免疫學(xué)檢測技術(shù)

免疫學(xué)檢測技術(shù)2一、抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點及影響因素

二、檢測抗原和抗體的體外試驗

三、免疫細(xì)胞功能的檢測4抗原抗體反應(yīng)的特點高度特異性抗原表位與抗體分子中超變區(qū)互補結(jié)合表面化學(xué)基團之間的可逆結(jié)合空間構(gòu)象互補；通過氫鍵、靜電引力、范德華力及疏水鍵等非共價的可逆結(jié)合。適宜的抗原抗體濃度和比例抗原抗體反應(yīng)的兩個階段抗原抗體結(jié)合的特異性階段。數(shù)秒鐘至幾分鐘?？梢姺磻?yīng)階段。數(shù)分鐘至數(shù)日。5抗原抗體反應(yīng)的特異性親和力affinity：抗體分子上一個抗原結(jié)合部位與相應(yīng)抗原決定基之間的結(jié)合強度。親合力avidity：一個抗體分子與整個抗原之間的結(jié)合強度。非共價的可逆結(jié)合6抗原抗體反應(yīng)的可見性7抗原抗體反應(yīng)的影響因素電解質(zhì)適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會令沉淀反應(yīng)更易出現(xiàn)，如0.85%NaCl。溫度溫度越高，出現(xiàn)可見反應(yīng)的速度越快37℃pH6~8之間8血清學(xué)反應(yīng)分類凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)9凝集反應(yīng)agglutinationreactions顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成凝集團塊mg/ml直接凝集間接凝集10直接凝集-玻片凝集試驗紅細(xì)胞凝集11正向間接凝集實驗12反向間接凝集試驗13沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng):可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)沉淀物凝集反應(yīng):顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物單向瓊脂擴散雙向瓊脂擴散免疫電泳免疫比濁14單向免疫擴散含有一定濃度抗體的瓊脂凝膠。沉淀環(huán)直徑與抗原濃度正相關(guān)。15雙向免疫擴散根據(jù)沉淀線形狀，可鑒定兩種抗原是否相同。16免疫電泳常用于血清蛋白的組分分析17免疫火箭電泳rocketimmunoelectrophoresis沉淀峰高度和Ag的濃度成正比18免疫比濁在一定量抗體中分別加入遞增率抗原，經(jīng)一定時間后形成免疫復(fù)合物，以濁度計測量反應(yīng)液體的濁度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線推算樣品中抗原含量。19用標(biāo)記抗體或抗原進行的抗原抗體反應(yīng)免疫熒光法:直接熒光法間接熒光法酶免疫測定：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）雙抗體夾心間接法BAS-ELISA微粒捕獲酶免疫分析技術(shù)MEIA酶聯(lián)免疫空斑試驗ELISPOT免疫組織化學(xué)技術(shù)放射免疫測定法化學(xué)發(fā)光免疫分析免疫印跡法免疫PCR免疫膠體金技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)20免疫熒光法熒光素、酶或放射性核素等標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原。異硫氰酸熒光素（FITC）、藻紅蛋白（PE）等。直接熒光法、間接熒光法。21酶免疫測定pg/ml~ng/ml辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）或酶免疫組織/細(xì)胞化學(xué)法22ELISA雙抗體夾心法間接法BAS-ELISA酶聯(lián)免疫斑點實驗ELISPOT23微粒捕獲酶免疫分析技術(shù)MEIA將已知特異性抗體致敏的免疫微粒與生物素親和素酶放大系統(tǒng)相結(jié)合，酶作用于熒光底物，使之發(fā)熒光，通過檢測熒光強度判斷未知抗原的含量。用于檢測腫瘤標(biāo)志物、性激素、甲狀腺素、HCG等微量可溶性抗原。24免疫組織（細(xì)胞）化學(xué)25放射免疫測定法高靈敏性，pg/ml。125I、131I等。26化學(xué)發(fā)光免疫分析吖啶酯、魯米諾等發(fā)光物質(zhì)27免疫印跡法

Immunoblotting/Westernblotting28免疫PCR29免疫膠體金技術(shù)膠體金顆粒標(biāo)記抗體或抗原氯金酸（HAuCl4）在還原劑作用下聚合成特定大小金顆粒，因靜電作用呈穩(wěn)定膠體狀態(tài)。膠體金顆粒聚集后呈紅色。膠體金標(biāo)記染色膠體金免疫層析試劑盒30蛋白質(zhì)芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片：固定于支持介質(zhì)上的大量蛋白質(zhì)構(gòu)成的微陣列。31淋巴細(xì)胞的分離外周血淋巴細(xì)胞分離液外周血單個核細(xì)胞PBMC32淋巴細(xì)胞類型鑒定免疫吸附分離法免疫熒光法磁珠分離法流式細(xì)胞術(shù)抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)33磁珠分離3435熒光激活細(xì)胞分選儀分離法

流式細(xì)胞術(shù)鑒定熒光抗體單色、雙色或多色標(biāo)記的細(xì)胞。分析細(xì)胞周期分析細(xì)胞凋亡情況36流式細(xì)胞儀37抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)定量檢測抗原特異性CTL。38T細(xì)胞功能測定T細(xì)胞增殖實驗有絲分裂原（PHA、ConA等）形態(tài)計數(shù)法：體積增大、形態(tài)不規(guī)則、胞質(zhì)增多、胞核松散、核仁增多等。3H-TdR或125I-UdR摻入法MTT法遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測如：PPD試驗39B細(xì)胞功能測定各類Ig含量的測定單向瓊脂擴散法、ELISA、速率比濁法等?？贵w形成細(xì)胞測定溶血空斑試驗ELISPOT40細(xì)胞毒試驗檢測CTL、NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞活性的細(xì)胞學(xué)技術(shù)。51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法細(xì)胞染色法：臺盼藍(lán)染死細(xì)胞凋亡細(xì)胞檢測法41凋亡細(xì)胞檢測法細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測法體積變小、形態(tài)變圓、胞質(zhì)濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、核仁消失、染色質(zhì)濃縮成半月形或斑塊狀，最后形成凋亡小體。瓊脂糖電泳法：DNA區(qū)帶圖譜流式細(xì)胞術(shù)：二倍體峰前出現(xiàn)亞二倍體峰TUNEL法42凋亡細(xì)胞的檢測DNAladderband瓊脂糖凝膠電泳細(xì)胞核DAPI染色海馬神經(jīng)元原位凋亡檢測TUNEL法400×43吞噬細(xì)胞功能測定硝基藍(lán)四氮唑（NBT）試驗巨噬細(xì)胞吞噬試驗44細(xì)胞因子的檢測生物活性檢測法