獸醫(yī)生物制品學講義第十講

獸醫(yī)生物制品學講義第十講第一頁，共五十一頁，2022年，8月28日什么是免疫血清?動物在接受抗原刺激或自然感染康復后，其血清中通常含有針對特定抗原的高效價特異性抗體，該動物的血清即稱為免疫血清。又稱為高免血清、抗病血清。第十章免疫血清制備技術(shù)第二頁，共五十一頁，2022年，8月28日抗細菌血清主要包括抗病毒血清抗毒素血清第十章免疫血清制備技術(shù)第三頁，共五十一頁，2022年，8月28日是用于人工被動免疫的制劑1.動物感染病原后，使用免疫血清，就等于直接給動物輸入抗體，可以迅速中和病原或毒素，發(fā)揮良好的治療作用。第十章免疫血清制備技術(shù)第四頁，共五十一頁，2022年，8月28日2.免疫血清也可用于疾病的預防，提供短期的被動免疫。3.特異性免疫血清還可用于疫病診斷和微生物鑒定。第十章免疫血清制備技術(shù)第五頁，共五十一頁，2022年，8月28日一、免疫血清的制備過程通常是給適當動物以多次注射特定病原微生物或其代謝產(chǎn)物等抗原物質(zhì)，刺激動物發(fā)生免疫應答，在血清中產(chǎn)生大量的特異性抗體。第十章免疫血清制備技術(shù)第六頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、動物的選擇既可用同種動物，也可用異種動物！以抗病毒血清居多用同種動物制造的血清同源抗病血清抗菌性和用異種動物制造的血清異源抗病血清抗毒素血清為主常選擇大動物→主要是考慮出血量問題。第十章免疫血清制備技術(shù)第七頁，共五十一頁，2022年，8月28日（1）許多免疫血清是用馬制備的！優(yōu)點不受接種途徑、抗原量限制；飼養(yǎng)管理也比較方便；采血便利；產(chǎn)血清量多。第十章免疫血清制備技術(shù)第八頁，共五十一頁，2022年，8月28日馬匹的選擇①年輕：3~8歲②健康：來自非疫區(qū)

1、就地進行常規(guī)檢疫后運回隔離飼養(yǎng)、觀察

2、然后根據(jù)不同生產(chǎn)目的進行系統(tǒng)檢疫(馬鼻疽、馬傳染性貧血、馬流產(chǎn)等)，優(yōu)選出的馬匹經(jīng)消毒后轉(zhuǎn)入專用飼養(yǎng)舍飼養(yǎng)、生產(chǎn)。第十章免疫血清制備技術(shù)第九頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）也可用健壯閹牛制造1、飼養(yǎng)管理簡便；2、多選擇3～10歲的黃牛，并應隔離觀察檢疫(結(jié)核、牛肺疫、布病等)，證明完全健康后方可用于生產(chǎn)；3、但血清滲出率偏低。多用于抗氣腫疽、抗豬丹毒、抗豬牛出敗、抗牛瘟等血清的制備。第十章免疫血清制備技術(shù)第十頁，共五十一頁，2022年，8月28日（3）豬1、應選擇體壯、健康者；2、放血提取血清，不作循環(huán)采取血清方法；3、主要用于抗豬瘟血清生產(chǎn)。第十章免疫血清制備技術(shù)第十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日（4）羊、兔、雞等1、常用于制備診斷用高免血清；2、較少用于抗病血清生產(chǎn)。第十章免疫血清制備技術(shù)第十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、抗原的準備抗原是制備免疫血清的基礎優(yōu)良的菌/毒種則是制備優(yōu)良抗原的關(guān)鍵第十章免疫血清制備技術(shù)第十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日優(yōu)良菌/毒種的生物學特征應十分典型（形態(tài)、培養(yǎng)、生化和血清學等）強毒弱毒常用的菌/毒種有：滅活毒可單獨使用，可共同使用，也可交互使用，其目的是盡可能提高抗體效價。第十章免疫血清制備技術(shù)第十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日按照制備方法的不同免疫用抗原分為第十章免疫血清制備技術(shù)第十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日（1）組織毒抗原用健康、易感的本種動物人工感染增殖病原;根據(jù)微生物增殖規(guī)律，采集含毒高的組織制成活的或滅活的抗原液。如血液、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)和腦組織等第十章免疫血清制備技術(shù)第十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日細菌和病毒等微生物都可利用動物增殖！第十章免疫血清制備技術(shù)第十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日例如：抗豬瘟血清抗原制備①給健康、敏感、40~80kg豬注射豬瘟強毒1mL②于6~8d發(fā)病典型時(高溫、癥狀明顯)頸動脈放血③采血液、脾和淋巴結(jié)等，分別制成血液毒抗原和組織毒懸液抗原。第十章免疫血清制備技術(shù)第十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）雞胚毒抗原①可在雞胚增殖的微生物均適用②將種毒接種雞胚，收獲后經(jīng)檢驗合格即可作為免疫原。第十章免疫血清制備技術(shù)第十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日（3）細胞毒抗原①多種病毒均可通過細胞增殖；②將種毒接種細胞后培養(yǎng)增殖，然后根據(jù)不同病毒的增殖盛期收獲，經(jīng)檢驗合格后即可作為免疫原。③必要時可濃縮、提純，也可制成佐劑抗原。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十頁，共五十一頁，2022年，8月28日（4）培養(yǎng)物抗原細菌抗原幾乎都用培養(yǎng)物制造。①將菌種接種于規(guī)定的培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)，收獲后經(jīng)檢驗合格制成抗原。②也可于培養(yǎng)物內(nèi)加入佐劑制成佐劑抗原。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日3、免疫程序由于病原微生物的性質(zhì)、免疫機制的不同，各有其最佳的免疫程序。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、一般的免疫程序（1）如以強毒抗原為抗原基礎免疫時以滅活疫苗為抗原，然后以遞增量強毒抗原進行高度免疫。這種免疫程序通?？色@得高效價的抗血清如：抗氣腫疽血清、抗豬牛出敗血清等第十章免疫血清制備技術(shù)第二十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）如以滅活佐劑抗原免疫只需以遞增量抗原進行免疫，即可獲得高效價的抗血清。如：破傷風抗毒素血清等第十章免疫血清制備技術(shù)第二十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、免疫間隔和次數(shù)不同的免疫原，差異較大！如:抗豬丹毒血清全程免疫要注射抗原20次、100d左右抗豬瘟血清全程須注射抗原6次以上、50d左右第十章免疫血清制備技術(shù)第二十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日3、抗體效價測定1、常在免疫程序完成后采血進行抗體效價測定2、合格后方可采血提取血清然后按后期程序注射、采血，持續(xù)生產(chǎn)抗血清第十章免疫血清制備技術(shù)第二十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日4、血清提取包括：采血和血清分離第十章免疫血清制備技術(shù)第二十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日（1）采血①采血時間1、通常在最后一次免疫8~10d后測定抗體效價,合格后開始第1次采血。2、第1次采血后3~5d可進行第2次采血3、第2次采血后，經(jīng)3~5d天可再次注射抗原，如此循環(huán)進行。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日②采血量按動物每kg體重采取10mL左右注意：采血常在上午空腹時進行，前一晚上不喂精料，而僅給草料和水，避免血中出現(xiàn)乳糜第十章免疫血清制備技術(shù)第二十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）血清分離①自然凝結(jié)加壓法無菌操作采血后室溫靜置凝固；然后于血凝塊上加上滅菌的不銹鋼銘，將血塊壓下以析出血清。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十頁，共五十一頁，2022年，8月28日②枸櫞酸鹽血漿分離血清法以10％枸櫞酸鈉液為抗凝劑（3.5%）采血；靜置分層；按1000mL血漿加入30%CaCl21.3mL，混勻后靜置48h，去除纖維制成血清。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日5、質(zhì)量檢驗①物理性狀檢驗按成品檢驗的有關(guān)規(guī)定進行②無菌檢驗按各種抗血清規(guī)定方法、標準進行③效力檢驗④安全檢驗常用：18-22g健康小鼠2只,各皮下注射血清0.5mL250-450g健康豚鼠2只,各皮下注射血清10mL觀察10d均應健活第十章免疫血清制備技術(shù)第三十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日二、類毒素及抗毒素的制備某些病原微生物能產(chǎn)生強有力的特殊毒性物質(zhì)，從而大大增強病原的毒害作用，這種毒性物質(zhì)就稱為毒素。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日是微生物在生命活動過程外毒素中產(chǎn)生并釋放或分泌到周圍環(huán)境中的毒素。毒素只有在微生物死亡后細胞內(nèi)毒素破裂時，才能釋放出來的毒素。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日類毒素外毒素經(jīng)適量濃度的甲醛處理后，可去除其毒性，保持其抗原性；這種喪失了毒性而仍具有抗原性的外毒素，稱為類毒素。也稱為“

變性毒素

”

第十章免疫血清制備技術(shù)第三十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日抗毒素以類毒素作為抗原免疫動物，刺激機體相應的B細胞活化增殖為漿細胞后，產(chǎn)生的特異性抗體，稱為抗毒素?？苟舅乜商禺愋宰R別侵入機體的外毒素并中和其毒性，以保護機體免受毒害第十章免疫血清制備技術(shù)第三十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、類毒素的生產(chǎn)和檢定產(chǎn)毒素菌種產(chǎn)毒培養(yǎng)基培養(yǎng)毒素4~7d毒素脫毒毒素的檢定0.3~0.4％甲醛，37℃，20~30d如破傷風MLD應>2×106除去類毒素精制類毒素非特異性物質(zhì)適當佐劑吸附精制類毒素類毒素的檢定：安全試驗等;類毒素及吸附類毒素的檢定:吸附度試驗,安全試驗,效力試驗吸附類毒素的檢定第十章免疫血清制備技術(shù)第三十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、抗毒素血清的制備1、馬、騾、驢是比較適用的動物毒素或類毒素免疫動物2、基礎免疫和加強免疫抗毒素血清提純精制抗毒素抗毒素的質(zhì)量檢定[安全性試驗、熱原質(zhì)試驗、效價測定]第十章免疫血清制備技術(shù)第三十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日三、卵黃抗體的制備卵黃抗體，不能理解為抗卵黃的抗體，而是在卵黃中含有針對某種病原微生物的特異性抗體。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日目前，家禽病毒病是沒有特效藥物使用血清是一種很好的方法，但血清的價格比較高！第十章免疫血清制備技術(shù)第四十頁，共五十一頁，2022年，8月28日人們又尋求了另外一條途徑制備

高免卵黃抗體，并收到了良好的防治效果。第十章免疫血清制備技術(shù)第四十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日卵黃抗體液的制備過程以抗IBD的卵黃抗體液為例第十章免疫血清制備技術(shù)第四十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、動物的選擇同制備抗血清的要求一樣必須選擇健康無病的產(chǎn)前或開產(chǎn)雞群第十章免疫血清制備技術(shù)第四十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、疫苗的選擇很重要→獲得高效價抗體的關(guān)鍵通常選擇免疫原性優(yōu)良的油乳劑疫苗第十章免疫血清制備技術(shù)第四十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日3、免疫程序①第1次免疫：肌肉注射免疫，每只2mL，分點注射②第2次免疫：第1次免疫后10~14d，重復免疫1次③第3次免疫：第2次免疫后10~14d，再重復免疫1次第十章免疫血清制備技術(shù)第四十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日4、抗體監(jiān)測與高免蛋的收集1、第3次免疫后，以瓊脂擴散法測定卵黃中的抗體水平；2、在抗體效價達到1:128時，開始收集高免蛋,一般高免蛋合格時間大約可持續(xù)1個月。3、抗體效價降低到1:64時停止收蛋，并根據(jù)情況再進行1次加強免疫。第十章免疫