基因工程載體噬菌體載體XXXX

2012.09第二節(jié)噬菌體載體

2噬菌體載體（phagevectors）一、噬菌體載體二、單鏈?zhǔn)删w載體三、噬菌粒載體四、柯斯質(zhì)粒載體一、噬菌體載體噬菌體是一類細(xì)菌病毒（Bacteriophage）（一）噬菌體的一般特性結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)外殼內(nèi)包裹著DNA（雙鏈、單鏈、線性、環(huán)狀等）。T4Bacteriophage71.噬菌體的生物學(xué)特性溶菌周期指噬菌體將DNA注入寄主細(xì)胞后很快環(huán)化，然后進(jìn)行自我復(fù)制、蛋白衣殼合成和新噬菌體顆粒的組裝，最后使寄主細(xì)胞破裂而釋放出大量的子代噬菌體。溶源周期中，注入寄主細(xì)胞的噬菌體DNA是整合到寄主細(xì)胞染色體上并可以隨著寄主細(xì)胞的分裂而進(jìn)行復(fù)制。整合了一套完整的噬菌體基因組的細(xì)菌被稱為溶源性細(xì)菌。在溶源性細(xì)菌內(nèi)存在的整合或非整合的噬菌體DNA被稱為原噬菌體。噬菌體溫和噬菌體，具有溶源生長(zhǎng)周期和溶菌生長(zhǎng)周期烈性噬菌體,只具有溶菌生長(zhǎng)周期分為兩種：（1）溶菌周期：噬菌體的生活周期烈性噬菌體（virulentphage)（2）溶原周期：感染細(xì)菌后，將自己的DNA整合到細(xì)菌的染色體DNA中。形成這一過(guò)程稱為溶源化溫和噬菌體（temperatephage)2、噬菌體的的結(jié)構(gòu)和和其核酸酸類型：結(jié)構(gòu)：無(wú)尾部結(jié)結(jié)構(gòu)的二二十面體體型、具尾部結(jié)結(jié)構(gòu)的二二十面體體型、線狀體型型核酸類型型：最常常見(jiàn)的是是雙鏈線線性DNA、雙鏈環(huán)形形DNA、單鏈環(huán)形形DNA、單鏈線形形DNA、單鏈RNA。3、λ-DNA的物理理圖譜λ-DNA為線線狀雙鏈鏈DNA分子，，兩端各各有一個(gè)個(gè)12核核苷酸的的互補(bǔ)單單鏈（粘粘性末端端）GGGCGGCGACCT,CCCGCCGCTGGA，稱稱為cos區(qū)，，全長(zhǎng)48.5kb。。特點(diǎn)是功功能相近近的基因因在基因因組中聚聚集在一一起。λ噬菌體體組成特點(diǎn)點(diǎn)：雙鏈線狀狀DNA分子，，全長(zhǎng)50kb，，含65個(gè)個(gè)基因，，在其分子子兩端各各含有12個(gè)堿堿基的互互補(bǔ)單鏈鏈，是天天然的粘粘性末端端，被稱稱為COS位點(diǎn)點(diǎn)。λ噬菌體體感染細(xì)細(xì)菌后的的溶菌性性生長(zhǎng)和和溶源性性生長(zhǎng)溶菌性生生長(zhǎng)（lyticpathway）噬菌體感感染細(xì)菌菌后，借借助其2個(gè)COS位點(diǎn)點(diǎn)互補(bǔ)成成環(huán)，在在宿主菌菌體內(nèi)連連續(xù)復(fù)制制，合成成大量基基因產(chǎn)物物，進(jìn)而而裝配成成噬菌體體顆粒，，裂解宿宿主菌，，釋放出出來(lái)的噬噬菌體又又可感染染其他細(xì)細(xì)菌。溶源性生生長(zhǎng)(lysogenicpathway)噬菌體感感染細(xì)菌菌后，可可將自身身DNA整合到到細(xì)菌的的染色體體中去，，與之一一起復(fù)制制，并遺遺傳給子子代細(xì)胞胞，宿主主細(xì)胞不不被裂解解。噬菌體AWBDEFZJattxisNclcroOPQSR結(jié)構(gòu)區(qū)重組區(qū)調(diào)控區(qū)裂解區(qū)cos位位點(diǎn)cos位點(diǎn)ARAREcoRI目的基因因EcoRIEcoRI插入型置換型AWBCDEFZUVGHMLKIJb2cIcrocIIOPQSRattintxisgamredcIIINCOSCOS頭部基因因尾尾部基因因功功能不不明區(qū)溶源化重重組早早期期控制阻阻遏遏DNA合成溶溶菌生長(zhǎng)非必必須區(qū)段段cI基因因：溶源源過(guò)程控控制基因因。λ噬菌體體的基因因組結(jié)構(gòu)構(gòu)5‘-CGGGGCGGCGACCTCG-3’’3’-GCCCCGCCGCTGGAGC-5’’CleavageLigation(duringpackaging)(afterinfection)GGGCGGGCGACCTCG-3’5’-CG+GC-5’’3’-GCCCCGCCGCTGGAThephagecosendsCircularformLinearform（二）λλ噬菌體體載體的的主要類類型（1）插入式載載體一種只具具有一個(gè)個(gè)可供外外源DNA插入入的克隆隆位點(diǎn)的的派派生載載體。（2）替替換型型載體（（取代型型載體））具有成對(duì)對(duì)的克隆隆位點(diǎn)，，在這兩兩個(gè)位位點(diǎn)之間間的λDNA區(qū)段可可以被外外源插入入的DNA片段段所取代代。（3）凱凱倫倫噬菌體體載體（2）λλ替換換型載體體（取代代型載體體）外源DNA取代代噬菌體體染色體體中對(duì)于于噬菌體體的感染染和復(fù)制制非必要要的片段段(~20kb)高感染效效率(109轉(zhuǎn)化株/ug載載體DNA,比比質(zhì)粒高高100-倍)e.g.EMBL3,DASH替換式載載體野生型噬噬菌體染染色體的的中段對(duì)對(duì)于噬菌菌體的感感染和復(fù)復(fù)制是非非必要的的，外源源DNA可以取取代這一一片段，，例如Charon4A、、λEMBL3/4、、Charon40等等載體，，這些載載體是用用Lac5（（乳糖操操縱子的的大部分分系列，，包括完完整的LacZ）替替換入噬噬菌體的的中間區(qū)區(qū)段，同同時(shí)將Lac5作為為選擇標(biāo)標(biāo)記，使使用時(shí)用用EcoRI水水解，去去掉中間間的片段段，再與與欲克隆隆片段在在體外進(jìn)進(jìn)行重組組、包裝裝。而后后，感染染E.coli使之在E.coli內(nèi)繁殖，，并裂解解E.coli，形成空空斑。換型噬菌菌體λ是是使用最最廣泛的的載體。。（3）凱凱倫噬菌菌體載體體既有插入入型；又又有替換換型在基因工工程實(shí)驗(yàn)驗(yàn)中的用用途十分分廣泛承受外源源DNA的能力力：幾個(gè)個(gè)kb到到23kb（左右臂臂連接））（（三段段自身連連接）（（插入片片段）（三）體體外包裝裝λ噬菌體體DNA體外重重組后，，一般必必須經(jīng)過(guò)過(guò)體外包包裝，然然后以噬噬菌體感感染的方方式將重重組DNA導(dǎo)入入E.coli細(xì)胞內(nèi)。。這是因因?yàn)橐愿懈腥痉绞绞綄?dǎo)入細(xì)細(xì)胞的頻頻率可達(dá)達(dá)106~108/μgDNA，，而以轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染（translation）的的方式導(dǎo)導(dǎo)入的頻頻率僅為為103~105/μgDNA。λ噬菌體體的包裝裝限制為為野生噬噬菌體DNA（（約48.5kb））的75%~105%。由于λ噬菌體包裝時(shí)，當(dāng)DNA的長(zhǎng)度短于野生型的78%或超過(guò)105%時(shí)，噬菌體的活性就急劇下降。因此只包裝它的野生型DNA（48.5KB）的75%~105%左右的ＤＮＡ，要求λ載體DNA和外源DNA長(zhǎng)度之和在39～53kb之間。插入式載體可攜帶的外源ＤＮＡ片段較替換式為小。

◆λ噬噬菌體載載體可接接受15kb-23kb的外源源DNA片段，，它既可可作為克克隆載體體，也可可作為表表達(dá)載體體，廣泛泛用于各各類基因因庫(kù)的構(gòu)構(gòu)建。篩選標(biāo)記記：藍(lán)白斑(LacZ)、噬菌斑等。重組噬菌菌體的分子量量必須在在野生型噬噬菌體分子量大大小的75%至105%之間。用途：b.用于構(gòu)建建基因組組或cDNA文文庫(kù)。c.用于抗抗體庫(kù)庫(kù)或隨隨機(jī)肽肽庫(kù)的的構(gòu)建建。a.用作一一般的的克隆隆載體體。（四））λλ-DNA的抽抽提大腸桿桿菌培培養(yǎng)至至對(duì)數(shù)數(shù)生長(zhǎng)長(zhǎng)期2)加加入入λ-噬菌菌體或或重組組λ-噬菌菌體懸懸浮液液，37℃℃培養(yǎng)養(yǎng)1hr3)用用新新鮮培培養(yǎng)稀稀釋，，繼續(xù)續(xù)培養(yǎng)養(yǎng)4-12hr4)高速離離心，沉淀噬噬菌體5)苯酚抽抽提，釋放λλ-DNA6)乙醇或或異丙醇沉淀淀DNA（五）λ-DNA作為載載體的優(yōu)點(diǎn)體外包裝病毒毒顆粒，高效效感染E.coli2)裝載外外源能力為25kb，大大于質(zhì)粒3)篩選方方便4)重組λλ-DNA分分子提取容易易二、、單鏈鏈?zhǔn)墒删w體載載體體（一一））單鏈鏈?zhǔn)墒删w體載載體體M13、f1、fd噬菌菌體體單鏈鏈環(huán)環(huán)狀狀DNA的絲絲狀狀大大腸腸桿桿菌菌噬噬菌菌體體：：M13噬菌菌體體單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體載載體體M13、、f1、、fd。。優(yōu)越越性性：：1.單單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體的的復(fù)復(fù)制制，，是是以以雙雙鏈鏈環(huán)環(huán)形形的的DNA為為媒媒介介的的，，這這種種復(fù)復(fù)制制形形式式的的DNA簡(jiǎn)簡(jiǎn)稱稱RFDNA；；2.不不論論是是RFDNA還還是是ssDNA都都能能感感染染大大腸腸桿桿菌菌；；3.單單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體顆顆粒粒的的大大小小，，是是受受其其DNA的的多多制制約約的的，，不不存存在在包包裝裝限限制制問(wèn)問(wèn)題題；；4.容容易易測(cè)測(cè)定定外外源源DNA片片斷斷的的插插入入取取向向；；5.可可產(chǎn)產(chǎn)生生含含外外源源片片斷斷的的單單鏈鏈DNA分分子子。。3.M13噬噬菌菌體體噬菌菌體體正鏈鏈復(fù)制制復(fù)制制型型DNA經(jīng)pII蛋蛋白白造缺缺口口3′′5′′經(jīng)pII蛋白白剪切切釋出出單單鏈鏈DNA(正鏈鏈)進(jìn)入入下下一循循環(huán)環(huán)5′′3′′3′′5′′滾環(huán)環(huán)復(fù)復(fù)制制在細(xì)細(xì)菌菌內(nèi)內(nèi)的的復(fù)復(fù)制制模模式式圖圖M13噬噬菌菌體體幾幾個(gè)個(gè)重重要要特特點(diǎn)點(diǎn)：1.M13噬噬菌菌體體不溶溶解解宿主細(xì)胞胞，只是是降低宿主細(xì)胞胞的生長(zhǎng)長(zhǎng)速度。。2.M13噬菌體體能以單鏈和雙鏈兩種方式式存在，，因此可可以用感染(經(jīng)包裝裝的單鏈鏈DNA)和轉(zhuǎn)化(雙鏈DNA)。3.克克隆的外外源基因因片段不不宜大于于1000bp。M13噬噬菌體載載體M13是一一種含單單鍵（+）DNA（ssDNA）的的絲狀大大腸桿菌菌噬菌體體，其基基因組大大小為6.4kb。這這類載體體主要用用來(lái)獲得得大量的的單鏈ＤＤＮＡ片片段，這這種單鏈鏈ＤＮＡＡ片段在在遺傳學(xué)學(xué)研究中中主要用用來(lái)測(cè)定定ＤＮＡＡ序列（（sanger雙脫氧氧法）、、基因的的定點(diǎn)突突變研究究、異源源雙鏈DNA的的分析等等。M13噬噬菌菌體體的的特特點(diǎn)點(diǎn)感染染Ecoli后，，在在宿宿主主細(xì)細(xì)胞胞內(nèi)內(nèi)會(huì)會(huì)形形成成雙雙鏈鏈的的復(fù)復(fù)制制型型ＤＤＮＮＡＡ（（replicationformDNA,RFDNA））。。可可以以象象質(zhì)質(zhì)粒粒ＤＤＮＮＡＡ那那樣樣在在體體外外進(jìn)進(jìn)行行純純化化和和操操作作。。成熟熟的的噬噬菌菌體體顆顆粒粒僅僅能能感感染染E.coli的F+細(xì)胞胞，，這這是是因因?yàn)闉檫@這種種噬噬菌菌體體的的感感染染位位點(diǎn)點(diǎn)在在性性散散毛毛上上。。但但是是無(wú)無(wú)論論是是RFDNA或或ssDNA都都能能轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染染E.coli的F+或F-細(xì)胞胞。。噬菌菌體體顆顆粒粒的的大大小小是是受受其其ＤＤＮＮＡＡ的的大大小小制制約約的的，，這這一一點(diǎn)點(diǎn)正正好好與與λλ噬噬菌菌體體相相反反。。所所以以M13噬噬菌菌體體并并不不存存在在包包裝裝限限制制的的問(wèn)問(wèn)題題。。M13單單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體的的生生命命周周期期RFDNAPhageM13replicationinthehostcell:+RNApolDNApolIII±RFNickedbygene2protein+ss-Rollingcirclereplication,thencutandligateCoatedwithgene5proteinGene5proteinisreplacedbygene8proteinect.LinearM13phagereleasedfromthecell.（二）M13載體體的構(gòu)建（1）克隆隆區(qū)域的選選定①基因間間隔區(qū)（intergenicregion,IG區(qū)））J.Messing證明，，IG區(qū)存存在M13的復(fù)制起點(diǎn)，但可以插插入外源DNA而不不影響M13噬菌體體的活力。。在IG區(qū)內(nèi)內(nèi)插入一個(gè)個(gè)大腸桿菌菌的LacZ’’（-肽序列)。利用-肽序列中中的三個(gè)單單一酶切位位點(diǎn)（BglII、AvaII和和PvuI））。(2)加入入酶切位點(diǎn)點(diǎn)①在IG區(qū)內(nèi)加入入單一內(nèi)切切酶位點(diǎn)第一個(gè)M13載體：：M13mp1：M13RFBsuI不完全消化化各種長(zhǎng)度的的線性片斷斷（其中應(yīng)有有只在IG上切開(kāi)的的線性全長(zhǎng)長(zhǎng)M13））E.colilac基因的HindII片斷(lacI、lacP、lacO、lacZ’’）連接M13mp1JM101宿主只有在IG區(qū)插入lacZ’’才能存活并并在Xgal上出現(xiàn)互補(bǔ)補(bǔ)的藍(lán)噬菌菌斑（三）M13系列列載體的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)1）有MCS，，便于克隆隆不同的酶酶切片段2）Xgal顯色反反應(yīng)，可供供直接選擇擇3）無(wú)包裝裝限制，克克隆能力大大4）可以克克隆雙鏈DNA分子子中的每一一條鏈子代M13噬菌體中中包含的是是單鏈+DNA。（四）M13噬菌體體用途：1）DNA序列列測(cè)定；2）制制備單鏈DNA探針針；3）用用于定點(diǎn)突突變的研究究。M13載體體具有多克隆隆位點(diǎn)(MCS)，，方便克隆隆。許多M13載體體的多克隆隆位點(diǎn)與質(zhì)質(zhì)粒載體pUC序列列的多克隆隆位點(diǎn)是相相同的，在在克隆位點(diǎn)點(diǎn)選擇上更更為方便。?？梢远ㄏ虻氐乜寺NA片段，，克隆在M13RFDNA分子上上的雙鏈DNA片段段，到了子子代噬菌體體便成了單單鏈的形式式。所以如如果要同時(shí)時(shí)分離ＤＮＮＡ分子中中的雙鏈，，則需要兩兩種獨(dú)立的的克隆。根根據(jù)M13的生物學(xué)學(xué)特性知道道，M13子代噬菌菌體中總是是只含有（（＋）鏈，，所以M13載體克克隆的外源源DNA片片段在子代代噬菌體中中究竟是含含有DNA分子中的的哪條鏈，，則完全取取決于外源源ＤＮＡ克克隆時(shí)的取取向。這樣樣一來(lái)，為為分別分離離外源ＤＮＮＡ分子的的兩條鏈帶帶來(lái)一定的的麻煩，解解決這一問(wèn)問(wèn)題的一個(gè)個(gè)行之有效效的方法就就是定向克克隆技術(shù)。。M13克隆載載體分子結(jié)構(gòu)構(gòu)圖三、噬菌粒載載體噬菌粒載體由質(zhì)粒載體和和單鏈?zhǔn)删w體載體結(jié)合而而成的新型的的載體系列。。它具有質(zhì)粒的的復(fù)制起點(diǎn)、、選擇性標(biāo)記記、多克隆位位點(diǎn)等，方便便DNA的操操作，可在細(xì)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存存在；又具有有單鏈?zhǔn)删w體的復(fù)制起點(diǎn)點(diǎn)，在輔助噬噬菌體的存在在下，可進(jìn)行行噬菌體的繁繁殖，產(chǎn)生單單鏈的子代噬噬菌體。噬菌粒載載體（phagemidvectors）由質(zhì)粒載體體與單鏈?zhǔn)删w載體體的復(fù)制起起點(diǎn)結(jié)合合而成的的新型載載體系列列。MCS噬菌體ori質(zhì)粒oriAmprlacZ’lacI約3000bp（比M13小?。诳寺∧苣芰Υ竽懿迦?0kb的外源源DNA。③兩種復(fù)復(fù)制形式式①分子量量小1、噬菌菌粒載體體的特點(diǎn)點(diǎn)既具有質(zhì)質(zhì)粒的復(fù)復(fù)制起點(diǎn)點(diǎn)，又具具有噬菌菌體的復(fù)復(fù)制起點(diǎn)點(diǎn)。既能在大大腸桿菌菌中以質(zhì)質(zhì)粒的形形式雙鏈鏈復(fù)制，，又能在在噬菌體體內(nèi)進(jìn)行行單鏈復(fù)復(fù)制。常用的噬噬菌粒載載體pUC118和pUC1191.具具有較小小分子量量的共價(jià)價(jià)、閉合合、環(huán)形形的基因因組DNA，可可克隆10kb的外源源DNA片段，，并易于于進(jìn)行分分離與操操作；2.編編碼一個(gè)個(gè)ampr基因作為為選擇記記號(hào)，因因此只有有攜帶pUC118或或pUC119噬菌粒粒載體的的大腸桿桿菌轉(zhuǎn)化化子細(xì)胞胞，才能能夠在含含有氨芐芐青霉素素的培養(yǎng)養(yǎng)基中生生長(zhǎng)，便便于轉(zhuǎn)化化子的選選擇；3.拷拷貝數(shù)含含量高，，每個(gè)寄寄主可高高達(dá)500個(gè)，，所以只只要用少少量的大大腸桿菌菌細(xì)胞培培養(yǎng)物，，便可制制備出大大量的載載體DNA；4.存存在著一一個(gè)多克克隆位點(diǎn)點(diǎn)區(qū)，因因此許多多種不同同類型的的外源DNA片片段，不不經(jīng)修飾飾便可直直接插入入到載體體分子上上；5.由由于多克克隆位點(diǎn)點(diǎn)區(qū)阻斷斷了大腸腸桿菌lacZ基因的的5’-端編碼碼區(qū)，可可按照IPTG組織化化學(xué)顯色色反應(yīng)試試驗(yàn)，篩篩選重組組子；6.lacZ基因是是置于lac啟啟動(dòng)子的的控制之之下，這這樣插入入的外源源基因便便會(huì)以融融合蛋白白質(zhì)的形形式表達(dá)達(dá)；7.含含有質(zhì)粒粒的復(fù)制制起點(diǎn)，，在沒(méi)有有輔助噬噬菌體的的情況下下，克隆隆的外源源基因可可以像質(zhì)質(zhì)粒一樣樣按常規(guī)規(guī)的方式式，復(fù)制制形成大大量的雙雙鏈DNA分子子8.帶帶有一個(gè)個(gè)M13噬菌體體的復(fù)制制起點(diǎn)，，在有輔輔助噬菌菌體感染染的寄主主細(xì)胞中中，可以以合成出出單DNA拷貝貝，并包包裝成噬噬菌體顆顆分泌到到培養(yǎng)基基中；9.在在pUC118和pUC119這兩兩個(gè)載體體中，多多克隆位位點(diǎn)區(qū)的的核苷酸酸序列取取向是彼彼此相反反的，于于是它們們當(dāng)中的的一個(gè)可可轉(zhuǎn)錄克克隆基因因的正鏈鏈DNA，另一一個(gè)則可可轉(zhuǎn)錄出出負(fù)鏈DNA；；10.可可以直直接對(duì)克克隆的DNA片片斷進(jìn)行行核苷酸酸的序列列測(cè)定，，免去了了從質(zhì)粒粒載體到到噬菌體體的這一一煩瑣的的亞克隆隆步驟。。pBluescript噬菌菌粒載體基本結(jié)構(gòu)：：1.在多多克隆位點(diǎn)點(diǎn)的兩側(cè)，，有一對(duì)T3和T7噬菌體的的啟動(dòng)子，，可以定向向指導(dǎo)外源源基因的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄活動(dòng)；；2.同同時(shí)具有一一個(gè)單鏈?zhǔn)墒删wM13或f1的復(fù)制起起點(diǎn)和一個(gè)個(gè)來(lái)自ColE1質(zhì)質(zhì)粒的復(fù)制制起點(diǎn)，在在不同的情情況下，可可以采取不不同的復(fù)制制形式，分分別合成單單鏈或雙鏈鏈的DNA；3.編編碼有一個(gè)個(gè)胺芐青霉霉素抗性基基因，供作作轉(zhuǎn)化子記記號(hào)；4.含有l(wèi)acZ基基因，可用用Xgal-IPTG組織顯顯色反應(yīng)法法篩選噬菌菌粒載體。。T7T3用于體外轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄3PCR產(chǎn)物物克隆載體體T載體體pCR系列列載體Invitrogen公司開(kāi)開(kāi)發(fā)的線性噬菌粒載體體。①結(jié)構(gòu)pUC的質(zhì)質(zhì)粒部分、、fi噬菌菌體ori、Kanr和Ampr抗性。MCS的中中部已經(jīng)切切開(kāi)，各有有一個(gè)3’’端突出的的T。②特點(diǎn)PCR產(chǎn)物物往往在3’端突出出一個(gè)A，，所以能與與這個(gè)載體體直接連接接。Tvector的克隆過(guò)程程——簡(jiǎn)便！AATTTvectorPCRproductT4DNAligaseAA四、柯斯質(zhì)質(zhì)粒載體柯斯質(zhì)粒(cosmid)一種人工構(gòu)構(gòu)建的克隆隆載體，包包含了λ噬噬菌體的cos基因因?？滤官|(zhì)質(zhì)粒能被包包裝到λ噬噬菌體粒子子中，感染染大腸桿菌菌；它攜帶帶入宿主細(xì)細(xì)菌的DNA片段（（超過(guò)45kb）要要比質(zhì)粒載載體攜帶的的要大（一）粘粒粒(cosmid)組成：2.抗抗性基因；；1.質(zhì)質(zhì)粒復(fù)制的的起始位點(diǎn)點(diǎn)(ORI)；3.用用于插入目目的基因的的單個(gè)酶切切位點(diǎn)；4.噬菌體的cos位點(diǎn)點(diǎn)?？梢?jiàn)，cosmid是由質(zhì)粒和和噬菌體的cos位點(diǎn)點(diǎn)構(gòu)建而成。。與噬菌體載載體和質(zhì)粒粒載體相比比具有多個(gè)個(gè)優(yōu)點(diǎn)：（1）具有有cos位位點(diǎn)，能高高效地轉(zhuǎn)化化大腸桿菌菌，能在大大腸桿菌中中實(shí)現(xiàn)自身身環(huán)化，并并能在大腸腸桿菌中復(fù)復(fù)制；（2）有像像質(zhì)粒一樣樣的選擇標(biāo)標(biāo)記；（3）cosmid載體比較較小，但能能插入較大大的外源片片段，可克克隆外源片片段的長(zhǎng)度度在15~45kb之間。。由于cosmid載載體的大片片段克隆能能力，多用用于基因組組文庫(kù)的構(gòu)構(gòu)建，而λλ噬菌體載載體多用于于cDNA文庫(kù)的構(gòu)構(gòu)建。已有有多種粘粒粒載體可用用于基因克克隆，pJB8是最最常用的粘粘粒載體之之一（4)多多種單一酶酶切位點(diǎn)，，便于克隆隆1、粘粒載載體的優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)柯斯質(zhì)粒載載體的特點(diǎn)點(diǎn)具有λ噬菌菌體的特性性；具有質(zhì)粒載載體的特性性；具有較高容容量的克隆隆能力；具有與同源源性序列的的質(zhì)粒進(jìn)行行重組的能能力特點(diǎn)：可插入長(zhǎng)達(dá)達(dá)27～41kb的外源基因因，方便地地用于克隆大片段段DNA。加入噬菌體頭部和尾部部蛋白，可可將粘粒包裝成成類似于噬菌體的具感染能能力的顆粒粒，方便地地進(jìn)入大腸腸桿菌。粘粒進(jìn)入細(xì)細(xì)菌后則完完全失去噬菌體的功能能，而而表現(xiàn)現(xiàn)質(zhì)粒的特性性?？滤官|(zhì)質(zhì)粒載載體cosmid載載體：也稱稱粘粒粒、柯柯斯載載體。。這是是一類類用于于克隆隆大片片段DNA的載載體，，它是是由λλ噬菌菌體的的cos（（cohesive）末末端及及質(zhì)粒粒（plasmid）重重組而而成的的載體體。cosmid載載體帶帶有質(zhì)質(zhì)粒的的復(fù)制制起點(diǎn)點(diǎn)、克克隆位位點(diǎn)、、選擇擇性標(biāo)標(biāo)記以以及λλ噬菌菌體用用于包包裝的的cos末末端等等，因因此該該載