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實(shí)驗(yàn)一一、淋巴細(xì)胞的分離二、細(xì)胞抗原片的制備三、人血清分離
杜聯(lián)峰外周血細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核-巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞紅細(xì)胞血小板一、淋巴細(xì)胞的分離
原理:根據(jù)淋巴細(xì)胞與血液中的其他細(xì)胞存在密度差異(比重差異),利用密度與淋巴細(xì)胞相近且近于等滲的分離液(ficoll液)作密度梯度離心進(jìn)行分離。方法:聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法(Ficoll分離液法)目的:將淋巴細(xì)胞從外周血細(xì)胞中分離出來(lái)分離液要求:①對(duì)細(xì)胞無(wú)毒②基本等滲③有一定比重(根據(jù)所分離物質(zhì)選擇分離液)實(shí)驗(yàn)材料:淋巴細(xì)胞分離液,離心管,刻度吸管,毛細(xì)吸管,抗凝管等。
實(shí)驗(yàn)步驟:1、無(wú)菌采外周靜脈血2ml加入抗凝管混勻、5分鐘后加入Hank’s液2ml稀釋血液。2、將抗凝血沿管壁緩慢加入分離液中。3、配平,放入水平離心機(jī)2000rpm離心10分鐘4、用毛細(xì)吸管吸取血漿與分離液處淋巴細(xì)胞,放入刻度離心管中。5、加入Hank’s液至5ml,,2000rpm離心5分鐘。棄去上清,沉淀為淋巴細(xì)胞Ficoll分離液法血漿淋巴細(xì)胞分離液粒細(xì)胞紅細(xì)胞2000r/min20min稀釋的抗凝血淋巴細(xì)胞分層液
淋巴細(xì)胞血漿
分層液稀釋液
紅血球二、淋巴細(xì)胞抗原片制備吹鋪冷風(fēng)吹干冷丙酮固定5~15min冷風(fēng)吹干,密封置-30℃以下低溫保存三、人血清分
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