10有關基因工程中的酶切問題

有關基因工程中的酶切問題一、單選題：已知某種限制性內(nèi)切酶在一線性DNA分子上有3個酶切位點，如圖中箭頭所指，如果該線性DNA分子ab c dandna分廣的梢uj示嶽甩在3個酶切位點上都被該酶切斷，則會產(chǎn)生a、b、c、d四種不同長度的DNA片段?，F(xiàn)在多個上述線性DNA分子，若在每個DNA分子上至少有1個酶切位點被該酶切斷，則從理論上講，經(jīng)該酶切后，這些線性ab c dandna分廣的梢uj示嶽甩A.3B.4C.9D.12現(xiàn)有一長度為1000堿基對（bp）的DNA分子，用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000bp,用KpnI單獨酶切得到400bp和600bp兩種長度的DNA分子，用EcoRI、KpnI同時酶切后得到200bp和600bp兩種長度的DNA分子。該DNA分子的酶切圖譜正確的是的￡coRl￡'rr；Hl A/vaIKprd￡coRlI 600 I200I200D,D,現(xiàn)有一長度為3000堿基對（bp）的線性DNA分子，用限制性核酸內(nèi)切酶酶切后，進行凝膠電泳，使降解產(chǎn)物分開。用酶H單獨酶切，結(jié)果如圖1；用酶B單獨酶切，結(jié)果如圖2；用酶H和酶B同時酶切，結(jié)果如圖3。該DNA分子的結(jié)構(gòu)及其酶切圖譜是（）200Obp200QbpMOObQiODObp200Obp200QbpMOObQiODObpSDObp0GJbp—400b]j40Gbp圖1 圖2 圖3辛耳―9400600 1400 600A辛￥罟4006CQ600 1400C6D04叩6OtJK00辛400600 1400 600D4.在DNA測序工作中，需要將某些限制性內(nèi)切核酸酶的限制位點在DNA上定位，使其成為DNA分子中的物理參照點。這項工作叫做“限制酶圖譜的構(gòu)建”。假設有以下一項實驗：用限制酶Hindlll,BamHl和二者的混合物分別降解一個4kb（1kb即1千個堿基對）大小的線性DNA分子，降解產(chǎn)物分別進行凝膠電泳，在電場的作用下，降解產(chǎn)物分開，如右圖所示。HiiwlinHinillTIRiimHT^imHI據(jù)此分析，這兩種限制性內(nèi)切核酸酶在該DNA分子上的限制—位點數(shù)目是以下哪一組？IJkbA.Hindlll1個,BamHI2個B.HindIII2個，BamHl3個—L8kb—1.0kbU.UkJ)0.3kJ)—C.HindIII2個，BamHI1個D.Hindlll和BamHI各有2個 、填空題:

1?圖為某種質(zhì)粒表到載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。據(jù)圖回答：將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒該表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有 、 、 三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分TOC\o"1-5"\h\z離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進行 。用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉(zhuǎn)化實驗。之后將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是 ;若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是 目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是 ，其合成的產(chǎn)物是 .在上述實驗中，為了防止目的基因和基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選用的酶是 。rcRALwiIJiiroRJ圖［料築兇操件流樓圖的來芭冰DMA打i原:坯因DT4A>i時fI幽刖<DrcRALwiIJiiroRJ圖［料築兇操件流樓圖的來芭冰DMA打i原:坯因DT4A>i時fI幽刖<DAl?I4IIIE3.FEJIMlHILL…-弓|物対一 ' M N駁純規(guī)制撫WfiS符樸理戒的骯農(nóng)0納藺8S血1SrvijTI一―" /DMA丁”冊陋冊屮理川用陽口山［|17「『|1|『11計1111冏1刖叩11*二;骸鞍￡ mumujiUMunouijiiiLLOMiLumJlMlIlinnDNAF92引物對與換扳結(jié)合示意圖引物對A.PXnAACTGAAATGTAGCrA^'CTTAAG1CCATPACTCTAG引物對B5152GTCCGACTAGTGGCTGIT；AGCTGGCG^FlTaCCOFCC表1引物對序列表表2幾種限制酶P只別序列及切割位點表限制酶AluI￡cx)HIPsLIS/naI切割位點'AG；CTG1AATTCCTGCAJGCCC1GGGTCfGACTTAATGGTACCTCGGG1CCC請根據(jù)以上圖表回答下列問題。在采用常規(guī)PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶,其最主要的特點 。PCR過程中退火(復性)溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設定。表1為根據(jù)模板設計的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？ 。

圖1步驟③所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？—。為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因所用的細菌B通常為 。對符合設計要求的重組質(zhì)粒T進行酶切，。假設所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據(jù)圖1中標示的酶切位點和表2所列的識別序列，對以下酶切結(jié)果作出判斷。采用EcoRI和PstI酶切，得到 種DNA片斷。采用EcoRI和SmaI酶切，得到 種DNA片斷。(09江蘇卷)(7分)蘇云金桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白。下圖是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(amp『為抗氨芐青霉素基因)，據(jù)圖回答下列問題。將圖中①的DNA用Hindlll、BamHI完全酶切后，反應管中有 種DNA片段。3種限制性彊酸內(nèi)切酶識別序列與降刪烷點/Yitidin：GCTTTTCGAA/Yitidin：GCTTTTCGAA尿mH1:GGATCCCCTAGG+HindIII蘇云金桿菌I冃的貳因BamHI4-H/ndllIB?大腸桿胡l>NA接酶涂布在龜節(jié)胃撐素選擇平板上I一…被搜合帯:汀冏的HindIII蘇云金桿菌I冃的貳因BamHI4-H/ndllIB?大腸桿胡l>NA接酶涂布在龜節(jié)胃撐素選擇平板上I一…被搜合帯:汀冏的圖中②表示Hindlll與BamHI酶切、DNA連接酶連接的過程，此過程可獲得 種重組質(zhì)粒；如果換用Bstl與BamHI酶切，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得 種重組質(zhì)粒。目的基因插入質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒的 。圖中③的Ti質(zhì)粒調(diào)控合成的vir蛋白，可以協(xié)助帶有目的基因的T—DNA導人植物細胞，并防止植物細胞中 對T—DNA的降解。已知轉(zhuǎn)基因植物中毒素蛋白只結(jié)合某些昆蟲腸上皮細胞表面的特異受體，使細胞膜穿孔，腸細胞裂解，昆蟲死亡。而該毒素蛋白對人類的風險相對較小,原因是人類腸上皮細 。生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合播種，其目的是降低害蟲種群中白 基因

頻率的增長速率。（09福建卷）（10分）轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有PstI、Smal、EcoRl、Apal等四種限制酶切割位點。請回答：%tII卯1（1） %tII卯1的表達載體A時，應選用限制酶 ,對 進行切割。（2） 培養(yǎng)板中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，應使基因表達載體A中含有 作為標記基因。（3）香蕉組織細胞具有 ，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術將導入抗病基因的香蕉組織細胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細胞的 。（18分）（1）限制性內(nèi)切酶I的識別序列和切點是一GIATCC—，限制性內(nèi)切酶II的識別序列和切點是—IATC—。在質(zhì)粒上有酶I的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶II的切點。請畫出質(zhì)粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶II切割后所形成的黏性末端。在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來？為什么？參考答案：1.C2.D3.A4.A二、填空題：1．（18分）（1）目的基因—載體連接物載體--載體連接物目的基因--目的基因連接物分離純化（每空2分，共8分）（其他合理答案也給分）（2）載體--載體連接物（2分）；目的基因一載體連接物（1分）、 載體一載體連接物（1分）（3）啟動子mRNA（每空2分，共4分）（4） EcoRI和BamHI（2分）（只答一個酶不給分）（1）耐高溫2）引物對B（3）否（4）農(nóng)桿菌（5）①2②1（1）4 （2）2 1 （3）復制（4）DNA水解酶（5）表面無相應的特異性受體（6）抗性5．(1)①（1）Pstl、EcoRI含抗病基因的DNA、質(zhì)粒（2）抗卡那霉素基因（3）5．(1)①—G^GATCC—用酶I切割十—G GATCC—TOC\o"1-5"\h\z—CCTAGf— —CCTAG G—一/GAtC—………—GATC—用酶II切割$一 GAT—■的基因— GATC-HYPE