微生物實(shí)驗(yàn)答案整理

在進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，是否只要滅菌鍋壓力表到達(dá)所需的值時(shí)鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？不是。滅菌溫度是通過(guò)水和水蒸汽的壓力提高鍋內(nèi)溫度實(shí)現(xiàn)的；當(dāng)滅菌鍋內(nèi)的空氣未排凈或僅排出一半時(shí)，雖然壓力表指示的數(shù)值與排盡空氣時(shí)相同，但不能、滿(mǎn)足水蒸汽—溫度函數(shù)關(guān)系，所以鍋內(nèi)溫度并未達(dá)到所需值。在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？部件：排氣閥、安全閥和壓力表。作用：排氣閥：點(diǎn)燃煤氣燈，在水煮沸后，排出鍋內(nèi)空氣以蒸汽代替，及滅菌后，壓力降至表頭零壓后打開(kāi)排氣閥，消除鍋體內(nèi)外壓力差。安全閥：正常情況下，當(dāng)壓力超值時(shí)會(huì)自動(dòng)放汽而降壓與避險(xiǎn)。壓力表：指示壓力顯示。高壓蒸汽滅菌過(guò)的操作有哪幾個(gè)步驟？每一步驟應(yīng)注意哪些問(wèn)題？步驟：加水、裝料、加蓋、排氣、升壓、保壓、降壓、取料和滅菌后處理。注意：加水：在放入滅菌料桶前，加水至與隔架圈同樣高度為止。若鍋體內(nèi)無(wú)水或水量不夠均會(huì)在滅菌時(shí)引起重大事故。裝料：放置裝有培養(yǎng)基的器皿時(shí)，防止其內(nèi)液體傾倒或溢出。瓶塞不應(yīng)貼靠料桶壁，以防鍋體降壓時(shí)產(chǎn)生的冷凝水沾濕棉塞，或滲透棉塞進(jìn)入培養(yǎng)基等滅菌物品中。加蓋：采用對(duì)角方式同時(shí)兩兩擰緊鍋體與鍋蓋間的螺栓，使六只螺栓擰緊的鍋蓋各方受力均衡并使鍋體完全密閉。在滅菌鍋加熱時(shí)應(yīng)及時(shí)開(kāi)啟排氣閥。排氣：待空氣排盡后，才可關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱。升壓：確定鍋內(nèi)空氣是否排盡，十分重要。排盡后即可關(guān)閉排氣閥。保壓：當(dāng)鍋內(nèi)壓力到達(dá)所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。降壓：達(dá)到滅菌時(shí)間后，立即關(guān)閉熱源，鍋內(nèi)壓力降至表頭零壓后，在打開(kāi)排氣閥。否則鍋內(nèi)壓力突然下降，使瓶裝培養(yǎng)基或其他液體因壓力瞬間下降而發(fā)生復(fù)沸騰，造成事故。取料：由于取料時(shí)，鍋內(nèi)溫度及蒸汽很燙，故取料時(shí)一定要防止手及其他部位的皮膚燙傷。滅菌后處理：滅菌完畢，必須倒掉鍋內(nèi)剩余水并擦干，以免日久鋁質(zhì)裝料通被腐蝕。革蘭氏染色的原理是什么？該染色法所以能將細(xì)菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類(lèi)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。G-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類(lèi)脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低,故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類(lèi)脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類(lèi)脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色，呈現(xiàn)藍(lán)紫色。在革蘭式染色試驗(yàn)中，為什么會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性？如何避免？革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時(shí)間，如脫色過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而誤認(rèn)為是革蘭氏陰性菌。如脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被誤認(rèn)為是革蘭氏陽(yáng)性菌。脫色時(shí)間的長(zhǎng)短還受涂片之厚薄、脫色時(shí)玻片晃動(dòng)的快慢及乙醇用量多少等因素影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。一般可用已知革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌做練習(xí)，以掌握脫色時(shí)間。當(dāng)要確證一個(gè)未知菌的革蘭氏反應(yīng)時(shí)，應(yīng)同時(shí)做一張已知革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的混合涂片，以資對(duì)照。在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？瓊脂。特性：化學(xué)成分單一且無(wú)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，不影響培養(yǎng)基的本身的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)配比和菌種生長(zhǎng)；遇熱可融化冷卻即呈凝固態(tài)，且透明度高黏著力強(qiáng)耐加壓滅菌能力強(qiáng)，利于實(shí)驗(yàn)操作；分解性罕見(jiàn)，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；常用濃度1%~2%，經(jīng)濟(jì)節(jié)約。使用：在液體培養(yǎng)基中加入適量的瓊脂（1%~2%）即可。當(dāng)物鏡由低倍轉(zhuǎn)到油鏡時(shí)，隨著放大倍數(shù)的增加，視野的亮度是增加還是減弱？應(yīng)如何調(diào)節(jié)？減弱。可以增加輔助光源的亮度來(lái)調(diào)整視野亮度?；蛘{(diào)節(jié)聚光鏡。血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)室內(nèi)如有氣泡會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？將影響菌懸液的隨機(jī)分布而使計(jì)數(shù)產(chǎn)生誤差。吸取菌懸液滴加在蓋玻片與計(jì)數(shù)板的邊緣縫隙處，讓菌液沿蓋玻片與計(jì)數(shù)板間的縫隙滲入計(jì)數(shù)室以避免產(chǎn)生氣泡。在革蘭式染色試驗(yàn)中，不經(jīng)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌？為什么？可以。因?yàn)槊撋驡+是紫色的而G-就已經(jīng)沒(méi)有顏色了，這時(shí)，其實(shí)已經(jīng)可以區(qū)分了，但是如果不經(jīng)復(fù)染的話(huà)，鏡檢時(shí)看不清G-的細(xì)胞形態(tài)，但可以區(qū)分。簡(jiǎn)述從環(huán)境中分離具有水解淀粉酶活性的芽孢桿菌的主要步驟。樣本采集：采集周?chē)谢ú莸某深w粒狀的離地表10cm左右的土壤目的菌種的富集：①取15g土壤加入250ml燒杯中，再加入40ml的無(wú)菌水振蕩10min制成土壤混懸液，用無(wú)菌移液管吸取10ml土壤懸液加入富集培養(yǎng)基中，置于37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h②在85~90C水浴鍋中加熱10min，殺滅菌體使芽孢得到富集3，稀釋涂布梯度稀釋?zhuān)喝?支加入4ml無(wú)菌水的試管，在一號(hào)試管中加入上述菌液1ml混勻，此時(shí)菌液稀釋10倍；取一號(hào)試管中菌液1ml加入二號(hào)試管中混勻，此時(shí)菌液稀釋10^-2倍；其余試管依次類(lèi)推涂布平板：用一支新的無(wú)菌槍頭，由低濃度土壤稀釋液中吸取100ml對(duì)號(hào)較均勻地倒入已標(biāo)記好稀釋濃度的選擇培養(yǎng)基上(在此之前各試管要搖勻)，用灼燒冷卻后的無(wú)菌玻璃棒涂勻。每個(gè)濃度做1個(gè)平板。在37°C下恒溫培養(yǎng)24h芽孢桿菌的菌落扁平、邊緣不整齊、白色、表面粗糙皺褶。4，淀粉水解酶的鑒定待菌落長(zhǎng)出之后，滴加碘液，在菌落周?chē)型该魅ψC明芽孢桿菌產(chǎn)淀粉酶。5，革蘭氏染色，鏡檢芽孢桿菌經(jīng)革蘭氏染色后成紫色6，復(fù)篩：酶活力的測(cè)定用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量透明圈和菌落的直徑。根據(jù)兩者比值大小初步確定淀粉酶活性的高低。篩出酶活力最高的菌種。利用加壓蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，有何不利影響？如何防止？滅菌可能某些不耐熱的物質(zhì)受到破壞，如使糖類(lèi)形成氨基糖、焦糖。還可能使磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽(yáng)離子結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而生成沉淀。生產(chǎn)上可以把糖類(lèi)物質(zhì)用連消的方法，可以減少有害物質(zhì)生成。培養(yǎng)基中加入螯合劑，可以減少沉淀的生成。V.P試驗(yàn)的目的和原理分別是什么？目的：了解鑒別不同腸桿菌科各菌屬的乙酰甲基甲醇試驗(yàn)原理，并掌握其操作方法。原理：某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧，氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱(chēng)V—P(+)反應(yīng)。簡(jiǎn)述超凈工作臺(tái)在使用時(shí)主要的操作步驟。1，檢查超凈工作臺(tái)操作環(huán)境如環(huán)境溫度、空氣質(zhì)量、電源燈，登記使用信息；2，將實(shí)驗(yàn)需要的器材擺在工作臺(tái)臺(tái)面上，滅過(guò)菌的培養(yǎng)基等放在左側(cè)，工具放在右側(cè)；拉下玻璃擋板，開(kāi)啟紫外燈照射30min進(jìn)