尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDPglucosepyrophosphosphprylaseUGP)試劑盒說明書

貨號:QS3603

規(guī)格：50管/48

樣尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucosepyrophosphosphprylase，UGP）試劑盒說明書注意：正式測定以前選擇

紫外分光光度法2-3個(gè)預(yù)期差別大的樣本做展望定。測定意義：UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的重點(diǎn)酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP葡-萄糖（UDPG）。測定原理：UGP可逆催化反響生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)變?yōu)镹ADPH，340nm的吸光值增添快率反應(yīng)了UGP活性。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：天平、低溫離心計(jì)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿。試劑構(gòu)成和配制：提取液：液體50mL×1瓶，4℃保留。試劑一：液體25mL×1瓶，4℃避光保留。試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保留。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保留，嚴(yán)禁頻頻凍融。試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保留。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保留，嚴(yán)禁頻頻凍融。試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保留。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保留，嚴(yán)禁頻頻凍融。試劑五：液體5mL×1瓶，4℃保留。酶液提取：組織：依據(jù)質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比率（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測。細(xì)胞：依據(jù)細(xì)胞數(shù)目（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比率（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破裂細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；而后4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測。液體：直接檢測。測定操作：分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)理波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。取1mL石英比色皿，挨次加入500μL試劑一，100μL試劑二，100μL試劑三，100μL試劑四，100μL試劑五，100μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處30s的吸光值A(chǔ)1和330s的吸光值A(chǔ)2，△A=A2-A1計(jì)算公式：（1）按仍舊本蛋白濃度計(jì)算酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘耗費(fèi)1nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。UGP（nmol/min/mgprot）＝[A÷（ε×d）×V反總×109]÷(V樣×Cpr)T=321.54×ΔA÷Cpr（2）按仍舊實(shí)質(zhì)量計(jì)算酶活單位定義：每克組織每分鐘耗費(fèi)1nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。UGP（nmol/min/g鮮重）＝[A÷（ε×d）×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)T=321.54×ΔA÷W（3）依據(jù)細(xì)胞數(shù)目計(jì)算酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘耗費(fèi)1nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。UGP（nmol/min/104cell）=[A÷（ε×d）×V反總×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.643×ΔA（4）依據(jù)液體體積計(jì)算酶活單位定義：每毫升液體每分鐘耗費(fèi)1nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。UGP（nmol/min/mL）＝[9A÷（ε×d）×V反總×10]÷V樣÷T=321.54×ΔAV反總：反響系統(tǒng)整體積，1×10-3L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1m