免疫檢驗(yàn)第十四章細(xì)胞因子的檢查優(yōu)秀課件

免疫檢驗(yàn)第十四章細(xì)胞因子的檢查第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日在免疫細(xì)胞分化發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、造血功能中均發(fā)揮重要作用，并參與人體多種生理和病理過程的發(fā)生和發(fā)展。細(xì)胞因子由活化的免疫細(xì)胞及部分基質(zhì)細(xì)胞分泌的、主要介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)的具有高活性、多功能的小分子蛋白質(zhì)。細(xì)胞粘附分子是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間粘附作用的膜表面糖蛋白。在胚胎的發(fā)育和分化、正常組織結(jié)構(gòu)的維持、炎癥與免疫應(yīng)答、傷口修復(fù)、凝血與血栓形成、腫瘤轉(zhuǎn)移等過程中具有重要作用。第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日一、細(xì)胞因子的共同特性與作用方式與相應(yīng)受體特異性結(jié)合才能發(fā)揮作用。細(xì)胞因子可以旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日CKs的共同特性1.高效性：靶細(xì)胞-受體；高親和力結(jié)合2.多效性：一CK多靶多效3.重疊性：多CK一靶一效4.協(xié)同性：一CK強(qiáng)化它CK5.拮抗性：一CK抑制它CK6.網(wǎng)絡(luò)性：多CK互相平衡第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日肥大細(xì)胞胸腺細(xì)胞BIL-4

多效性pleiotropy活化、增殖、分化增殖增殖第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5B細(xì)胞IL-4IFN-g

拮抗性antagonism

重疊性redundancy協(xié)同性synergy均有刺激B細(xì)胞增殖的功能更有效地誘導(dǎo)IgE類別轉(zhuǎn)換IFN-g阻斷IL-4誘導(dǎo)類別轉(zhuǎn)化的作用，IL-4抑制IFN-gBBB第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子與功能（一）TH1型細(xì)胞因子：介導(dǎo)細(xì)胞免疫

1.IFN-γ2.IL-123.IL-184.IL-2（二）TH2型細(xì)胞因子：介導(dǎo)體液免疫主要分泌IL-4、IL-5等（三）TH3型細(xì)胞因子：免疫調(diào)節(jié)與免疫抑制

1.TGF-:腫瘤早晚期

2.IL-10（四）TH17型細(xì)胞因子：介導(dǎo)炎癥反應(yīng)

1.IL-172.TNF3.IL-23

第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)趨化因子及趨化因子受體的特性與功能趨化因子：8～12kD已發(fā)現(xiàn)50余個(gè)成員根據(jù)結(jié)構(gòu)中C的位置、排列方式和數(shù)量,分C、CC、CXC、CXXXC四類。是細(xì)胞因子中唯一作用于G蛋白偶聯(lián)受體的超家族成員。由白細(xì)胞與造血微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞分泌，具有對中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的趨化和激活活性。第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日趨化因子的生物學(xué)特性1、趨化移行效應(yīng)：趨化單核細(xì)胞向炎癥部位移行2、不但能使免疫細(xì)胞向感染部位移行，也可促使天然免疫應(yīng)答向獲得性免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)變。3、趨化因子及其受體在T、B細(xì)胞的分化發(fā)育中起重要作用。4、不同極化的T淋巴細(xì)胞表達(dá)不同的趨化因子受體。第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日第三節(jié)細(xì)胞粘附分子與細(xì)胞粘附分子受體的特性與功能分類5、可溶性粘附分子1、整合素家族2、免疫球蛋白超家族3、選擇素家族4、鈣粘蛋白家族第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日整合素家族最初是因此類粘附分子主要介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附，使細(xì)胞得以附著而形成整體而得名。

1、整合素家族第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

免疫系統(tǒng)以及神經(jīng)系統(tǒng)和其它生物學(xué)系統(tǒng)中，許多參與抗原識別或細(xì)胞間相互作用的分子，具有與Ig相似的結(jié)構(gòu)特征，即具有1個(gè)或多個(gè)Ig樣或樣結(jié)構(gòu)域。這些種類繁多、分布廣泛、識別功能多樣的分子稱之為免疫球蛋白超家族。

2、免疫球蛋白超家族第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日選擇素家族最初被稱為外源凝集素細(xì)胞粘附分子家族（LEC-CAM家族）。3、選擇素家族第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日

鈣粘蛋白是一類鈣離子依賴的粘附分子家族。鈣粘蛋白在維持實(shí)體組織的形成以及在生長發(fā)育過程中細(xì)胞選擇性的相互聚集、重排有重要作用。4、鈣粘蛋白家族第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

一般只有胞外區(qū)，同樣具有粘附活性，檢測可溶性粘附分子的增高水平可作為監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的指標(biāo)。5、可溶性粘附分子第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日淋巴細(xì)胞活化的輔助信號分子介導(dǎo)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附介導(dǎo)淋巴細(xì)胞歸巢二、粘附分子的功能第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

輔助受體和輔助活化信號是指免疫細(xì)胞在接受抗原刺激的同時(shí)，還必須有輔助的受體接受輔助活化信號才能被活化。

最為常見的提供輔助刺激信號的T細(xì)胞上粘附分子結(jié)合抗原提呈細(xì)胞（APC）上相應(yīng)粘附分子有：CD4/MHCⅡ類分子、CD8/MHCⅠ類分子、CD28/CD80及CD86、CD2/CD58、LFA-1/ICAM-1等。T細(xì)胞識別APC細(xì)胞提呈的抗原后，如缺乏粘附分子提供的輔助刺激信號，則T細(xì)胞的應(yīng)答處于無能狀態(tài)。（一）淋巴細(xì)胞活化的輔助信號分子第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）介導(dǎo)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日淋巴細(xì)胞歸巢是淋巴細(xì)胞的定向游動(dòng)，包括淋巴干細(xì)胞向中樞淋巴器官歸巢，成熟淋巴細(xì)胞向外周淋巴器官歸巢，繼而經(jīng)淋巴管、胸導(dǎo)管進(jìn)入血液進(jìn)行淋巴細(xì)胞再循環(huán)，以及淋巴細(xì)胞向炎癥部位滲出。（三）介導(dǎo)淋巴細(xì)胞歸巢第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日第四節(jié)臨床常用的測定方法生物學(xué)測定法免疫學(xué)測定法第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

1.基于DNA檢測的分子生物學(xué)測定法：

DNA擴(kuò)增法

RNA印跡法原位雜交法核酸酶保護(hù)分析

2.生物活性測定法

生物學(xué)測定法分類第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日根據(jù)細(xì)胞因子特定的生物學(xué)活性,應(yīng)用相應(yīng)的指示系統(tǒng),同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)品對比測定,從而得知樣品中細(xì)胞因子的活性水平,一般以活性單位(U/ml)表示生物活性測定法原理有助于細(xì)胞因子檢測的活性作用包括有助于細(xì)胞因子檢測的活性作用刺激細(xì)胞增殖或集落形成的活性維持細(xì)胞生長和存活的特性抑制細(xì)胞生長或破壞細(xì)胞的效應(yīng)促進(jìn)細(xì)胞趨化或抗病毒作用第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日敏感性較高特異性不高操作繁瑣易受干擾生物學(xué)活性測定方法學(xué)評價(jià)第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日免疫學(xué)測定法ELISA流式細(xì)胞分析法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（enzymelinkedimmunospot,ELISPOT）第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日1.雙抗體夾心法2.雙位點(diǎn)一步法一、ELISA方法標(biāo)本：1.血清、血漿、關(guān)節(jié)液、胸腔液、腦脊液、腹腔液2.細(xì)胞體外培養(yǎng)后的培養(yǎng)上清液第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日敏感性偏低不能判斷細(xì)胞因子的生物學(xué)活性。ELISA特異、簡便易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)可同時(shí)檢測大量標(biāo)本且試驗(yàn)廢棄物便于處理細(xì)胞因子測定的首選方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、流式細(xì)胞分析法1．分離和培養(yǎng)待檢細(xì)胞2．細(xì)胞固定、破膜3．封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)4．染色與分析基本步驟細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的測定：第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日細(xì)胞表面的粘附分子或細(xì)胞因子受體？區(qū)分不同分泌特性的細(xì)胞亞群：

Th1細(xì)胞IFN-γTh2細(xì)胞IL-4

第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(enzymelinkedimmunospot,ELISPOT)第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日1個(gè)斑點(diǎn)代表1個(gè)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞，斑點(diǎn)的顏色深淺程度與細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子量相關(guān)?；驹鞥LISPOT第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日ELISPOT方法學(xué)評價(jià)優(yōu)點(diǎn)：特異性高操作簡便、快速，無需依賴細(xì)胞株影響因素較少且易控制，重復(fù)性好，方法容易標(biāo)準(zhǔn)化。缺點(diǎn)：所測定的只是細(xì)胞因子的蛋白含量，與其生物活性不一定呈正比結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關(guān)系敏感性相對較低標(biāo)本中細(xì)胞因子的可溶性受體，會(huì)影響特異性抗體對細(xì)胞因子的結(jié)合第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日四、其他檢測技術(shù)偏振熒光檢測技術(shù)激光共聚焦顯微鏡發(fā)光技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日第五節(jié)

細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附分子測定的臨床應(yīng)用細(xì)胞因子的測定主要應(yīng)用于：特定疾病的輔助診斷機(jī)體免疫狀態(tài)的評估臨床疾病治療效果的監(jiān)測和指導(dǎo)用藥疾病預(yù)防第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日一、臨床應(yīng)用原則

細(xì)胞因子和粘附分子的異質(zhì)性、功能交叉性和多樣性、來源的復(fù)雜性和組織細(xì)胞的非特異性，決定了在進(jìn)行這些分子檢測時(shí)，必須對方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮。第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日細(xì)胞因子的檢測方法多種多樣，各有利弊。高敏感性方法：特異性的降低、廢棄物難處理活性測定方法：定性試驗(yàn)基因分析法：利于細(xì)胞內(nèi)定位分析、操作煩瑣（一）方法的聯(lián)合應(yīng)用第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日常用臨床標(biāo)本：抗凝全血并分離獲得單個(gè)核細(xì)胞。血清或血漿炎癥局部細(xì)胞因子的水平：局部分泌液細(xì)胞因子或粘附分子的細(xì)胞內(nèi)定位檢測：相應(yīng)細(xì)胞相應(yīng)細(xì)胞因子的基因和mRNA表達(dá)：相應(yīng)細(xì)胞療效觀察和預(yù)后判斷：疾病急性期和恢復(fù)期雙份標(biāo)本進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀測免疫熒光染色和流式細(xì)胞分析：注意待檢細(xì)胞的活性和狀態(tài)，以保證結(jié)果的特異性（二）標(biāo)本的適當(dāng)選取第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日意義：舉例：

T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的功能：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2細(xì)胞平衡狀態(tài)：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ（三）細(xì)胞因子的聯(lián)合檢測第三十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、特定疾病診斷的輔助指標(biāo)（一）細(xì)胞因子檢測在特定疾病診斷中的意義感染性疾病、免疫炎癥、移植排斥反應(yīng)：TNF、IL-1、IL-6、IFN-γ肝臟損傷的兩種炎癥介質(zhì)：TNF、IL-6活動(dòng)性結(jié)核：IL-4↑，IFN-γ及IL-2↓結(jié)核性胸膜炎：

IFN-γ及IL-2↑,IL-4↓類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎：TNF、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1↑潰瘍性結(jié)腸炎：IL-15↑哮喘：IL-5↑第三十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日（二）粘附分子檢測在特定疾病診斷中的意義E-鈣粘素：表達(dá)缺失，提示胃腺癌及其分化程度的早期輔助診斷；突變與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)。CD44：高表達(dá)，提示腫瘤轉(zhuǎn)移第四十頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、評估機(jī)體的免疫狀態(tài)、判斷治療效果及預(yù)后TNF-α：自身免疫性疾病GM-CSF：血液病IFN-γ：腫瘤。

第四十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日1．細(xì)胞因子和細(xì)胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類？2．細(xì)胞因子生物活性測定法的種類，各用于哪些細(xì)胞因子的檢測，主要優(yōu)缺點(diǎn)？3．ELISPOT的原理、用途、與ELISA的異