乙型肝炎標(biāo)志物檢測(cè)及質(zhì)量控制

乙型肝炎標(biāo)志物檢測(cè)及質(zhì)量控制第一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日1主要內(nèi)容乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)質(zhì)量控制室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）第二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日Daneparticle小球形顆粒管狀和線狀顆粒HBVParticlesElectronmicrographHepatitisBVirus

第三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

HBV為DNA病毒，球形顆粒，結(jié)構(gòu)包括外殼蛋白（HBsAg，前S1、前S2）和核心顆粒（HBeAg，HBcAg，DNA聚合酶）。乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)第四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日GeographicDistributionofChronicHBVInfectionHBsAgPrevalence>8%-High

2-7%-Intermediate

<2%-Low全球約有20億人曾感染過(guò)乙肝其中3.5億人為慢性HBV感染者每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致得肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。第五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HepatitisBVirusSources:WHO/CSR/LYO/2002:HepatitisBCDC1992年流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果我國(guó)HBV感染率為：57.6%HBsAg攜帶者：9.75%,1.2億我國(guó)慢性乙肝病人：2000萬(wàn)采取措施乙型肝炎疫苗是最有效的防止HBV感染的方式2006年流行病學(xué)調(diào)查我國(guó)1-59歲人群HBsAg攜帶率為7.18%，5歲以下兒童的HBsAg僅為0.96%。第六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日人群HBsAg攜帶率下降

第七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日血清標(biāo)志物檢測(cè)

經(jīng)典乙肝“兩對(duì)半”乙肝表面抗原(HBsAg)：最早出現(xiàn)在血液中的病毒抗原乙肝表面抗體（抗HBs）：中和或保護(hù)抗體乙肝e抗原（HBeAg）：第二個(gè)出現(xiàn)在血液中的病毒抗原乙肝e抗體（抗HBe）乙肝核心抗體（抗HBc、抗HBcIgM）：最早出現(xiàn)在血液中的抗體（IgM）乙肝病毒前S1、S2抗原及抗體乙肝病毒大蛋白第八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日第九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg的發(fā)現(xiàn)1964年Blumberg（39歲）用瓊脂擴(kuò)散法（immunodiffusion,ID），從1名澳大利亞土著輸血患者血清中發(fā)現(xiàn)一種特殊抗原（BullNYAcadMed1964;40:377-386）1967年Blumberg（42歲）報(bào)告，從Down綜合征、白血病和肝炎患者血清中也發(fā)現(xiàn)該抗原（AnnIntMed1967;66:924-931）第十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg的發(fā)現(xiàn)1970年Blumberg（45歲）報(bào)告澳大利亞抗原是肝炎病毒1972年正式命名為HBsAg1976年榮獲諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)（51歲）2011年逝世，享年86歲BaruchBlumberg第十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBV感染后絕大多數(shù)感染者外周血中可出現(xiàn)HBsAg，含量在5ng～600μg/ml之間。最低含量為0.2ng/ml以下，高者可達(dá)2000μg/ml以上。HBV的前S/S基因編碼HBsAg，構(gòu)成病毒外膜，根據(jù)所帶亞型決定簇的不同分為adw、adr、ayw和ayr。我國(guó)絕大多數(shù)地區(qū)以adr為主，adw次之。HBsAg不僅存在于血液中，而且還存在于許多體液和分泌物中，如唾液、尿液、乳汁、精液等。乙肝病毒表面抗原（HBsAg）第十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日鑒別乙型肝炎與其他病毒性肝炎病毒性肝炎HBsAg陰性HBsAg陽(yáng)性其他病毒性肝炎乙型肝炎乙肝病毒表面抗原的應(yīng)用第十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日鑒別急性與慢性HBV感染急性乙型肝炎感染（<6個(gè)月）WeeksafterExposureSymptomsHBeAganti-HBeTotalanti-HBcIgManti-HBcanti-HBsHBsAg0481216202428323652100TiterCDC第十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日WeeksafterExposureRelativeConcentrationofReactantsIgMAnti-HBcTotalAnti-HBcHBsAgAcute(6months)HBeAgChronic(Years)Anti-HBe0481216202428323652YearsHBVDNALimitofDetection慢性乙肝感染（>6個(gè)月）第十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg檢測(cè)方法進(jìn)展定性定性定性定量70年代80年代90年代2000年以后

瓊脂擴(kuò)散反向血凝時(shí)間分辨對(duì)流免疫電泳放射免疫酶聯(lián)免疫或化學(xué)發(fā)光第十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日免疫耐受期免疫清除期（活動(dòng)期）非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期再活動(dòng)期不需要治療需要治療不需要治療需要治療HBV自然感染史第十七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

感染乙肝病毒2-11周后血清開(kāi)始出現(xiàn)HBsAg，之后出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶異常和臨床癥狀。（1）HBsAg定性檢測(cè)陽(yáng)性：見(jiàn)于急性乙肝患者，慢性乙肝患者，無(wú)癥狀乙肝病毒攜帶者。HBsAg的臨床意義

第十八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日（2）HBsAg定量檢測(cè)------老指標(biāo)新意義

參考值：0-0.05IU/mL

臨床意義：可作為HBV攜帶者乙肝病毒復(fù)制的參考指標(biāo)評(píng)價(jià)拉美呋定的治療效果監(jiān)測(cè)應(yīng)用α-干擾素治療病人的乙肝病毒復(fù)制確定肝移植病人免疫球蛋白的使用劑量對(duì)患者的應(yīng)答情況進(jìn)行預(yù)測(cè)對(duì)接受治療患者的免疫控制（HBsAg轉(zhuǎn)陰）結(jié)局進(jìn)行預(yù)測(cè)。第十九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用

-作為HBV攜帶者乙肝病毒復(fù)制的參考指標(biāo)HBeAg是反映病毒復(fù)制的指標(biāo),并且HBeAg轉(zhuǎn)陰通常是預(yù)示著HBVDNA水平降低到低于105copies/ml的標(biāo)志。然而，一部分HBeAg陰性但是HBVDNA仍然保持較高的滴度(>106copies/ml)。HBsAgandHBVDNA水平有較高的顯著性相關(guān).作為一種替代檢測(cè)，HBsAg的定量檢測(cè)能夠準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)HBV的復(fù)制。HBsAg高于15000IU/ml可能反應(yīng)HBVDNA處于較高水平的滴度以及HBeAg處于陽(yáng)性的狀態(tài)。如果HBsAg滴度在1600至15000IU/ml之間，應(yīng)該考慮檢測(cè)HBVDNA。第二十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

HBsAg定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用

--評(píng)價(jià)拉美呋定的治療效果當(dāng)出現(xiàn)YMDD突變出現(xiàn)的時(shí)候,通常在生化指標(biāo)出現(xiàn)異常之前血清HBsAg濃度和HBVDNA滴度增加。在YMDD突變出現(xiàn)之后，血清HBVDNA持續(xù)升高,然而HBsAg的增加是瞬時(shí)的,與ALT的升高相似。(A)在大部分病人中,血清HBsAg的增加是由于HBVDNA的增加.然而在某些病人中,血清HBsAg在HBVDNA增加幾個(gè)月之前便增加。(B).除了監(jiān)測(cè)HBVDNA水平之外，同時(shí)監(jiān)測(cè)血清HBsAg濃度或許能夠有利于較早地發(fā)現(xiàn)在拉美呋定治療中的耐藥突變。第二十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用

--監(jiān)測(cè)應(yīng)用a-干擾素治療病人的乙肝病毒復(fù)制量化評(píng)估乙肝病毒表面抗原的出現(xiàn)是大有應(yīng)用前景的，因?yàn)樵摲椒ㄊ且缓?jiǎn)單而廉價(jià)的方法，可以用于慢性乙型肝炎患者接受干擾素治療時(shí)監(jiān)測(cè)病毒復(fù)制的指標(biāo)。第二十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日乙肝病人肝移植后使用乙肝免疫球蛋白可以有效地防止再感染的發(fā)生。HBsAg降低至1IU/ml以下時(shí)，HBsAg和HBIG的呈高度相關(guān)（r=0.97,r=1.00）；Anti-HBs升高至大于1000IU/L時(shí)，HBsAg和HBIG的呈高度相關(guān)（r=0.94,r=1.00）。在移植期間，用于降低HBsAg增加anti-HBs的HBIG的劑量取決于HBsAg的水平而不是HBVDNA水平。HBsAg定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用

-確定肝移植病人免疫球蛋白的使用劑量第二十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日對(duì)患者的應(yīng)答情況進(jìn)行預(yù)測(cè)

2010年，Sonneveld等研究結(jié)果表明：HBeAg（+）患者，用干擾素治療12周時(shí)HBsAg未下降的患者中97%為無(wú)應(yīng)答，且最終無(wú)一例獲得HBsAg轉(zhuǎn)陰。因此認(rèn)為治療12周時(shí)HBsAg無(wú)下降的患者獲得持續(xù)病毒應(yīng)答（SVR）的幾率非常小，同時(shí)不大有HBsAg轉(zhuǎn)陰的機(jī)會(huì)，所以臨床醫(yī)生可以根據(jù)12周時(shí)患者的HBsAg降低情況來(lái)決定是否繼續(xù)接受治療。第二十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日對(duì)患者的應(yīng)答情況進(jìn)行預(yù)測(cè)干擾素治療HBeAg（+）

乙肝患者12周時(shí)HBsAg水平是今后HBsAg清除的預(yù)測(cè)指標(biāo)治療12周時(shí)HBsAg無(wú)下降（>20000IU/ML）可預(yù)測(cè)低應(yīng)答，可作為停藥規(guī)則。治療過(guò)程中HBsAg無(wú)下降，復(fù)發(fā)率高。治療12周時(shí)HBsAg明顯下降（<20000IU/ML）可預(yù)測(cè)高應(yīng)答，治療效果較好，繼續(xù)用藥，完成療程。第二十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日對(duì)患者的應(yīng)答情況進(jìn)行預(yù)測(cè)干擾素治療HBeAg（-）

慢性乙肝患者，12周時(shí)無(wú)HBsAg下降、HBV-DNA下降<2Logcp/mL，可作為停藥指標(biāo)治療12周時(shí)HBsAg下降（<1500IU/mL），HBV-DNA下降<2Logcp/mL，血清型轉(zhuǎn)換為0%，可作為停藥規(guī)則。第二十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日用核苷類似物治療慢性乙肝時(shí)HBsAg下降模式與HBsAg長(zhǎng)期清除有關(guān)HBsAg被清除的患者可能停藥快速下降HBsAg>1Log（1年內(nèi)下降），3年時(shí)HBsAg消失在25%。緩慢下降HBsAg<1Log（1年內(nèi)下降），3年時(shí)HBsAg消失在1.4%。穩(wěn)定，無(wú)變化，3年時(shí)HBsAg消失在0%。HBsAg消失患者的HBsAg呈快速和持續(xù)下降。第二十七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日對(duì)接受治療患者的免疫控制（HBsAg轉(zhuǎn)陰）結(jié)局進(jìn)行預(yù)測(cè)2009年Heathcote等研究結(jié)果表明，與所有患者的總體水平相比，發(fā)生HBsAg轉(zhuǎn)陰患者的HBsAg水平在治療期間明顯下降，而HBVDNA水平則無(wú)明顯差異。這說(shuō)明通過(guò)HBsAg定量檢測(cè)提前預(yù)測(cè)患者獲得免疫清除的可能性，從而提高患者的治療信心和療效。Wursthorn等在2010年研究結(jié)果顯示，口服抗病毒治療中，HBsAg的水平下降尤其是迅速下降與HBsAg清除密切相關(guān)，認(rèn)為HBsAg清除的患者可以考慮停止治療。第二十八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg清除和血清學(xué)轉(zhuǎn)換是理想的治療終點(diǎn)持久免疫控制是達(dá)到HBsAg清除的重要條件HBsAg下降HBVDNA抑制治療中持久免疫控制HBsAg清除減少肝硬化和肝癌，提高存活率第二十九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg清除和血清學(xué)轉(zhuǎn)換是理想的治療終點(diǎn)HBsAg血清轉(zhuǎn)換可作為持久免疫控制指標(biāo)即使使用高敏度試劑測(cè)不到HBVDNA并不表示無(wú)循環(huán)的HBV和/或HBV感染已清除時(shí)點(diǎn)評(píng)價(jià)病毒載量可作為抗病毒治療有效和持續(xù)應(yīng)答HBsAg定量檢測(cè)可確定宿主免疫系統(tǒng)是否已有效控制HBV感染第三十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg檢測(cè)在個(gè)體化衛(wèi)生保健中的作用健康無(wú)癥狀疾病有癥狀疾病慢性疾病或治愈危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)篩查診斷預(yù)后評(píng)價(jià)治療應(yīng)答預(yù)測(cè)監(jiān)測(cè)發(fā)生疾病傾向早檢測(cè)預(yù)測(cè)可能的病情預(yù)測(cè)對(duì)治療的可能應(yīng)答檢測(cè)治療效果/疾病復(fù)發(fā)第三十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg測(cè)定中可能存在的挑戰(zhàn)：假陰性HBsAg含量低于所用方法的測(cè)定下限之下。如感染的“窗口期”、急性期后或恢復(fù)期、自限性感染末期的攜帶者等編碼HBsAg的HBV-S基因的突變HCV/HDV重疊感染對(duì)HBV復(fù)制和/或HBsAg的表達(dá)的抑制作用

測(cè)定方法所用抗體對(duì)HBV不同基因型檢測(cè)敏感性的不同鉤狀效應(yīng)（HOOKEFFECT）第三十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg的變異所致的不常見(jiàn)的HBV

標(biāo)志物模式或不一致的結(jié)果單獨(dú)抗HBc陽(yáng)性。HBsAg陰性但HBeAg陽(yáng)性。HBsAg（HBeAg）和抗HBs（大多為<100IU/ml的低滴度）同時(shí)存在。使用不同廠家的HBsAg試劑盒得到的不一致結(jié)果。第三十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

抗-HBs是HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體，是一種保護(hù)性抗體，能中和HBV，初感染2-6月出現(xiàn)?？?HBs陽(yáng)性見(jiàn)于HBV既往感染者，乙肝恢復(fù)期及乙肝疫苗免疫后。乙肝病毒表面抗體（HBsAb）第三十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

乙肝病毒表面抗體（HBsAb）

抗-HBs定量測(cè)定：（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保護(hù)性，需要注射乙肝疫苗（3針：0-1-6方案）。（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保護(hù)性，但較弱，需要乙肝疫苗強(qiáng)化注射（1針）。（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很強(qiáng)的保護(hù)性，不需要注射乙肝疫苗。第三十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日乙肝病毒表面抗體（HBsAb）接受乙肝疫苗接種者，體內(nèi)血循環(huán)中除了抗HBs外，不應(yīng)出現(xiàn)其它乙肝病毒感染血清免疫學(xué)標(biāo)志物，如抗HBe、抗HBc等，一旦出現(xiàn)除抗HBs以外的標(biāo)志物，則應(yīng)視為既往HBV感染。血清中抗HBs和HBsAg同時(shí)檢出，可能為抗HBs產(chǎn)生的早期，或?qū)儆诓煌瑏喰偷腍BV感染，或由HBV的S基因變異所致。自然發(fā)生的逃逸變異株可使某些慢性攜帶者同時(shí)存在HBsAg和抗HBs，產(chǎn)生的抗體直接針對(duì)血循環(huán)中HBsAg抗原不含的表位，因而不具保護(hù)作用。第三十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和核心抗體（抗HBc）機(jī)體對(duì)HBV抗原的免疫應(yīng)答最早出現(xiàn)的是對(duì)HBcAg的細(xì)胞免疫應(yīng)答，隨后是體液免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗HBc，總抗HBc包括抗HBc-IgM和HBc-IgG等。抗HBc不是保護(hù)性抗體。抗HBc在血中呈低滴度且與抗HBs同時(shí)存在，是既往感染的標(biāo)志。在HBV高流行人群中，抗HBc常作為疫苗免疫前的篩檢方法。在歐洲和美國(guó)，抗HBc還是血液篩查的一個(gè)指標(biāo)。在我國(guó)，抗HBc沒(méi)有作為血液篩查指標(biāo)，其主要原因可能是抗HBc檢測(cè)的假陽(yáng)性導(dǎo)致血液廢棄過(guò)多。第三十七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和核心抗體（抗HBc）HBcAg是構(gòu)成病毒核心顆粒部分，其活性部分位于顆粒內(nèi)部，外周血沒(méi)有游離的HBcAg，經(jīng)過(guò)特殊處理后HBcAg可釋放出來(lái)。HBcAg陽(yáng)性表示病毒在復(fù)制，傳染性強(qiáng)。抗-HBc：不是中和抗體，有IgG和IgM兩種形式。IgM在早期出現(xiàn)，而IgG在恢復(fù)期出現(xiàn)，可持續(xù)多年或終身存在。第三十八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日抗-HBc水平-研究展望：未來(lái)的研究角度乙肝感染的不同時(shí)期抗-HBc水平及其意義急性乙肝轉(zhuǎn)歸過(guò)程的抗-HBc水平乙型重型肝炎（肝衰竭）抗-HBc水平既往感染者和隱匿性乙肝抗-HBc水平抗-HBc水平與肝臟病理的聯(lián)系抗-HBc水平與T細(xì)胞免疫水平的聯(lián)系抗-HBc水平與長(zhǎng)期轉(zhuǎn)歸預(yù)后的關(guān)系第三十九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

乙肝病毒e抗原和e抗體

HBeAg為可溶性，可分泌到細(xì)胞外，是病毒復(fù)制的標(biāo)志。HBeAg刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBe抗體。（1）e抗原可作為急性乙肝輔助診斷和預(yù)后的指標(biāo)。HBeAg在乙型肝炎潛伏期后期出現(xiàn)，晚于HBsAg，它隨著HBsAg的消失而消失，若急性肝炎發(fā)病3-4個(gè)月后HBeAg轉(zhuǎn)陰，則預(yù)后良好。第四十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日

乙肝病毒e抗原和e抗體（2）HBeAg存在于HBsAg陽(yáng)性的病人和攜帶者的血液中，其中大多數(shù)伴有HBV-DNA，DNA多聚酶陽(yáng)性。HBeAg陽(yáng)性說(shuō)明病毒復(fù)制，具有很強(qiáng)的傳染性?？?HBe陽(yáng)性者傳染性較低。（3）當(dāng)乙肝病毒的前核心區(qū)發(fā)生點(diǎn)突變時(shí)，可使得HBeAg無(wú)法表達(dá)，表現(xiàn)為血清HBeAg或抗HBe測(cè)定持續(xù)為陰性，但血清HBsAg或HBV-DNA可表現(xiàn)為陽(yáng)性。(4）抗HBe陽(yáng)性說(shuō)明病毒復(fù)制減少，傳染性弱，但并非沒(méi)有傳染性?？笻Be不是保護(hù)性抗體。第四十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBeAg定量檢測(cè)的應(yīng)用HBsAg轉(zhuǎn)陰或血清學(xué)轉(zhuǎn)換是理想終點(diǎn)，但是非常難以達(dá)到。臨床已經(jīng)證實(shí)，在HBeAg陽(yáng)性患者，可以把持久的HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換作為滿意治療終點(diǎn)來(lái)指導(dǎo)治療。目前看來(lái)對(duì)HBeAg陽(yáng)性患者，HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換是一個(gè)可以參考的重要時(shí)間表。HBeAg滴度下降可以非常好的預(yù)測(cè)72周時(shí)是否發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換。研究還發(fā)現(xiàn)，干擾素治療時(shí)HBeAg水平明顯下降的患者，其HBsAg轉(zhuǎn)陰也明顯增加。如果在24周時(shí)患者HBeAg依然>100PEIU/mL，則建議調(diào)整治療方案。第四十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBV變異的檢測(cè)

HBV突變的原因乙肝病毒的復(fù)制是通過(guò)用逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）由RNA到DNA，由于逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏必要的校正能力。逃避機(jī)體清除病毒的壓力。第四十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg突變

定義：HBsAg的突變是乙肝病毒的表面抗原蛋白的決定簇的結(jié)構(gòu)改變，這個(gè)結(jié)構(gòu)的改變是由病毒核酸和氨基酸序列出現(xiàn)的替代，刪除或插入性的變化所引起。位置:報(bào)道中最常見(jiàn)的變異位于“a”決定簇即有雙環(huán)結(jié)構(gòu)的乙肝病毒S基因的124–147a.a.報(bào)道中最常見(jiàn)的變異株是Gly（甘氨酸）145Arg（精氨酸）。原理:“a”決定簇具有很強(qiáng)的抗原性，所以是中和抗體的誘導(dǎo)位和作用靶位，在這個(gè)區(qū)域的發(fā)生變異可以逃逸宿主產(chǎn)生的中和性抗體的中和作用。第四十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg逃逸突變的影響逃避宿主的中和作用，導(dǎo)致HBV突破性感染。在有HBsAg變異株檢測(cè)能力的測(cè)試中發(fā)現(xiàn)HBsAg和anti-HBs共存。在無(wú)HBsAg變異株檢測(cè)能力的測(cè)試中出現(xiàn)假陰性結(jié)果，可能在臨床診斷和血液篩查中造成嚴(yán)重后果。乙肝疫苗接種加速了HBsAg的突變，乙肝的免疫治療和抗病毒治療也會(huì)導(dǎo)致HBsAg的突變。第四十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日常見(jiàn)乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)模式HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程-----未感染+-+--急性感染初期+-+-+急性或慢性乙型肝炎，高傳染性（大三陽(yáng)）+---+急性、慢性乙型肝炎或HBsAg攜帶者+--++急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性（小三陽(yáng)）第四十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程----+急性HBV感染“核心窗口期”或既往曾感染過(guò)乙肝，有流行病學(xué)意義

---++乙肝恢復(fù)期，弱傳染性-+-++急性乙肝康復(fù)期，開(kāi)始產(chǎn)生免疫力-+--+急性HBV感染康復(fù)期或有既往感染史，目前保持免疫力-+---疫苗接種后或HBV感染后康復(fù)常見(jiàn)乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)模式第四十七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果的報(bào)告與解釋結(jié)果解釋的責(zé)任屬于臨床實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)的人群解釋結(jié)果。臨床解釋的責(zé)任屬于臨床醫(yī)生，其應(yīng)根據(jù)臨床信息解釋結(jié)果。臨床實(shí)驗(yàn)室與臨床醫(yī)生的對(duì)話對(duì)適當(dāng)利用實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)非常重要。第四十八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日乙肝“兩對(duì)半”結(jié)果解釋的困擾HBsAg和抗-HBs同時(shí)出現(xiàn)HBeAg和抗-HBe同時(shí)出現(xiàn)HBeAg陽(yáng)性但HBsAg陰性只有抗-HBe和抗-HBc陽(yáng)性單項(xiàng)抗-HBe陽(yáng)性單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性第四十九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日單獨(dú)HBsAg陽(yáng)性出現(xiàn)特點(diǎn)可能的解釋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原因高流行地區(qū)：70%HBsAg單獨(dú)陽(yáng)性是假陽(yáng)性結(jié)果低流行地區(qū)：50%的少見(jiàn)的HBV血清學(xué)模式為HBsAg單獨(dú)陽(yáng)性(1)HBV急性感染早期(2)HBV疫苗接種后的抗原血癥

(3)由于機(jī)體對(duì)HBcAg免疫耐受、感染有缺陷的HBV病毒株導(dǎo)致機(jī)體不產(chǎn)生HBsAg假陽(yáng)性結(jié)果第五十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBsAg和抗-HBs同時(shí)陽(yáng)性出現(xiàn)特點(diǎn)可能的解釋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原因可出現(xiàn)于無(wú)癥狀攜帶者、急慢性和隱匿性感染者，發(fā)生率在5%-30%不等（1）pre-S基因、S基因的突變，使得突變型HBsAg和針對(duì)野生型HBsAg的抗體同時(shí)存在（2）產(chǎn)生亞型特異的HBsAb。（3）新的HBV病毒株感染（4）HBV隱匿性感染中，免疫抑制下HBV復(fù)發(fā)感染（1）HBsAg假陽(yáng)性結(jié)果（2）HBsAb假陽(yáng)性少見(jiàn)。第五十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日單獨(dú)HBcAb陽(yáng)性出現(xiàn)特點(diǎn)可能的解釋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原因低流行地區(qū)：獻(xiàn)血員人群的發(fā)生率為1%HBV流行地區(qū)：獻(xiàn)血員人群的發(fā)生率為20%可見(jiàn)于HBV急性感染恢復(fù)的“窗口期”、HBV感染恢復(fù)多年以后或慢性HBV感染。慢性HBV感染中單獨(dú)HBcAb陽(yáng)性可能是：（1）隱匿性感染：血清中HBsAg陰性、血清或組織中HBVDNA陽(yáng)性，HBV其它血清學(xué)標(biāo)志物可以是陽(yáng)性也可以是陰性。例如合并感染其他肝炎病毒可造成隱匿性感染。（2）形成HBsAg-HBsAb免疫復(fù)合物（1）HBcAb假陽(yáng)性（2）HBsAg變異導(dǎo)致假陰性結(jié)果（3）抗-HBs濃度低于檢測(cè)限。第五十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日HBeAg和HBeAb同時(shí)陽(yáng)性出現(xiàn)特點(diǎn)可能的解釋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原因HBeAg和HBeAb同時(shí)陽(yáng)性抗原抗體轉(zhuǎn)換過(guò)程中HBeAg濃度過(guò)高導(dǎo)致的HBeAb假陽(yáng)性：競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb時(shí)，樣本中的HBeAg的量足以同時(shí)結(jié)合酶標(biāo)板上的HBeAb和游離的酶結(jié)合物，使得酶結(jié)合物不能與結(jié)合于固相上的HBeAg相結(jié)合，造成不顯色的結(jié)果，導(dǎo)致HBeAb假陽(yáng)性。第五十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日單獨(dú)HBeAg陽(yáng)性出現(xiàn)特點(diǎn)可能的解釋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原因單獨(dú)HBeAg陽(yáng)性HBeAg陽(yáng)性的孕婦，可通過(guò)胎盤將HBeAg傳給胎兒，造成新生兒HBeAg單獨(dú)陽(yáng)性。（1）HBsAg變異導(dǎo)致HBsAg假陰性結(jié)果；（2）HBeAg假陽(yáng)性。第五十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日單獨(dú)HBeAb陽(yáng)性出現(xiàn)特點(diǎn)可能的解釋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原因單獨(dú)HBeAb陽(yáng)性無(wú)（1）HBsAg變異導(dǎo)致HBsAg假陰性結(jié)果；（2）HBeAb假陽(yáng)性第五十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日如何正確地理解和應(yīng)用乙肝血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果：臨床實(shí)驗(yàn)室方面應(yīng)在充分閱讀理解試劑盒說(shuō)明書的基礎(chǔ)上，建立檢測(cè)報(bào)告的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。與相應(yīng)的臨床科室醫(yī)生充分交流溝通，使得臨床醫(yī)生能充分理解結(jié)果的報(bào)告方式及內(nèi)在含義，以及在標(biāo)本采集、患者用藥上可能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，從而盡可能避免標(biāo)本收集環(huán)節(jié)可能給結(jié)果帶來(lái)的影響。可能的話，在結(jié)果報(bào)告單上加上對(duì)結(jié)果的綜合解釋。第五十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日如何正確地理解和應(yīng)用乙肝血清學(xué)標(biāo)志物

檢測(cè)結(jié)果：臨床醫(yī)生方面根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康模_地開(kāi)出檢驗(yàn)申請(qǐng)單。

最重要的是要明確檢測(cè)乙肝“兩對(duì)半”的目的！是診斷是否感染？還是抗病毒治療預(yù)后判斷？對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果不應(yīng)是固定的靜止的去看待，應(yīng)以動(dòng)態(tài)的縱向的和橫向的方式去看。

作為一個(gè)特定的HBV感染者，某一次檢測(cè)乙肝“兩對(duì)半”，什么樣的模式組合都有可能出現(xiàn)。出現(xiàn)某種罕見(jiàn)模式，既可能是由于患者感染后的免疫狀態(tài)的反映，也可能是標(biāo)本中的干擾因素所致的假陽(yáng)性或假陰性，或?qū)嶒?yàn)室不可知原因的檢測(cè)錯(cuò)誤。第五十七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日質(zhì)量控制的目的：給臨床和患者提供準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)而為疾病的診斷提供有利依據(jù)。質(zhì)量控制第五十八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日質(zhì)量管理概覽QM分析前分析中分析后樣本采集樣本前處理樣本運(yùn)輸儀器狀態(tài)QC樣本保存報(bào)告發(fā)放臨床溝通CQI維護(hù)保養(yǎng)試劑管理耗材管理人員管理定標(biāo)、校準(zhǔn)定標(biāo)驗(yàn)證室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)控方法學(xué)驗(yàn)證QA投訴處理························第五十九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日質(zhì)控目的的新理解規(guī)范所有人：主任操作者病人臨床廠家很大程度上，質(zhì)控的目的是為了失控第六十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日質(zhì)控品精密度評(píng)價(jià)室內(nèi)質(zhì)控(精密度控制)質(zhì)控品定標(biāo)(正確度控制)定標(biāo)液（校準(zhǔn)品）標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）正(準(zhǔn))確度評(píng)價(jià)室間質(zhì)評(píng)（比對(duì)計(jì)劃）第六十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)）：使檢驗(yàn)結(jié)果具有可比性，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如參加衛(wèi)生部臨檢中心及省臨檢中心的室間質(zhì)評(píng)。室內(nèi)質(zhì)量控制：使檢驗(yàn)結(jié)果具有很好的重復(fù)性，決定當(dāng)日結(jié)果能

否發(fā)出。質(zhì)量控制第六十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日室間質(zhì)評(píng)：如參加衛(wèi)生部臨檢中心及省臨檢中心的室間質(zhì)評(píng)。室內(nèi)質(zhì)控：

1、原廠質(zhì)控品2、第三方質(zhì)控品：從衛(wèi)生部臨檢中心及省臨檢中心購(gòu)買；商品化質(zhì)控品

3、自制：利用試劑盒內(nèi)的陰陽(yáng)性對(duì)照或患者的血清進(jìn)行配置質(zhì)控品來(lái)源第六十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日定性、半定量與定量項(xiàng)目的質(zhì)量控制定性試驗(yàn)：報(bào)告“陰性-”或者“陽(yáng)性+”的試驗(yàn)。半定量試驗(yàn)：報(bào)告“x+”、“陰性-”或者“滴度”的試驗(yàn)。定量試驗(yàn)：報(bào)告定量檢測(cè)項(xiàng)目的試驗(yàn)。質(zhì)量控制第六十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日常見(jiàn)定性、半定量及定量試驗(yàn)的檢測(cè)報(bào)告方式定性檢測(cè)肉眼判讀結(jié)果，無(wú)法（需）讀取檢測(cè)信號(hào)大小（強(qiáng)弱），直接報(bào)告陰陽(yáng)性的。如：ENA抗體、金標(biāo)法項(xiàng)目、免疫印跡法項(xiàng)目。儀器判讀連續(xù)檢測(cè)信號(hào)，使用Cut-off判斷陰陽(yáng)性的。如：ELISA、發(fā)光儀等。半定量檢測(cè)肉眼或者儀器判讀，判別顏色強(qiáng)弱并報(bào)告“x+”或報(bào)告稀釋度的。如：尿干化學(xué)、凝集試驗(yàn)。定量檢測(cè)第六十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日定性、半定量及定量項(xiàng)目的質(zhì)控方法定性檢測(cè)：直接報(bào)告陰陽(yáng)性的注意“質(zhì)控品”與“陰陽(yáng)性對(duì)照”的區(qū)別。需要陰性和陽(yáng)性質(zhì)控各一。最好有弱陽(yáng)性質(zhì)控。無(wú)法統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制，但須回顧性統(tǒng)計(jì)符合率。定性檢測(cè)：以Cut-off值報(bào)告陰陽(yáng)性結(jié)果的。用陰性質(zhì)控、弱陽(yáng)性質(zhì)控（如不可取得，只用陽(yáng)性質(zhì)控）來(lái)控制。夾心法弱陽(yáng)性質(zhì)控的S/CO約為1.5-4，視不同方法而定，如競(jìng)爭(zhēng)法：S/CO約為。用“符合度”判斷質(zhì)控情況。用L-J圖控制精密度：定性sAg、sAb、eAgCV%<15%左右。eAb、cAbCV%<20%定量sAg、sAb<10%第六十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日定性、半定量及定量項(xiàng)目的質(zhì)控方法半定量檢測(cè)：報(bào)告“x+”或稀釋度的選擇陰性和適中濃度質(zhì)控品。如2+。1+~3+為在控。無(wú)法統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制，但須回顧性統(tǒng)計(jì)各結(jié)果比率。定量檢測(cè)使用定量質(zhì)控方法第六十七頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日定性項(xiàng)目質(zhì)控還因注意的幾個(gè)問(wèn)題質(zhì)控判斷和精密度控制分開(kāi)。推薦用S/CO值建立均值、SD、CV%。因?yàn)橛行┳x數(shù)值很低的項(xiàng)目是不符合相應(yīng)統(tǒng)計(jì)要求的。如過(guò)低值的CV%會(huì)很大。加心法使用弱陽(yáng)性和陽(yáng)性統(tǒng)計(jì)。競(jìng)爭(zhēng)法用陰性和弱陽(yáng)性統(tǒng)計(jì)。避開(kāi)極低的S/CO。最好附加極高值質(zhì)控排除鉤狀效應(yīng)。第六十八頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日乙肝標(biāo)志物質(zhì)量控制主要包括三個(gè)方面：（1）測(cè)定前的質(zhì)量控制；（2）統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制；（3）質(zhì)量控制的評(píng)價(jià)。第六十九頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日測(cè)定前的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓(xùn)第七十頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理實(shí)驗(yàn)室空間及工作流程的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件的控制：溫濕度控制設(shè)備、穩(wěn)壓或不間斷電源儀器設(shè)備及管理：酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、全自動(dòng)免疫分析儀、加樣器等應(yīng)建立技術(shù)檔案，并定期維護(hù)和校準(zhǔn)第七十一頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日理想的試劑試劑的質(zhì)檢(確認(rèn))

測(cè)定下限(Detectionlimit)

批內(nèi)變異(<10%)和批間變異(<15-20%)“鉤狀”效應(yīng)(Hookeffect)

變異體的檢測(cè)能力(HBsAg)對(duì)本室所用室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)的一致性第七十二頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日理想的操作方法按照試劑盒說(shuō)明書操作即可嗎?操作中影響測(cè)定結(jié)果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)寫出具有可操作性的SOP第七十三頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日人員培訓(xùn)培訓(xùn)所涉及的范圍:儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)；試劑、方法原理；質(zhì)量管理體系；相關(guān)法律法規(guī)、相關(guān)領(lǐng)域的新技術(shù)、新理念和新進(jìn)展；實(shí)驗(yàn)操作技能等。如何培訓(xùn)：講座、討論、自學(xué)和參加培訓(xùn)班等。培訓(xùn)的評(píng)估：書面考試、實(shí)驗(yàn)考核、討論心得、論文、綜述等。對(duì)培訓(xùn)者的評(píng)估：培訓(xùn)者的背景、資歷、在相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)的成就、所接受過(guò)的相關(guān)領(lǐng)域外部培訓(xùn)情況等。第七十四頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法定性免疫測(cè)定質(zhì)控物濃度的選擇室內(nèi)質(zhì)控物的質(zhì)檢(確認(rèn))每塊板質(zhì)控物的數(shù)量質(zhì)控規(guī)則Levey-Jennings質(zhì)控圖方法第七十五頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日定性免疫測(cè)定質(zhì)控物濃度的選擇可選擇S/CO值減去精密度測(cè)定中得到的三倍批間CV（通常的ELISA測(cè)定批間變異（CV%）在15%左右）與該S/CO值的乘積（意即三倍SD）仍大于1的質(zhì)控血清作監(jiān)測(cè)重復(fù)性的室內(nèi)質(zhì)控用

計(jì)算公式：S/CO（1-3CV%）=S/CO-3SD

S/CO比值可在1.5～4之間。同時(shí)選擇S/CO處于1.0～1.5左右的質(zhì)控血清以判斷每次測(cè)定時(shí)試劑盒測(cè)定下限的有效性。第七十六頁(yè)，共八十九頁(yè)，2022年，8月28日室內(nèi)質(zhì)控物的質(zhì)檢(確認(rèn))使用前的質(zhì)檢：檢測(cè)的S/CO比值是否合適、與前一批質(zhì)控物的S/CO比值的比較使用中的確認(rèn)：