第五章細(xì)菌和病毒的遺傳分析

第五章細(xì)菌與噬菌體的遺傳第一節(jié)細(xì)菌與噬菌體的突變型

一、細(xì)菌突變型及突變型的篩選（一）合成代謝功能的突變型（anabolicfunctionalmutants)

營(yíng)養(yǎng)缺陷型（二）分解代謝功能的突變型（catabolicfunctionalmutants)（三）抗性突變型（resistantmutants)

抗性(resistant)敏感(sensitive)例如：Lac-的選擇伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）Lac+

可以發(fā)酵乳糖，菌落為有金屬光澤的紫色；Lac-

不能發(fā)酵乳糖，菌落為白色印記法（replica_platedmethod)完全培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基生長(zhǎng)后影印選擇培養(yǎng)基二、噬菌體的突變型：1.寄主范圍突變型2.快速融菌突變型3.條件致死突變型無(wú)義突變與無(wú)義抑制基因無(wú)義突變：原來(lái)正常的密碼子突變成為終止密碼子，從而使多肽鏈變短，失去活性?？煞譃椋虹晷停╝mber）——UAG

赭石型（ocher）——UAA

乳石型（opal）——UGA無(wú)義抑制基因：在終止密碼處可以插入一個(gè)特定的氨基酸，防止在終止密碼位置上提前終止多肽鏈的合成。第二節(jié)細(xì)菌的遺傳與做圖一、細(xì)菌的細(xì)胞及細(xì)菌的染色體細(xì)胞膜、細(xì)胞壁：一層或多層染色體：1~2條（一定部位與細(xì)胞膜相連）無(wú)核膜包裹，稱為擬核（nucleoid)DNA雙鏈分子形成閉合的環(huán)狀結(jié)構(gòu)；長(zhǎng)度：250~35000um裸露，不與蛋白質(zhì)結(jié)合，易于DNA的重組，但有RNA結(jié)合，有利于DNA分子的折疊和螺旋。二、大腸桿菌的有性生殖1946年，發(fā)現(xiàn)不同品系的大腸桿菌可以進(jìn)行雜交，從而首次發(fā)現(xiàn)了大腸桿菌的性別。A品系：met-bio-B品系：thr-

leu

–

thi

–實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：1.基因突變；2.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)互補(bǔ)或轉(zhuǎn)化；3.遺傳物質(zhì)重新組合；U型管實(shí)驗(yàn)：正反交實(shí)驗(yàn)：Astrs×Bstrr

Astrr

×Bstrs

A為供體，相當(dāng)于雄性；B為受體，相當(dāng)于雌性。遺傳物質(zhì)鑒別培養(yǎng)基含有str細(xì)菌中的接合F因子與高頻重組品系：F因子（FfactororFelement)——性因子（sexfactor)

致育因子（fertilityfactor)F因子是一種環(huán)狀的DNA分子，具有賦予中性細(xì)菌以性別的性質(zhì)。F因子相對(duì)分子量為3.5×106,全長(zhǎng)約為6×104個(gè)bp，約為大腸桿菌環(huán)狀染色體全長(zhǎng)的2%。F質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移F質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移附加體（episome):

將既可以存在于染色體之外作為一個(gè)獨(dú)立的復(fù)制子，也可以整合到細(xì)菌染色體中作為細(xì)菌復(fù)制子的一部分的遺傳因子稱為附加體。E.coliF因子存在狀態(tài)有三種類(lèi)型：①?zèng)]有F因子，即F–②游離狀態(tài)的F因子，即F+③整合的F因子，即Hfr

低頻重組（lowfrequencyrecombination,Lfr)：重組率約為百萬(wàn)分之一；高頻重組（highfrequencyrecombination,Hfr）重組頻率可達(dá)10-2細(xì)菌重組的特點(diǎn)：1.異宗配合；2.DNA傳遞是單方向的；3.所傳遞的基因都是連鎖在一起的；4.偶數(shù)次交換有效，奇數(shù)次交換無(wú)效；5.只產(chǎn)生一種重組子。三、中斷雜交與重組做圖中斷雜交實(shí)驗(yàn)（interruptedmatingexperiment）把接合中的細(xì)菌在不同時(shí)間取樣，并把樣品猛烈攪拌以中斷細(xì)菌的接合過(guò)程，以此來(lái)研究細(xì)菌接合過(guò)程中基因轉(zhuǎn)移方式，分析受體細(xì)菌基因型的實(shí)驗(yàn)方法。

Hfr:thr+leu+lac+gal+azistonsstrsF-:thr-leu-lac-gal-aziRtonRstrR

每隔一定時(shí)間取樣，放在食物攪拌器內(nèi)攪拌培養(yǎng)在含str的完全培養(yǎng)基上，Hfr被殺死用影印培養(yǎng)法測(cè)試形成的F-菌落的基因型，確定每個(gè)基因轉(zhuǎn)入F-的順序（時(shí)間）根據(jù)基因轉(zhuǎn)入F-的時(shí)間，進(jìn)行細(xì)菌染色體作圖

圖7－17中斷雜交后，重組體中Hfr遺傳性狀出現(xiàn)的頻率

例如：中斷雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果基因轉(zhuǎn)入時(shí)間（min）頻率Thr+8.0

100(選擇標(biāo)記）

Leu+8.5

100(選擇標(biāo)記）

Azi+9

90

Ton+1170Lac+1840Gal+2525E.coli

的連鎖群510152025

oazitonlacgal例：現(xiàn)有5個(gè)Hfr品系的DNA轉(zhuǎn)移到Fˉ細(xì)菌中去的基因順序如下：Hfr品系轉(zhuǎn)移順序

BKARMDLQEOC3OEQLDNMCOEQLDNRAKBN請(qǐng)畫(huà)出基因轉(zhuǎn)移順序及各品系轉(zhuǎn)移方向。大腸桿菌的Hfr菌株與營(yíng)養(yǎng)缺陷型的F-菌株雜交，利用中斷雜交實(shí)驗(yàn)得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：供體的基因不同的Hfr品系及進(jìn)入的時(shí)間（分鐘）（1）試用上述結(jié)果建立一個(gè)大腸桿菌的染色體圖（以分鐘表示距離）。（2）在圖上標(biāo)出菌株中F因子插入的位置和方向。重組做圖（recombinationmapping)

以基因間重組率進(jìn)行基因定位。例：根據(jù)中斷雜交實(shí)驗(yàn)已知lac、ade是緊密連鎖的，雜交Hfr

lac+

ade+×Fˉlacˉadeˉ是lac+

先進(jìn)入受體，而ade+后進(jìn)入。重組率（RF）=lacˉade+(lacˉade+)+(lac+

ade+)重組率︰時(shí)間=201min等于20個(gè)圖距單位（m.u.）四、F’因子與性導(dǎo)F’因子（F’—factor）：帶有細(xì)菌基因的環(huán)狀F因子。性導(dǎo)（sexduction或F’—duction）：利用F’因子將供體細(xì)胞的基因?qū)胧荏w，形成部分二倍體的過(guò)程叫性導(dǎo)。五、轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)作圖轉(zhuǎn)化（transformation):游離的外源DNA片段進(jìn)入到受體細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，使受體細(xì)菌細(xì)胞的遺傳物質(zhì)與外源DNA發(fā)生重組，產(chǎn)生各種類(lèi)型重組子的過(guò)程。轉(zhuǎn)化子（transformant）：細(xì)菌細(xì)胞經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化所形成的各種重組子。在一般情況下，大約只有1%的受體細(xì)胞可吸收外源DNA，并發(fā)生遺傳轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化頻率低的主要原因在于：1.DNA只有在受體細(xì)胞細(xì)胞壁的特殊受體部位才能進(jìn)入受體細(xì)胞；2.外源DNA進(jìn)入受體細(xì)胞需要有酶或蛋白質(zhì)分子以及能量等因素的協(xié)同作用。外源DNA只有在酶促旺盛的受體部位才能進(jìn)入受體細(xì)胞。轉(zhuǎn)化過(guò)程：1.雙鏈DNA分子與細(xì)胞表面受體部位進(jìn)行可逆性結(jié)合；2.供體DNA進(jìn)入受體細(xì)胞，并可防止受DNA酶的破壞；3.供體DNA解鏈成為單鏈結(jié)構(gòu)，其中一條被降解；4.未被降解的DNA單鏈與受體細(xì)胞進(jìn)行同源重組；5.形成各種重組子。進(jìn)行轉(zhuǎn)化作圖應(yīng)首先確定同時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)化的基因是否具有連鎖關(guān)系，依據(jù)在于：在較低的濃度范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)化頻率與轉(zhuǎn)化DNA的濃度呈正比。1.如果A與B是連鎖的，當(dāng)DNA濃度下降時(shí)，A、B同時(shí)轉(zhuǎn)化頻率下降和A或B轉(zhuǎn)化頻率下降程度相同；2.如果A、B不連鎖，當(dāng)DNA濃度下降時(shí)，則AB轉(zhuǎn)化頻率下降遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)A或B轉(zhuǎn)化頻率下降的程度。感受態(tài)細(xì)胞（competence）：能接受外源DNA分子并被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌細(xì)胞被稱為感受態(tài)細(xì)胞（competence）。感受態(tài)因子（competence）：促進(jìn)轉(zhuǎn)化作用的酶或蛋白質(zhì)分子被稱為感受態(tài)因子（competence）。以枯草桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，供體基因型：trp2+his2+tyr1+受體基因型：trp2-his2-tyr1-實(shí)驗(yàn)結(jié)果：座位轉(zhuǎn)化體類(lèi)別trp2+---+++his2++-+--+

tyr

1+++--+-

11940366068541826001071180解題思路：1.首先確定三基因是否連鎖；2.如果連鎖，三基因位置關(guān)系如何；3.確定重組類(lèi)型，計(jì)算重組值。轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）：以噬菌體為載體把遺傳信息從一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合的過(guò)程被稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)：在轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)有同等機(jī)會(huì)轉(zhuǎn)移到受體細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的情況叫普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)。Lederberg和Zinder（1951)首先在鼠傷寒沙門(mén)氏菌中發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象

phetrptryr

×

methis

↓

在基本培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)原養(yǎng)型的菌落

可能性：（1）接合（2）轉(zhuǎn)化（3）

？

U型管試驗(yàn)→將上述兩種菌株分別放在戴維斯U型管的兩臂內(nèi)，中間用玻璃濾板隔開(kāi)，以防止細(xì)胞直接接觸，但允許比細(xì)菌小的物質(zhì)通過(guò)，獲得了野生型重組體，

說(shuō)明不是接合

→這種重組是通過(guò)一種過(guò)濾性因子(FA)

而實(shí)現(xiàn)的。FA不受DNA酶的影響，說(shuō)明不是轉(zhuǎn)化

→進(jìn)一步研究證明，F(xiàn)A是一種噬菌體，稱為P22（用抗P22血清處理后失活）共轉(zhuǎn)導(dǎo)（cotransduction

）：兩個(gè)或兩個(gè)以上基因同時(shí)轉(zhuǎn)導(dǎo)的現(xiàn)象被稱為共轉(zhuǎn)導(dǎo)。例如:以基因型為ABC的細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)基因型為abc的細(xì)菌細(xì)胞，轉(zhuǎn)導(dǎo)完畢后，將受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移到不含A的培養(yǎng)基上，只有具有A基因的受體細(xì)胞可以生存，然后再將這些菌落分別接種到不含B、C的培養(yǎng)基中，測(cè)得A與B和A與C的共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率，以得到三基因的順序關(guān)系：如果轉(zhuǎn)導(dǎo)子類(lèi)型中以AbC最少，則基因順序?yàn)椋篴bc;如果轉(zhuǎn)導(dǎo)子類(lèi)型中以ABc最少,則基因順序?yàn)椋篴cb或bca?？梢杂脝位蜣D(zhuǎn)導(dǎo)型所有轉(zhuǎn)導(dǎo)型表示二基因的連鎖程度。一個(gè)非溶源性菌株帶a+和b+基因受到噬菌體的感染，然后用新的噬茵體感染一帶ab基因的溶源性細(xì)菌菌株，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：8ab+和7a+b，585a+b+，問(wèn)a和b連鎖嗎?如果連鎖，計(jì)算a和b的連鎖強(qiáng)度。本實(shí)驗(yàn)是一個(gè)共轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，在轉(zhuǎn)導(dǎo)子中，a+b+的共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率=585/(585+8+7)×100%=97.5%由于共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率非常高，所以a與b基因?yàn)檫B鎖基因。利用普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行兩點(diǎn)或三點(diǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)作圖，需篩選出一個(gè)供體標(biāo)記的轉(zhuǎn)導(dǎo)子，即通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)而能表達(dá)外基因子的受體細(xì)胞，再分析其他供體標(biāo)記的存在狀況。如從一供體為a+b+

轉(zhuǎn)導(dǎo)給a–b–

受體，轉(zhuǎn)導(dǎo)會(huì)產(chǎn)生a+b–、a–b+

和a+b+

轉(zhuǎn)導(dǎo)子，若選擇a+

轉(zhuǎn)導(dǎo)子作為供體標(biāo)記，則a–b間重組率為：RFab=(a+b–)∕[(a+b–)+(a+b+)]×100%；若選擇b+轉(zhuǎn)導(dǎo)子作為供體標(biāo)記，則a–b間重組率為：RFab=(a–b+)∕[(a–b+)+(a+b+)]×100%。所以，如果選擇a+

轉(zhuǎn)導(dǎo)子作為供體標(biāo)記，則此時(shí)a–b間重組率為：1.18%；若選擇b+

轉(zhuǎn)導(dǎo)子作為供體標(biāo)記，則a–b間重組率為：1.34%。

P1侵染帶leu+thr+aziR

E.coli用轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒P1再侵染帶leu-thr-azis

E.coli

將受體細(xì)菌特定培養(yǎng)：培養(yǎng)在一種可選擇1-2個(gè)標(biāo)記基因而不選擇其余標(biāo)記基因的培養(yǎng)基上

例如：0azi+thr培養(yǎng)基，leu為標(biāo)記基因因?yàn)椋褐挥衛(wèi)eu+才生長(zhǎng)，leu-不生長(zhǎng)

thr可能為thr+/thr-

azi可能為aziR/aziS

用P1噬菌體普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)定大腸桿菌基因間的連鎖關(guān)系實(shí)驗(yàn)選擇的標(biāo)記基因未選擇的標(biāo)記基因

1

leu+50%aziR2%thr+

2thr+3%leu+0%aziR

3leu+thr+0%aziR

實(shí)驗(yàn)1說(shuō)明leu和azi相近

leu和thr則遠(yuǎn)

leu

azi

thr

──┴───┴───┴─

azi

leu

thr

或

──┴──┴───┴─

實(shí)驗(yàn)2說(shuō)明leu比azi更接近thr

azi

leu

thr

──┴───┴────┴──

實(shí)驗(yàn)3說(shuō)明這個(gè)順序是正確的，因?yàn)閘eu+thr+片段從未攜帶有aziR

這也說(shuō)明了轉(zhuǎn)導(dǎo)片段的大小。在

thr和leu之間的DNA長(zhǎng)度已接近于這個(gè)片段大小的極限

E.Singer,J.Beckwith,S.Brenner用大腸桿菌trpA+

supC+pyrF+供體細(xì)胞和trpA-

supC-pyrF-受體細(xì)胞進(jìn)行三因子轉(zhuǎn)導(dǎo)雜交實(shí)驗(yàn)其結(jié)果如下：1C+A+F+362C+A+F-1143C+A-F+04C+A-F-453C-A并發(fā)轉(zhuǎn)導(dǎo)率=（36+114）/603=0.25A-F并發(fā)轉(zhuǎn)導(dǎo)率=36/603=0.06CAFd=L(1-)d:同一染色體上兩基因之間的距離；L：轉(zhuǎn)導(dǎo)DNA的平均長(zhǎng)度；X：兩個(gè)基因共轉(zhuǎn)導(dǎo)的頻率。噬菌體染色體長(zhǎng)度/um堿基對(duì)/bpT2，T454.0162000T539.0117000P2213.751900T712.537500(二）局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)（restrictedtransduction)

專一性轉(zhuǎn)導(dǎo)（specializedtransduction)

噬菌體只把細(xì)菌基因組中特定部分基因整合到自己的DNA中，并轉(zhuǎn)移給受體細(xì)菌的過(guò)程。局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)必須以溫和型噬菌體為媒介，并大多在溶源性細(xì)菌品系之間進(jìn)行。普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)1.噬菌體的遺傳物質(zhì)不直噬菌體的遺傳物質(zhì)直接參與轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程接參與轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程2.細(xì)菌可為溶源性細(xì)菌細(xì)菌為溶源性細(xì)菌和非溶源性細(xì)菌3.轉(zhuǎn)導(dǎo)基因具有隨機(jī)性轉(zhuǎn)導(dǎo)基因?yàn)榫o鄰細(xì)菌附著位點(diǎn)兩邊的基因應(yīng)用中斷雜交技術(shù)、重組作圖、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)相結(jié)合的方法已經(jīng)得到細(xì)菌的非常詳細(xì)的染色體圖

1963年E.Coli遺傳圖。圖距單位是分鐘總結(jié)：大腸桿菌遺傳物質(zhì)傳遞的方式有：無(wú)絲均等分裂接合生殖（在部分二倍體中進(jìn)行遺傳物質(zhì)重組）轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)導(dǎo)性導(dǎo)第三節(jié)噬菌體的遺傳與做圖T4bacteriophageInfluenzaAAvirusisasimplereplicatingstructuremadeupnucleicacid(linearorcircular)surroundedbyaproteincoat.DoublestrandedDNAvirus,SinglestrandedDNAvirus,DoublestrandedRNAvirus,SinglestrandedRNAvirus.

一、噬菌體的基因重組野生型r+(小噬菌斑）h+(只侵染B菌株）突變型rˉ（大噬菌斑）hˉ可侵染B及B/2

hˉr+×h+rˉ↓hˉr+h+rˉhˉrˉh+r+

（hˉrˉ+h+r+）重組值=hˉr++h+

rˉ+hˉrˉ+h+r+

雜交每一基因型的%重組值

h+r+h+r-h-r+h-r-rahˉ

×h+rˉ12.034.042.012.024%rbh

ˉ×h+rˉ5.932566.412.3%rchˉ

×h+rˉ0.739590.91.6%ra

rb

rchra

rbhrcrahrc

rbra

rchrb二、T4噬菌體突變型的三點(diǎn)測(cè)驗(yàn)：小噬菌斑（m）快速溶菌（r）混濁溶菌（tu）mrtu346769.6%+++3729m++5209.6%+rtu474mr+85317.6%++tu963m+tu1623.2%+r+172合計(jì)10340mrtu

12.820.827.2+2×3.2三、φX174突變型三點(diǎn)測(cè)交：親本：amA

tsC+++amB兩點(diǎn)和三點(diǎn)測(cè)交結(jié)果顯示：每個(gè)基因都與它兩側(cè)的基因連鎖由此證明：基因組為一環(huán)狀分子。噬菌體雜交的特點(diǎn)：1.噬菌體在雜交中，每個(gè)親代對(duì)子代所提供的遺傳貢獻(xiàn)取決于感染細(xì)菌時(shí)每種親代噬菌體的相對(duì)數(shù)量；2.噬菌體的基因重組是發(fā)生在噬菌體DNA的復(fù)制之后，在一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞中已經(jīng)是親本基因組的群體；3.噬菌體不同基因型之間可以發(fā)生多次交換；4.噬菌體的基因重組頻率可以隨著宿主細(xì)胞裂解時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。噬菌體基因重組雜交時(shí)應(yīng)注意問(wèn)題：1.控制每種親代噬菌體基因型的投放量；2.控制許可發(fā)生復(fù)制和重組的時(shí)間。四、擬等位基因（pseudollele)

緊密連鎖的功能性等位基因，但不是結(jié)構(gòu)性的等位基因。順?lè)次恢眯?yīng)（cis-transpositioneffects):

由于排列方式不同而表型不同的現(xiàn)象被稱為順?lè)次恢眯?yīng)。a擬等位基因的發(fā)現(xiàn)證明了：基因的可分性基因的可分性：即基因內(nèi)有大量的突變子和重組子。五、Benzer的重組實(shí)驗(yàn)(recombinationtest)S.Benzer利用T4噬菌體的兩個(gè)突變體的基因結(jié)構(gòu)分析證明了基因的可分性。S.Benzer所用T4的rⅡ突變是遺傳研究中所用的第一個(gè)條件致死突變型。其作用為使所侵染細(xì)胞迅速裂解形成大的噬菌斑。類(lèi)型不同大腸桿菌菌斑平板上表型BK(λ)S野生型小噬菌斑小噬菌斑小噬菌斑rⅠ大噬菌斑大噬菌斑大噬菌斑rⅡ大噬菌斑無(wú)噬菌斑（致死）小噬菌斑rⅢ大噬菌斑小噬菌斑小噬菌斑T4野生型和幾種突變型的區(qū)別實(shí)驗(yàn)材料：大腸桿菌T4的rⅡ47、rⅡ104基因大腸桿菌B菌株實(shí)驗(yàn)方法：rⅡ47、rⅡ104

↓

大腸桿菌B菌株↓菌液A、B

A↓

大腸桿菌B↓r47++r104r47r104++計(jì)數(shù):n

B↓

大腸桿菌K(入)↓++計(jì)數(shù):m重組頻率=2（rⅡ+噬菌斑）噬菌斑總數(shù)×100=2mn×100實(shí)驗(yàn)結(jié)論：recombinationtest可以遺傳圖的方式確定突變子之間的空間關(guān)系。靈敏度：10-6

實(shí)際最小重組頻率為0.02%實(shí)際最低圖距：0.02

由于T4染色體有1.8×105核苷酸對(duì)，其長(zhǎng)度為1500個(gè)圖距，因此0.02個(gè)圖距單位約等于2個(gè)核苷酸對(duì)，因此可以認(rèn)為基因相鄰核苷酸位置上的堿基突變是可以重組的。當(dāng)有些rⅡ突變不能發(fā)生重組時(shí)，可以認(rèn)為是同一核苷酸對(duì)的不同改變。六、互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)（complementationtest):

研究確定突變功能關(guān)系的實(shí)驗(yàn)方法。如果一個(gè)突變型可以補(bǔ)償另一個(gè)突變型所不具有的功能，這兩個(gè)突變型就稱為彼此互補(bǔ)；如果兩個(gè)突變型不能互補(bǔ)，說(shuō)明兩突變型一定有一個(gè)相同功能受到損傷。常用方法：斑點(diǎn)測(cè)試法（spottest)

通過(guò)條件致死突變型的互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)，可以確定許多不同來(lái)源的條件致死突變型影響的是否為相同的遺傳功能在致死條件下，如果雙重感染細(xì)菌的“二倍體”細(xì)胞產(chǎn)生子代噬菌體，表明：這兩種突變彼此互補(bǔ)，并分屬于不同的順?lè)醋?；在致死條件下，如果雙重感染細(xì)菌的“二倍體”細(xì)胞不能產(chǎn)生子代噬菌體，表明：這兩種突變彼此不能互補(bǔ)，所以屬于同一順?lè)醋?。例：T4突變型的互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)利用條件致死突變型，可以研究這些條件致死突變基因在基因組中的線性順序；研究這些基因在發(fā)育過(guò)程中的功能；利用互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，可以確定它們屬于哪一特定的順?lè)醋?。?shí)驗(yàn)表明：

T4顆粒的裝配是循著嚴(yán)格規(guī)定的形態(tài)發(fā)生途徑進(jìn)行的。所以，控制形態(tài)發(fā)生，編碼結(jié)構(gòu)蛋白的晚期基因的表現(xiàn)完全依賴于控制DNA復(fù)制等的早期基因正常功能的行使。突變噬菌體之間的互補(bǔ)作用檢測(cè)結(jié)論說(shuō)明：在互補(bǔ)測(cè)試中，如果兩個(gè)隱性突變表現(xiàn)出互補(bǔ)效應(yīng)，則證明這兩個(gè)突變型分別屬于不同的基因；如果兩個(gè)隱性突變不表現(xiàn)出互補(bǔ)效應(yīng)，則證明這兩個(gè)突變型屬于同一個(gè)基因。順?lè)醋樱╟istron）：不同突變之間沒(méi)有互補(bǔ)的功能區(qū)的一個(gè)區(qū)段稱為順?lè)醋?。即功能水平上的基因?；騼?nèi)互補(bǔ)（intra