jié)果反響29細(xì)菌性呼吸道傳染病標(biāo)本采集1、急性上呼吸道感染:鼻/咽拭子2、肺炎1〕鼻咽拭子/鼻咽抽吸物：2〕尿液：3〕痰液：4〕血液：5〕胸腔穿刺液：6〕支氣管肺泡灌洗液。3、腦膜炎1〕腦脊液2〕血液肺炎病癥、體征影像學(xué)診斷，應(yīng)考慮疾病的進(jìn)行性改變。病原微生物學(xué)診斷：呼吸道分泌物別離培養(yǎng)，受正常菌群影響侵襲性的采樣，操作風(fēng)險(xiǎn)、接受程度影響。30鼻/咽拭子31血標(biāo)本足量血標(biāo)本，床前接種血培養(yǎng)瓶。成人：每次采樣抽血10mL，5mL注入準(zhǔn)備好的血培養(yǎng)瓶。兒童：每次采血5mL，3mL注入準(zhǔn)備好的血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)瓶有細(xì)菌生長，轉(zhuǎn)種培養(yǎng)皿。血清可進(jìn)行PCR或RealtimePCR檢測(cè)或抗體檢測(cè)。

建議：不建議用碘伏消毒瓶塞，如用碘伏消毒，應(yīng)用酒精脫碘。用70%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞子，酒精作用1分鐘；在血液注入血培養(yǎng)瓶之前，用無菌紗布或棉簽去除橡皮塞子外表剩余的酒精，然后注入血液。防止皮膚寄生菌或環(huán)境微生物引起的污染。芽孢桿菌屬、棒狀桿菌屬、痤瘡丙酸桿菌或凝固酶陰性的葡萄球菌、不動(dòng)桿菌等的標(biāo)本一般視為污染。32腦脊液標(biāo)本不增菌，直接接種培養(yǎng)皿可做快速檢測(cè)〔涂片染色、乳膠凝集檢測(cè)〕PCR及RealtimePCR檢測(cè)33抗生素的使用與細(xì)菌培養(yǎng)〔舉例〕病例1，孫xx：2007年1月8日出生，2007年10月31日發(fā)病，河北邢臺(tái)寧晉縣醫(yī)院就診，11月1日，轉(zhuǎn)河北省兒童醫(yī)院住院，診斷為細(xì)菌性腦膜炎。11月1日，采集血標(biāo)本和腦脊液，采樣前使用抗生素治療。腦脊液乳膠凝集試驗(yàn)，腦脊液RealtimePCR陽性，血液和腦脊液標(biāo)本檢出Hib。病例2，張xx：2007年4月11日出生，2007-12-23發(fā)病，河北石家莊贊皇縣人民醫(yī)院治療，后轉(zhuǎn)省兒童醫(yī)院，診斷為細(xì)菌性腦膜炎。2007-12-25，采集血標(biāo)本和腦脊液，采樣前使用抗生素治療。腦脊液乳膠凝集試驗(yàn)、腦脊液RealtimePCR陽性，血液和腦脊液標(biāo)本檢出Hib。34培養(yǎng)基及接種培養(yǎng)普通培養(yǎng)基〔血平板、巧克力平板〕選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基質(zhì)量控制標(biāo)本接種菌落取菌環(huán)劃線接種培養(yǎng)鼻咽拭子涂布培養(yǎng)基后，應(yīng)取菌環(huán)劃線接種35細(xì)菌鑒定Gram染色奧普托欣敏感性抑菌環(huán)≥14mm膽汁溶解試驗(yàn)觸酶試驗(yàn)生化鑒定肺炎球菌流感嗜血桿菌36血清分型〔群〕-玻片凝集結(jié)果及判讀細(xì)菌與一種抗血清凝集，和生理鹽水不凝集時(shí)，才能鑒定為該種血清型。如果不能確定血清群，菌株為不可分群菌株〔NG〕或不可分型菌株〔NT〕。關(guān)于NG/NT菌株在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強(qiáng)反響，都應(yīng)標(biāo)記為自凝菌。在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。在生理鹽水中不自凝，不和任何一個(gè)血清凝集，記作NG。分型血清質(zhì)量控制37乳膠試劑盒在待檢標(biāo)本上滴加乳膠懸液混勻輕搖反響觀察結(jié)果滴加待檢標(biāo)本乳膠凝集快速檢測(cè)細(xì)菌耐藥性檢測(cè)〔1〕K-B紙片擴(kuò)散法：花費(fèi)最少，但是結(jié)果存在一定的不確定性，該方法可將檢測(cè)的別離株分為敏感、中介、耐藥或?qū)δ撤N抗生素的不敏感。然而，不能提供MIC值，及反映該菌株對(duì)抗生素的敏感性減弱趨勢(shì)。16mm6mmCLSI或CA-SFM標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對(duì)〔核對(duì)質(zhì)控菌株的各項(xiàng)結(jié)果是否在質(zhì)控范圍內(nèi)〕影響因素：MIC、接種菌量、細(xì)菌生長率、抗生素含量擴(kuò)散性、平皿厚度、溫度孵育時(shí)間39細(xì)菌耐藥性檢測(cè)〔2〕梯度試紙條法：操作簡單方便，連續(xù)梯度濃度，穩(wěn)定性好，檢測(cè)結(jié)果可表示為μg/ml，是一種半定量的檢測(cè)方法。價(jià)格較高，結(jié)果需要仔細(xì)判讀40細(xì)菌耐藥性檢測(cè)〔3〕MIC肉湯稀釋法MIC瓊脂稀釋法可同時(shí)檢測(cè)多株細(xì)菌，觀察細(xì)菌生長狀況制備平皿工作量大，抗生素要求精度高41MicrococcusletusATCC9341PenicillinG7–0.25U–43mm8–0.13U–38mm9–0.06U–35mm10–0.03U–32mm11–0.015U–24mm12–0.0075U–16mm13–0.0038U–8mm–Blank–0mm71110981213BrancoDiscsof6mmCSF標(biāo)本中抗生素濃度檢測(cè)MicrococcusletusATCC93411432Blank56CSFsamples15uL/discCSF標(biāo)本中抗生素濃度檢測(cè)病例定義永遠(yuǎn)不可能完美高度敏感的病例定義包括很多其它疾病病例特異性降低更多的病例，工作量增大高度特異的病例定義排除很多真實(shí)病例敏感性降低失去局部病例，工作量降低按病例定義判定真實(shí)病例合計(jì)是否病例9020110非病例108090合計(jì)100100200敏感度

=90/100=0.90=90%假陰性率=10/100=0.10=10%特異度

=80/100=0.80=80%假陽性率=20/100=0.20=20%病例定義——傳染病監(jiān)測(cè)的基石44侵襲性肺炎球菌病例

InvasivePneumococcalDiseases,IPD菌血癥腦膜炎肺炎非侵襲性感染45肺炎鏈球菌鑒別流程圖接種血瓊脂平板3個(gè)鑒別試驗(yàn)需平行進(jìn)行血清型鑒別按肺炎鏈球菌進(jìn)行報(bào)告革蘭氏染色奧普托欣試驗(yàn)觸酶試驗(yàn)挑取α溶血菌落根據(jù)革蘭氏染色、觸酶試驗(yàn)結(jié)果鑒別相關(guān)鏈球菌按肺炎鏈球菌進(jìn)行報(bào)告

(前提為革蘭氏染色陽性、觸酶陰性)膽汁溶解試驗(yàn)觸酶陰性挑取革蘭氏染色陽性雙球菌或呈短鏈狀的球菌膽汁溶解陽性膽汁溶解陰性奧普托欣耐受(直徑<14mm)奧普托欣敏感(直徑≥14mm)非肺炎鏈球菌的α溶血性鏈球菌標(biāo)本(腦脊液/血液)46肺炎鏈球菌鑒定試驗(yàn)溶血奧普托欣試驗(yàn)莢膜腫脹膽汁溶解47傳統(tǒng)的基于莢膜的肺炎球菌血清分型〔群〕：多克隆/單克隆抗體莢膜腫脹(金標(biāo)準(zhǔn)〕肺炎鏈球菌丹麥血清棋盤分型法1.菌株依賴性2.本錢高3.技術(shù)操作要求較高4.不同血清之間交叉反響5.結(jié)果解釋主觀性群新群分型或分群非疫苗相關(guān)的型或群PQRSTA118*452B19*6*38C2024*,31,40D9*1116*,36,37E1210*3321,39F17*2227,32*,41*G13,28*Hc1423*15*29,34,35*,42,47*Ic25,38,43,44,45,46,4848較高的敏感性、特異性，克服交叉反響。經(jīng)濟(jì)實(shí)用性：減少對(duì)傳統(tǒng)血清分型的依賴高通量、方案可調(diào)整：一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)完成多個(gè)反響，高通量檢測(cè)血清型，根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍醒逍瓦M(jìn)行組合非培養(yǎng)依賴性：直接從標(biāo)本中檢測(cè)肺鏈及血清型操作簡單，結(jié)果判斷科學(xué)客觀新的特異的分型引物公布typespecificSpn+control19F315B1810A7FControlformultiplexassayreaction2SequentialmultiplexPCRdeductionofpneumococcalserotypes.Paietal2006.JCMPCR用于肺炎球菌分型49肺炎球菌PCR與RealtimePCR檢測(cè)目標(biāo)基因包括：lytA基因〔自溶素〕ply基因〔肺炎球菌溶血素〕：檢測(cè)上呼吸道標(biāo)本時(shí)，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，一些非肺炎鏈球菌的α-溶血鏈球菌，這些細(xì)菌通常為呼吸道的正常菌群，如Streptococcusmitis和Streptococcusoralis，這些細(xì)菌又是也含有ply基因。psaA基因〔肺炎球菌外表黏附素〕。肺炎鏈球菌是革蘭氏陽性菌，使用溶菌酶和變?nèi)芫剡M(jìn)行消化，有利于去除細(xì)胞壁中的含量較高的肽聚糖，之后進(jìn)行消化裂解有助于提高DNA的含量。50反應(yīng)包括血清型16A/6B/6C/6D,3,19A,22F/22A,16F28,33F/33A/37,15A/15F,7F/7A,23A319F,12F/12A/44/46,11A/11D,38,35B424A/24B/24F,7C/7B/40,4,18A/18B/18C/18F,9V/9A514,1,23F,15B/15C,10A639,10F/10C/33C,5,35F/47F,17F723B,35A/35C/42,34,9N/9L,318*6A/6B/6C/6D,6C/6DReactionSerotypesincluded114,1,5,4,18A/18B/18C/18F26A/6B/6C/6D,19F,23F,38/25F,9V/9A37C/7B/40,3,15B/15C,7F/7A,17F48,12F/12A/44/46,9L/9N,22F/22A,23A524A/24B/24F,2,11A/11D,19A,16F621,33F/33A/37,15A/15F,35F/47F,13739,23B,35A/35C/42,20,35B810F/10C/33C,34,10A,319*6A/6B/6C/6D,6C/6D基于非洲目前主要流行血清型的肺炎鏈球菌PCR血清分型方案*如果反響2中6A/6B/6C/6DPCR陽性，那么開展第9項(xiàng)檢測(cè)基于美國目前主要流行血清型的肺炎鏈球菌PCR血清分型方案*如果反響1中6A/6B/6C/6DPCR陽性，那么開展第8項(xiàng)檢測(cè)肺炎鏈球菌血清型分型引物(:///ncidod/biotech/strep/pcr.htm).引物*引物序列(5’-3’)基因引物濃度(μM)產(chǎn)物大小(bp)1-fCTCTATAGAATGGAGTATATAAACTATGGTTAwzy0.32801-rCCAAAGAAAATACTAACATTATCACAATATTGGC0.32-fTATCCCAGTTCAATATTTCTCCACTACACCwzy0.32902-rACACAAAATATAGGCAGAGAGAGACTACT0.33-fATGGTGTGATTTCTCCTAGATTGGAAAGTAGgalU0.33713-rCTTCTCCAATTGCTTACCAAGTGCAATAACG0.34-faCTGTTACTTGTTCTGGACTCTCGATAATTGGwzy0.34304-rGCCCACTCCTGTTAAAATCCTACCCGCATTG0.35-fATACCTACACAACTTCTGATTATGCCTTTGTGwzy0.33625-rGCTCGATAAACATAATCAATATTTGAAAAAGTATG0.36A/6B/6C/6D-fAATTTGTATTTTATTCATGCCTATATCTGGwciP0.32506A/6B/6C/6D-rTTAGCGGAGATAATTTAAAATGATGACTA0.36C/6D-fCATTTTAGTGAAGTTGGCGGTGGAGTTwciNbeta0.57276C/6D-rAGCTTCGAAGCCCATACTCTTCAATTA0.57C/(7B/40)-fCTATCTCAGTCATCTATTGTTAAAGTTTACGACGGGAwcwL0.32607C/(7B/40)-rGAACATAGATGTTGAGACATCTTTTGTAATTTC0.37F/7A-fTCCAAACTATTACAGTGGGAATTACGGwzy0.45997F/7A-rATAGGAATTGAGATTGCCAAAGCGAC0.48-fGAAGAAACGAAACTGTCAGAGCATTTACATwzy0.22018-rCTATAGATACTAGTAGAGCTGTTCTAGTCT0.29N/9L-fGAACTGAATAAGTCAGATTTAATCAGCwzx0.55169N/9L-rACCAAGATCTGACGGGCTAATCAAT0.59V/9A-fGGGTTCAAAGTCAGACAGTGAATCTTAAwzy0.58169V/9A-rCCATGAATGAAATCAACATTGTCAGTAGC0.5Capsule:diversepolysaccharides6A2)-α-D-Gal-(13)-α-D-Glc-(13)-α-L-Rham-(13)-D-ribitol-(5-PO4-6B2)-α-D-Gal-(13)-α-D-Glc-(13)-α-L-Rham-(14)-D-ribitol-(5-PO4-19A 4)-β-D-NAcMannose-(14)-α-D-Glc-(13)-α-L-Rham-(1-PO4-19F 4)-β-D-NAcMannose-(14)-α-D-Glc-(12)-α-L-Rham-(1-PO4-CapsuleGenelocusDiversityofCapsule