GMP質(zhì)量體系蟲草頭孢菌粉檢驗操作規(guī)程

PAGE4PAGE1目的：為檢驗蟲草頭孢菌粉規(guī)定一個標(biāo)準(zhǔn)的程序，以便獲得準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。范圍：適用于蟲草頭孢菌粉的檢驗。職責(zé)：檢驗室主任、檢驗員。規(guī)程：1． 性狀 本品為黃棕色至深棕色的粉末。2．鑒別2.1 試劑與儀器2.1.1 無水乙醇 2.1.2 茚三酮試液2.1.3 冰醋酸 2.1.4 醋酐2.1.5 硫酸 2.1.6 亞甲藍(lán)試液2.1.7 玻片 2.1.8 滴管2.1.9 刻度移液管 2.1.10 試管2.1.11 顯微鏡 2.1.12 漏斗，漏斗架2.1.13 濾紙 2.1.14 燒杯2.1.15 電子天平(萬分之一克)2.2 項目與步驟2.2.1 取本品涂片加亞甲藍(lán)試液染色，鏡檢可見有隔，多核，分枝的菌絲體。2.2.2 稱取本品約0.5g置試管中加無水乙醇5ml，振搖提取20分鐘，濾過，取濾液1ml，加茚三酮試液1ml水浴加熱數(shù)分鐘后，即顯藍(lán)紫色。2.2.3 取鑒別⑵項下的濾液1ml，蒸干，殘渣加冰醋酸1ml溶解，加醋酐1ml加硫酸1滴。初現(xiàn)黃色，漸變紅色，紫色，藍(lán)色，墨綠色。2.2.4 在腺苷含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品中應(yīng)有與對照品峰的保留時間一致的峰。3．檢查3.1 試劑與儀器3.1.1 稱量瓶 3.1.2 恒溫干燥箱3.1.3 坩堝 3.1.4 茂福爐3.1.5 電子天平(萬分之一克)3.2 項目與步驟3.2.1 干燥失重 稱取本品置稱量瓶中，精密稱定，按干燥失重（SOP-QC-325-00）測定，在105℃干燥到恒重，減失重量不得過7.0%為符合規(guī)定。3.2.2 熾灼殘渣：取本品約1g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，照熾灼殘渣檢查(SOP-QC-327-00)，在700～800℃熾灼至恒重為符合規(guī)定。4．含量測定4.1 試劑與儀器4.1.1 C18硅膠色譜柱 4.1.2 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液4.1.3 0.01mol/L磷酸鈉溶液 4.1.4 腺苷對照品4.1.5 高碘酸鈉溶液 4.1.6 碘化鉀試液，淀粉指示液，硫醇4.1.7 硫代硫酸鈉滴定液 4.1.8 容量瓶(50ml)，碘瓶(250ml)4.1.9 酸式滴定管 4.1.10 電子天平(萬分之一克)，稱量瓶4.1.11 注射器(10ml)，過濾器，濾膜 4.1.12 高效液相色譜儀4.1.13 水浴箱4.2 腺苷按高效液相色譜法（SOP-QC-306-00）檢測4.2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗 用C18硅膠色譜柱(PH適應(yīng)范圍應(yīng)大于8)，流動相為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇(85:15)。流速為1.0ml/min；檢測波長為260nm。量取腺苷對照溶液[※]20μl；注入液相色譜儀，理論板數(shù)按腺苷峰計算應(yīng)不低于20004.2.2 腺苷對照溶液和樣品溶液的制備以及測定 [※]腺苷對照溶液的制備 精密稱取腺苷對照品0.25g置50ml量瓶中，加0.01mol/L磷酸鈉溶液適量，充分振搖后，超聲提取20分鐘，放冷，用0.01mol/L磷酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。 樣品溶液的制備與測定 取本品約0.25g精密稱定置50ml量瓶中，加0.01mol/L磷酸鈉溶液適量，充分振搖后，超聲提取20分鐘，放冷，用0.01mol/L磷酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為樣品溶液。量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，將腺苷對照溶液按同法測定。按下式計算本品中腺苷（C10H13N5O4）的折干含量，不得少于0.2%為符合規(guī)定。 Cd：本品的折干含量 CW：本品的濕品含量 B%：本品的含水百分?jǐn)?shù) A1：樣品溶液中腺苷色譜峰面積或峰高； A2：腺苷對照溶液中土霉素的色譜峰面積或峰高； W1：樣品的稱樣量(g)； W2：腺苷對照品的稱樣量(g)； C2：腺苷對照品中腺苷的含量(%)； 允許差：本法的相對偏差不得超過2.0%。4.3 甘露醇類物質(zhì)4.3.1 高碘酸鈉(鉀)溶液的制備：取硫酸溶液（1-20）90ml與高碘酸鈉（鉀）溶液（2.3→1000）110ml混勻即得。4.3.2 碘化鉀試液的制備：取碘化鉀16.5g加水使溶解成100ml即得。4.3.3 硫代硫酸鈉（0.02mol/L）滴定液的制備：按硫代硫酸鈉滴定液（SOP-QC-10-353-00）的制備方法配制，即得。4.3.4 淀粉指示液的制備：取可溶性淀粉0.5g加水5ml攪勻后，緩緩傾入100ml沸水中，隨加隨攪拌，繼續(xù)煮沸2分鐘，放冷，傾取上層清液，即得。4.3.5 供試品溶液的制備：精密量取腺苷含量測定項下的供試品溶液10ml置碘瓶中，精密加入高碘酸鈉（鉀）溶液50ml，置水浴上加熱15分鐘，放冷，加碘化鉀試液10ml，密塞放置5分鐘，即得。4.3.6 空白試液的制備：精密量取高碘酸鈉（鉀）溶液50ml置碘瓶中，置水浴上加熱15分鐘，放冷，加碘化鉀試液10ml密塞放置5分鐘，即得。4.3.7 滴定：供試品溶液及空白試液用硫代硫酸鈉滴定液（0.02mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液1ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，每1ml硫代硫酸鈉滴定液（0.02mol/L）相當(dāng)于0.3643mg的C6H14O6。按干燥品計算含甘露醇類物質(zhì)以