種子生活力、健康、重量測定及種子檢驗的計算機管理

2023/2/11第八節(jié)種子生活力測定方法一、種子生活力測定的意義二、四唑染色法測定三、其他測定方法2023/2/121、種子生活力（seedviability）的概念

種子生活力是指種子發(fā)芽的潛在能力和種胚所具有的生命力。通常是指一批種子中具有生命力的種子數(shù)占種子總數(shù)的百分率。

一、種子生活力的概念和測定意義能發(fā)芽的種子暫時不能發(fā)芽而具有生命力的休眠種子2023/2/13（1）休眠的種子必須進行生活力測定（2）快速預測種子發(fā)芽能力2、測定種子生活力的意義一、種子生活力的概念和測定意義因為新收的或在低溫貯藏處于休眠狀態(tài)的種子，采用標準發(fā)芽試驗，即使供給適宜的發(fā)芽條件仍不能良好發(fā)芽或發(fā)芽力很低。在這種情況下，僅用發(fā)芽試驗測定其發(fā)芽率，就不可能測出種子的最高發(fā)芽率，必須進一步測定其生活力，了解種子潛在發(fā)芽能力，以便合理利用種子。（1）休眠的種子必須進行生活力測定休眠種子可借助于各種預處理打破休眠，進行發(fā)芽試驗，但時間也較長，而種子貿易中，常因時問緊迫，不可能采用正規(guī)的發(fā)芽試驗來測定發(fā)芽力，這是因為發(fā)芽試驗所需時間更長，如麥類需7-8天，水稻需14天，某些蔬菜和牧草種子需2-3周，尤其在收獲和播種間隔時間短的情況下，發(fā)芽試驗會耽擱農時，則可用生物化學速測法測定種子生活力作為參考，而林木種子可用生活力來代替發(fā)芽力。（2）快速預測種子發(fā)芽能力2023/2/16二、四唑染色法測定（TTCtestorTZtest）發(fā)展歷程1942年由德國H.Lakon發(fā)明1950年ISTA成立四唑測定技術委員會

1953年ISTA世界大會第一次將四唑測定列入國際種子檢驗規(guī)程《四唑測定手冊》（HandbookonTetrazoliumTest），Moore，1984年，650多個屬和種1995年我國將四唑測定列入農作物種子檢驗規(guī)程2023/2/17

無色的的三苯基四氮唑被種子吸收后，在胚部活細胞中脫氫酶的作用下，還原成為紅色的、穩(wěn)定、不擴散的三苯基甲，這樣，就可根據(jù)染色的部位和深淺來區(qū)分種子紅色的有生活力部分和無色的死亡部分。原理2023/2/18除完全染色的有生活力種子和完全不染色的無生活力種子外，還可能出動一些部分染色的異常顏色或不染色的壞死組織。

當然，種子有無生活力主要取決于胚和(或)胚乳(或配子體)壞死組織的部位和面積的大小，而不一定在于顏色的深淺。通過顏色的差異主要將健全的，衰弱的和死亡的組織判別出來，并確定其染色部位。原理2023/2/19特點原理可靠結果準確(與標準發(fā)芽率誤差一般不超過3-5%)不受休眠限制簡便快速成本低廉2023/2/110測定休眠種子的發(fā)芽潛力測定收獲后馬上要播種的種子的發(fā)芽潛力測定發(fā)芽緩慢的種子的發(fā)芽潛力測定發(fā)芽末期未發(fā)芽種子的生活力測定種子收獲或加工期間損傷種子的生活力解決發(fā)芽期間遇到的問題查明種子貯藏期間劣變衰老程度時間緊迫，調種時快速測定種子生活力適應范圍2023/2/111測定程序（一）預措（預處理）

預措：預措是指在種子預濕前除去種子外部的附屬物，其方法包括剝去果殼和在種子非要害部位弄破種皮，但需注意，不能損傷種子內部胚的主要構造。預濕:

為加快種子充分吸濕，軟化種皮，便于樣品準備，以提高染色的均勻度，通常種子在染色前要進行預濕。2023/2/1121.預濕快速水浸預濕：

將種子完全浸入水中，讓其充分吸脹，主要適用于種子直接浸入水中不會造成組織破裂的損傷，并不會影響鑒定正確性的種子種類。有時為了加快種子吸水，溫季作物種子可用40-45攝氏度水。應特別注意，如果浸種溫度過高或浸種時間過長會引起種子變質，造成人為的水浸損傷，影響鑒定結果，所以應控制浸種時間。2023/2/1131.預濕緩慢紙床預濕：按種子發(fā)芽試驗所用方法，將種子放在紙床上或紙巾間，讓其緩慢吸濕，主要適用于有些直接浸在水中容易破裂和損傷的種子，以及衰弱的種子或過分干燥的種子。經實際應用表明緩慢吸濕能比較好地解決吸濕和供氧的矛盾。2023/2/114（二）樣品準備目的：使四唑溶液快速和充分滲入種子全部活組織，加快染色反應，采用適當方法使胚的主要構造和活的營養(yǎng)組織暴露出來。樣品準備方法取決于種子大小、形狀，種皮結構，胚的位置、

形狀及大小，營養(yǎng)組織的活與死，應用儀器的性能，技術的先進性，測定時間的緊迫性，結果的正確性等要求，以及檢驗人員的工作經驗等因素。2023/2/115不需預濕和附加準備：如苜蓿種子采用緩慢預濕后不需樣品準備：如大豆種子等穿刺或切開胚乳：小粒牧草等種子沿胚縱切：水稻、玉米、和麥類等近胚縱切：松柏和傘形科等植物種子上半粒縱切：萵苣和其他菊科等植物種子（二）樣品準備2023/2/116g)

切去種子基端：茜草科等植物種子h)

斜切種子：菊科、十字花科和薔薇科等橫切胚乳：黑麥草、羊茅等植物種子剝去種皮：矮牽牛、茶籽和棉花等植物種子剝開胚乳取出胚：杜仲等林木種子橫切胚軸和盾片：大麥和小麥等從果實內取出胚：桃等橫切種子兩端：山茱萸和胡頹子等平切果種皮和胚乳，露出胚的構造：洋蔥和菠菜等植物種子（二）樣品準備2023/2/1171.禾谷類:通過胚和約在胚乳四分之三個縱切2.燕麥屬:靠近胚部橫切3.牧草:通過胚乳末端部分橫切和縱切4.牧草:種子刺穿胚乳5.萵苣屬:通過子葉末端一半縱切6.第5種方式進行縱切時的解剖刀部位7.傘形科:沿胚的旁邊縱切8.針葉樹:種子沿胚旁邊縱切9.兩端橫切,打開胚腔,并切去小部分胚乳.2023/2/118（三）染色通過染色反應，能將胚和活的營養(yǎng)組織里的健壯、衰弱和死亡部分的差異正確地顯現(xiàn)出來，以便進行確切的鑒別，可靠地判斷種子生活力和活力。2023/2/1191、染色程序按要求，將經過樣品準備或不需準備的規(guī)定數(shù)量種子分別放人四唑溶液里染色。小粒種子可用6cm培養(yǎng)皿，大、中粒種子可用9cm培養(yǎng)皿或更大的容器，特別細小的子可包在濾紙內，分別放入容器里。然后加入適宜濃度的四唑溶液，以淹沒種子為度，移置一定溫度的黑暗恒溫箱內或弱光下進行染色反應。因為光線可能使四唑鹽類坯原而降低其濃度，影響染色效果。2023/2/1202.染色溫度和時間染色時間因種子種類、樣品準備方法、本身生活力的強弱，四唑溶液濃度、pH和溫度等因素的不同而有差異，其中溫度影響最大。染色時間可按需要在20~45℃溫度范圍內加以適當選擇。在這種溫度范圍內，溫度每增加5攝氏度，其染色時間可減少一半。例如，要求在30攝氏度以下適宜染色時間為6h的種子樣品，移到35℃下則只需染色反應3h，在40攝氏度下僅需1.5h。2023/2/1212.染色溫度和時間另一方面，種子的健壯、衰弱和死亡不同等級的組織，其染色的快慢也是不同的。一般來說，衰弱組織四唑溶液滲入較快，染色也較快；健壯組織酶的活性強，染色明顯。為了使這些不同等級的組織均能達到良好的染色程度，以便于鑒別，有時可根據(jù)樣品的實際情況，適當調整染色時間。2023/2/1223.暫停染色若未能按時進行鑒定，那么可在能接受的時間范圍內，將正在進行染色的樣品移到低溫或冰凍條件下，以中止或延緩染色反應進程。但應注意，仍需將種子樣品保持在原來的染色溶液里，而對已達到染色時間的樣品應保持在清水中或濕潤條件下，對于在1h內要鑒定的染色樣品，最好先倒去染色溶液并沖洗，保持在低濕清水中或濕潤狀態(tài)，以及弱光或黑暗條件下，以待鑒定。2023/2/1234.染色失調當在適合的染色時間內，染色溶液變?yōu)榛鞚幔⒊霈F(xiàn)泡沫或粉紅色的沉淀，這可能是由于以下一種或幾種原因引起的。（1）在測定樣品中含有死亡、衰弱、熱傷、凍害或機械損傷的種子。（2）測定樣品的胚和營養(yǎng)組織在預濕前已在水中或四唑溶液里浸過。（3）染色溶液溫度過高而引起種子組織（特別是衰弱組織）的嚴重劣變，導致外溢物增加和微生物的活動。2023/2/124（四）鑒定前處理直接觀察，不需處理輕壓出胚，觀察鑒定扯開營養(yǎng)組織，暴露出胚切去一層營養(yǎng)組織，暴露出胚和活的營養(yǎng)組織沿胚中軸縱切沿種子中線縱切剝去半透明的種皮或種子組織剝去種皮和殘余營養(yǎng)組織切去切面碎片或掰開子葉乳酸苯酚透明液的應用(便于小粒種子觀察)2023/2/1251、目標：（五）觀察鑒定確切計算種子在適宜條件下（包括在殺菌劑處理有效的情況下）能產生正常幼苗的能力，即種子生活力。按種子樣品染色程度和組織特征，判斷其強壯程度，將種子分為強或弱2~3個等級以以便統(tǒng)計種子活力。按局部解剖學染色圖樣，觀察染色部位，查明種子劣變和生活力喪失的原因，為種子生理、種子加工，種子貯藏和種子處理提供指導情報。2023/2/126染成的顏色、組織狀態(tài)，有無腫脹、破裂、蟲傷胚的主要構造機能與其他部分之間的關系，即與營養(yǎng)組織的損傷面積（指不染色的面積）、位置和程度的關系種子的健壯水平據(jù)此，可將種子分為健壯、活的衰弱組織、死的衰弱組織和死亡4級水平。2、鑒定因素2023/2/127

凡是胚的主要構造及有關活營養(yǎng)組織染成有光澤的鮮紅色，且組織狀態(tài)正常的，為有活力種子凡是胚的主要構造局部不染色或染色成異常的顏色和光澤，并且活營養(yǎng)組織不染成部分已超過二分之一，或超過允許范圍且組織軟化的，為不正常種子凡完全不染色或染色成無光澤的淡紅色或灰白色，且組織已腐化、蟲蛀、損傷、腐爛的，為死種子各種植物的種子活力判別標準參照種子檢驗規(guī)程。一般的鑒定原則：3、觀察鑒定2023/2/128水稻：凡是胚的主要構造染成正常鮮紅色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的種子為有生活力種子。大豆：凡是整個種子染成明亮紅色，或僅胚根尖端1/3不染色，或子葉表面有小范圍壞死，或子葉頂端1/3不染色，為有生活力種子。鑒定實例2023/2/130（六）結果報告計算各重復有生活力種子百分率，重復間誤差不得超過最大允許誤差結果計算到近似整數(shù)2023/2/131生活力測定重復間的最大容許差距平均生活力百分率%重復間容許的最大差距124次重復3次重復2次重復9925--98365-97476696587695698793-947-8109891-929-101110990111211989121211108813131210871413121184-8615-1714131181-8318-2015141278-8021-2316151376-7724-2517161373-7526-2817161471-7229-3018161469-7031-3218171467-6833-3418171564-6635-3719171556-6338-45191815554620181551-5447-50201816種子檢驗結果報告單2023/2/133甲烯蘭法溴麝香草酚蘭法（BTB法）紅墨水染色法軟Ｘ射線造影技術三、種子生活力的其他測定方法2023/2/134第九節(jié)種子健康測定一、種子健康測定的重要性二、測定程序2023/2/135種子健康測定主要是測定種子是否攜帶有病原菌(如真菌、細菌及病毒)、有害的動物(如線蟲及害蟲)等健康狀況。一、種子健康測定的重要性2023/2/1361.種子攜帶的接種體可引起田間病害并逐步蔓延，以致降低作物產量和商品價值；2.進口種子批可將病害帶入新區(qū)；3.了解幼苗的價值，以及查明室內發(fā)芽不良或田間出苗差的原因，從而彌補發(fā)芽試驗的不足。目的和重要性是：2023/2/137（一）未經培養(yǎng)的檢驗（不能說明病原菌的生活力）（二）培養(yǎng)后的檢驗二、測定程序2023/2/138優(yōu)點：快速、直接、簡便；缺點：僅適用于少部分真菌，需要一定經驗，不能區(qū)分病原菌活力。（一）未經培養(yǎng)的檢驗混雜在種子間的較大病原體（線蟲癭、菌核）污染大量病菌孢子的種子（小麥腥黑穗?。┓N子帶明顯病癥的病粒（小麥黑胚?。┬←満谂卟×Ｐ群谒氩?41.直接檢查為使子實體、病癥或害蟲更容易被觀察到或促進孢子釋放，把試驗樣品浸人水中或其他液體中，種子吸脹后檢查其表面或內部，最好用雙目顯微鏡。342.吸脹種子檢查1、適用范圍：種子表面帶菌而肉眼看不見的種子病害。（附著在種子表面的病菌孢子）如：黑粉菌的冬孢子、霜霉菌的卵孢子等。小麥矮腥黑穗病菌

383.洗滌檢查洗滌法檢測玉米種子中的真菌Sporisoriumholci-sorghi

和

Ustilagomaydis

40取試樣5~10

g（小麥等中粒種子5g，玉米、豌豆大粒種子10g），用刀剖開或切開種子的被害或可疑部分，檢查害蟲。344.剖粒檢查高錳酸鉀染色法：適用于檢查隱蔽的米象、谷象。取試樣15g，除去雜質，倒人銅絲網中，于30℃水中浸泡1min，再移入1%高錳高錳溶液中染色1min。然后用清水洗滌，倒在白色吸水紙上用放大鏡檢查，挑出粒面上帶有直徑0.5mm的斑點即為害蟲籽粒，計算害蟲含量。345.染色檢查米象：米象，俗稱蛘子，歸屬鞘翅目象蟲科，是貯藏谷物的主要害蟲。成蟲嚙食谷粒，幼蟲蛀食谷粒內部。危害米、稻、麥、玉米、高粱等。29碘或碘化鉀染色法：適用于檢驗豌豆象。取試樣50g，除去雜質，放入銅絲網中或用紗布包好，浸入1%碘化鉀或2%碘酒溶液或1~1.5min。取出放人0.5%的氫氧他鈉溶液中，浸30s，取出用清水洗滌15-20s，立即檢驗，如豆粒表面有直徑1-2mm的圓斑點，即為豆象感染，計算害蟲含量。345.染色檢查豌豆象：昆蟲名，為鞘翅目，豆象科。分布在中國大部分省區(qū)，尤以江蘇、安徽、山東、陜西等省為重。危害豌豆、扁豆等；幼蟲蛀害豆英，取食豆粒，影響產量，并且受害豆英氣味難聞，不能食用。29谷蠹：也叫“米長蠹”，危害各種儲藏的糧食。在熱帶和亞熱帶地區(qū)，由谷蠹所造成的儲藏谷物的損失要比玉米象或谷象大得多。29赤擬谷盜：為害谷類、豆類和油料種子，尤喜食種子的胚、破碎粒和碎屑粉末；成蟲有臭腺分泌臭液，使糧食發(fā)生霉腥味，其分泌物還含有致癌物苯醌。31取試樣100g，除去雜質，倒入食鹽飽和溶液中(35.9g鹽溶于1000mL水中)，攪拌10-15min，靜止1~2min，將懸浮在上層的種子取出，結合剖粒檢驗，計算害蟲含量。346.比重檢查用于檢查種子內隱匿的蟲害(如蠶豆象、玉米象.、麥蛾等)，通過照片或直接從熒光屏上觀察。347.軟X射線檢查玉米象：我國頭號貯糧害蟲，為害各種谷類、薯類以及干果、藥材等。食性廣，分布普遍，危害極其嚴重。成蟲有假死性，善攀緣，能飛翔，既能在室內繁殖，又能在田間繁殖成蟲食性較廣，更喜食種子的胚。幼蟲喜歡胚乳，終生蛀蝕于種子內。成蟲幼蟲為害狀28麥蛾：幼蟲危害各種儲藏的糧食，尤以小麥受害最嚴重，故有麥蛾之名。在溫暖地區(qū)，每年可發(fā)生4～6代，以幼蟲在糧粒內越冬。302023/2/154

試驗樣品經過一定時間培養(yǎng)后，檢查種子內外部和幼苗上是否存在病原菌或其癥狀。根據(jù)培養(yǎng)基不同，可分以下3類。（一）培養(yǎng)后的檢驗吸水紙法適用于許多類型種子的種傳真菌病害的檢驗，尤其是對于許多半知菌，有利于分生孢子的形成和致病真菌在幼苗上癥狀的發(fā)展。341、吸水紙法稻瘟病檢測，取試樣種子400粒，將培養(yǎng)皿內的吸水紙用水濕潤，每個培養(yǎng)皿播25粒種子，在22攝氏度下用12h黑暗和12h近紫外光照的交替周期培養(yǎng)7天。在12~50倍放大鏡下檢查每粒種子上的稻瘟病分生孢子。一般這種真菌會在穎片上產生小而不明顯、灰色至綠色的分生孢子，這種分生孢子成束地著生在短而纖細的分生孢子梗的頂端。菌似很少覆蓋整粒種子。如有懷疑，可在200倍顯微鏡下檢查分生孢子來核實。典型的分生孢子是倒梨形，透明，基部鈍圓具有短齒，分兩隔，通常具有尖銳的頂端，大小為（20-25）μm×（9-12）μm。341、吸水紙法砂床法適宜于某些病原體的檢驗.用砂時應通過1mm孔徑的篩子去掉砂中雜質，并將砂粒清洗，高溫烘干消毒后，放入培養(yǎng)皿內加水濕潤，種子排列在砂床內，然后密閉保持高溫，培養(yǎng)溫度與紙床相同，待幼苗頂?shù)脚囵B(yǎng)皿蓋時進行檢查(經7-10天)。342、砂床法瓊脂皿法主要用于發(fā)育較慢的潛伏在種子內部的致病真菌，也可用于檢驗種子外表的病原菌。343、瓊脂皿法小麥穎枯病檢測：先數(shù)取試樣400粒，經1%(m/m)的次氯酸鈉消毒10min后，用無菌水洗滌。在含0.01%硫酸鏈霉素的麥芽或馬鈴薯左旋糖瓊脂的培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿播10粒種子于瓊脂表面，在20℃黑暗條件下培養(yǎng)7天。用肉眼檢查每粒種子上緩慢長成圓形菌落的情況，該病菌菌絲體為白色或乳白色，通常稠密地覆蓋著感染的種子，菌落的背面呈黃色或褐色，并隨其生長顏色變深。343、瓊脂皿法豌豆褐斑病檢測：先數(shù)取試樣400粒，經1%(m/m)的次氯酸鈉消毒10min后，用無菌水洗滌.在麥芽或馬鈴薯葡萄糖瓊脂的培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿播10粒種子于瓊脂表面，在20℃黑暗條件下培養(yǎng)7天。用肉眼檢養(yǎng)每粒種子外部蓋滿的大量白色菌絲體。對有懷疑的菌落可放在25倍放大鏡下觀察，根據(jù)菌落邊緣的波狀菌絲來確定。343、瓊脂皿法2023/2/161第十節(jié)種子重量測定一、種子重量測定的重要性二、測定方法三、結果報告四、規(guī)定水分千粒重的換算2023/2/162種子重量通常用千粒重(weightper1000seds)表示，通常是指自然干燥狀態(tài)的1000粒種子的重量；我國1995年《農作物種子檢驗規(guī)程》中，種子千粒重是指國家標準規(guī)定水分的1000粒種子的重量，以克(g)為單位。千粒重的測定具有重要的意義。一、種子重量測定的重要性2023/2/163(一)千粒重是種子活力的重要指標之一，種子千粒重大，其內部的貯藏營養(yǎng)物質多，發(fā)芽迅速整齊，出苗率高，幼苗健壯，并能保證田間的成苗密度，從而增加作物產量。(二)千粒重是多項品質的綜合指標，測定方便。種子千粒重與種子飽滿、充實、均勻、粒大成正相關。如要分別測定這四項品質指標就較為麻煩。飽滿度需用量筒測量其體積，充實度則需用比重計測量比重；均勻度需用一套篩子來測得；種子大小則需用長、寬測量器測量其長、寬、厚；而測定千粒重則簡單得多。(三)千粒重是正確計算種子播種量的必要依據(jù)。計算播種量的另兩個因素是種子用價和田間栽培密度。同一作物不同品種的千粒重不同，其播種量也應有所差異。一、種子重量測定的重要性2023/2/164

將凈度分析后的全部凈種子均勻混合，分出一部分作為試驗樣品。我國1955年國家規(guī)程中，種子重量測定有百粒法、千粒法和全量法3種方法?？扇芜x其中一種方法進行測定。二、測定方法2023/2/165用手或數(shù)種器從試驗樣品中隨機數(shù)取8個重復，每個重復100粒，分別稱重（g），小數(shù)位數(shù)與GB/T3543.3的規(guī)定相同。計算8個重復的平均重量、標準差及變異系數(shù)：（一）百粒法2023/2/166用手或數(shù)粒儀從試驗樣品中隨機數(shù)取兩個重復，大粒種子數(shù)500粒，中小粒種子數(shù)1000粒，各重復稱重（g），小數(shù)位數(shù)與GB/T3543.3的規(guī)定相同。兩份重復的差數(shù)與平均數(shù)之比不應超過5%，若超過應再分析第三份重復，直至達到要求，取差距小的兩份計算測定結果。（二）千粒法2023/2/167

將整個試驗樣品通過數(shù)粒儀，記下計數(shù)器上所示的種子數(shù)。計數(shù)后把試驗樣品稱重(g)，小數(shù)位數(shù)與GB/T3543.3的規(guī)定相同。3、全量法2023/2/168最后，計算結果，撰寫報告。如果是用全量法測定的，則將整個試驗樣品重量換算成1000粒種子的重量。如果是用百粒法測定的，則從