第四節(jié) 紅細(xì)胞比容

第一章血液一般檢驗(yàn)第四節(jié)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞定義網(wǎng)織紅細(xì)胞形態(tài)網(wǎng)織紅細(xì)胞染色方法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)參考區(qū)間網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，Ret）是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘留部分嗜堿性物質(zhì)（核糖體和核糖核酸），可被某些染料活體染色后呈藍(lán)色或紫色的網(wǎng)狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)，故名為網(wǎng)織紅細(xì)胞。Ret體積略大于成熟紅細(xì)胞（直徑8.0～9.5μm），仍具有合成血紅蛋白的能力，約1～2天后，過渡為成熟紅細(xì)胞。ICSH將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成I～I(xiàn)V型。定義I型（絲球型）

Ⅱ型（網(wǎng)型）

III型（破網(wǎng)型）

Ⅳ型（點(diǎn)粒型）網(wǎng)織紅細(xì)胞分型及特征分型形態(tài)特征正常存在部位I型（絲球型）RBC幾乎被網(wǎng)織物充滿僅存在于正常骨髓II型（網(wǎng)型）位于RBC中央線團(tuán)樣結(jié)構(gòu)松散大量存在于骨髓，極少見于外周血中III型（破網(wǎng)型）網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)稀少，呈不規(guī)則枝點(diǎn)狀排列少量存在于外周血中IV型（點(diǎn)粒型）嗜堿性物質(zhì)少，呈分散的細(xì)顆粒、短絲狀主要存在于外周血中網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）試管法1．原理

網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的RNA磷酸基，與新亞甲藍(lán)、燦爛甲酚蘭等堿性染料帶正電荷的有色反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，使RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，形成藍(lán)色的點(diǎn)狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，顯微鏡下計(jì)數(shù)可得網(wǎng)織紅細(xì)胞的相對值（%）和絕對值（×109/L）（Ret#=RBC×Ret%）。2．試劑

10g/L煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)染液。3．簡要操作

染液與待檢血液1︰1混合→室溫放置10～15分鐘→制備血涂片→低倍鏡下觀察→油鏡計(jì)數(shù)→計(jì)算。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（二）玻片法1．原理同試管法2．試劑

10g/L煌焦油藍(lán)乙醇溶液。3．簡要操作

滴加染液于玻片上→待干→加同體積待檢血液→充分混勻，染色→制備血涂片低倍鏡下觀察→油鏡計(jì)數(shù)→計(jì)算。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞示意圖網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)黃焦油蘭染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)黃焦油蘭染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（三）Miller窺盤法BAMiller窺盤為圓形玻片，玻片上刻有兩個(gè)正方形格子，計(jì)數(shù)時(shí)用小方格A計(jì)數(shù)紅細(xì)胞，用大方格B（包含A）計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，大方格B（包含A）面積為小方格A的9倍。ICSH及我國衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心推薦使用Miller窺盤進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)B格2個(gè)Ret，A格5個(gè)RBC網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)A格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)（RBC）B格內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)（Ret）121102140120120121130140111合計(jì)11055110×9Ret%==0.5%

Ret#=RBC×Ret%網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（四）儀器法帶網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)參數(shù)的血液分析儀、流式細(xì)胞儀（FCM）和網(wǎng)織紅細(xì)胞專用計(jì)數(shù)儀均可，網(wǎng)織紅細(xì)胞中RNA經(jīng)特殊熒光染料染色可進(jìn)行RNA定量，能精確計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞占紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（Ret%）。網(wǎng)織紅細(xì)胞可分為低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）以及高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）。還可計(jì)算未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞（IMR）和網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）。

IMR=HFR+MFR網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法分類Ret計(jì)數(shù)方法手工法試管法玻片法Miller法儀器法FCM、BCA

試管法和玻片法原理、試劑基本相同，均可使用米勒窺盤，方便計(jì)數(shù)提高效率網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（五）質(zhì)量保證1．及時(shí)檢測陳舊標(biāo)本檢查結(jié)果將降低。2．選擇合適的染料3．染色過程

染色時(shí)間不能過短，室溫低時(shí)，可放置37℃溫箱或適當(dāng)延長染色時(shí)間。染液與血液的比例以1︰1為宜。嚴(yán)重貧血時(shí)，可適量增加血液的比例，制片時(shí)血膜應(yīng)厚薄適宜，避免網(wǎng)織紅細(xì)胞分布不勻。4．計(jì)數(shù)

選擇紅細(xì)胞分布均勻、網(wǎng)織紅細(xì)胞著色好的部位計(jì)數(shù)。外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞主要為Ⅳ型，凡含有2個(gè)或2個(gè)以上顆粒、且顆粒遠(yuǎn)離細(xì)胞邊緣的紅細(xì)胞均應(yīng)計(jì)為網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（六）方法學(xué)評價(jià)計(jì)數(shù)方法評價(jià)普通顯微鏡法簡便、成本低，可直觀細(xì)胞形態(tài)；但影響因素多，重復(fù)性差玻片法水分易蒸發(fā)，染色時(shí)間短，結(jié)果偏低試管法易掌握，重復(fù)性較好，易復(fù)查Miller窺盤計(jì)數(shù)法規(guī)范計(jì)算區(qū)域，減少了實(shí)驗(yàn)誤差（CV值在10%左右），為ICSH推薦方法血液分析儀法檢測細(xì)胞多，精密度高，與手工法相關(guān)性好，易標(biāo)準(zhǔn)化，但儀器貴，在出現(xiàn)H-J小體、有核紅細(xì)胞、巨大血小板時(shí)結(jié)果常假性增高網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（七）參考區(qū)間網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（八）臨床意義1．反映骨髓的造血功能2．作為貧血治療效果的觀察指標(biāo)3．作為觀察病情的指標(biāo)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)1．反映骨髓的造血功能（1）網(wǎng)織紅細(xì)胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，見于各種增生性貧血，溶血性貧血尤為顯著。溶血性貧血時(shí)由于大量網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)可增至6%～8%或更多。急性溶血時(shí)可高達(dá)20%，嚴(yán)重者甚至可達(dá)40%～50%以上；急性失血性貧血時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增高；缺鐵性貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞正?；蜉p度增高。（2）網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：表示骨髓造血功能低下，多見于再生障礙性貧血。網(wǎng)織紅細(xì)胞低于15×109/L為診斷急性再生障礙性貧血的標(biāo)準(zhǔn)之一。急性白血病時(shí)，由于骨髓中異常細(xì)胞大量浸潤，使紅細(xì)胞生成受到抑制，可造成網(wǎng)織紅細(xì)胞減少。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（3）網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)

（reticulocyteproductionindex，RPI）反映骨髓造血功能指標(biāo)，代表網(wǎng)織紅細(xì)胞的生成相當(dāng)于健康人多少倍。其計(jì)算公式為：網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟時(shí)間：①健康人RPI為1。②RPI＞3：提示為溶血性貧血或急性失血性貧血。③RPI＜1：提示為骨髓增生低下或紅系成熟障礙所致貧血。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)2．作為貧血治療效果的觀察指標(biāo)缺鐵性貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血患者在治療前，外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞僅輕度增高（也可正常或輕度減少），有效治療后2～3天網(wǎng)織紅細(xì)胞便開始上升，7～10天達(dá)到高峰（可達(dá)10%以上）。治療2周左右網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸下降，之后紅細(xì)胞及血紅蛋白才逐漸升高。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)貧血治療有效時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞的變化Ret#(×1