標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 17480-1998 是一項(xiàng)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，全稱為《飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸附法》。這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）來測(cè)定飼料中黃曲霉毒素B1含量的方法、試劑與材料要求、操作步驟、計(jì)算方法以及結(jié)果判定等內(nèi)容，旨在為飼料質(zhì)量和安全監(jiān)控提供一個(gè)統(tǒng)一、準(zhǔn)確的檢測(cè)手段。

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

該標(biāo)準(zhǔn)適用于各類配合飼料、單一飼料及原料中黃曲霉毒素B1的定量檢測(cè)。黃曲霉毒素B1是一種由真菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，對(duì)人和動(dòng)物具有高度毒性，能夠?qū)е赂螕p傷甚至癌癥，因此對(duì)其在飼料中的含量進(jìn)行嚴(yán)格控制至關(guān)重要。

主要內(nèi)容概覽

1. 術(shù)語定義

  • 明確了黃曲霉毒素B1、酶聯(lián)免疫吸附法等相關(guān)專業(yè)術(shù)語的定義，確保標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行過程中的概念清晰。

2. 試劑與材料

  • 規(guī)定了實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑如抗體、酶標(biāo)抗原、顯色劑等的質(zhì)量要求及配制方法。
  • 列出了必要的實(shí)驗(yàn)器材，包括酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器等，并對(duì)使用前的準(zhǔn)備和校準(zhǔn)進(jìn)行了說明。

3. 采樣與樣品處理

  • 提供了樣品采集的指導(dǎo)原則，確保樣品具有代表性。
  • 描述了樣品的前處理步驟，包括粉碎、混合、提取和凈化，以去除干擾物質(zhì)并富集待測(cè)毒素。

4. 檢測(cè)步驟

  • 詳細(xì)闡述了酶聯(lián)免疫吸附法的操作流程，包括：
    • 將處理后的樣品與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到固定于微孔板上的特異性抗體上。
    • 清洗去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入酶標(biāo)二抗，形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。
    • 加入顯色底物，酶催化顯色反應(yīng)，顏色深淺與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。
    • 通過酶標(biāo)儀讀取吸光度值，據(jù)此計(jì)算毒素含量。

5. 計(jì)算與結(jié)果判定

  • 提供了計(jì)算公式，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線將吸光度值轉(zhuǎn)換為黃曲霉毒素B1的實(shí)際濃度。
  • 設(shè)定了判定限值，根據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)或標(biāo)準(zhǔn)判斷飼料中黃曲霉毒素B1是否超標(biāo)。

6. 精密度與準(zhǔn)確度

  • 介紹了重復(fù)性和再現(xiàn)性試驗(yàn)的要求，用以評(píng)估方法的精密度。
  • 通過回收率試驗(yàn)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，確保測(cè)試結(jié)果可靠。

實(shí)施意義

該標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施有助于飼料生產(chǎn)、檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)及監(jiān)管部門統(tǒng)一檢測(cè)方法，提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性，有效監(jiān)控飼料中黃曲霉毒素B1的污染情況，保障飼料安全和動(dòng)物健康，進(jìn)而保護(hù)食品安全和公眾健康。


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  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替，建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17480-2008
  • 1998-08-28 頒布
  • 1999-01-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
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GB/T 17480-1998飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法_第3頁
GB/T 17480-1998飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法_第4頁
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文檔簡(jiǎn)介

ICS65.120B46中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17480—1998飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay1998-08-28發(fā)布1999-01-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)飼料中黃曲霉毒素B的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T17480-1998中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復(fù)興門外三里河北街16號(hào)郵郵政編碼：100045電話：63707337、637874471999年1月第一版2005年1月電子版制作書號(hào)：155066·1-15410版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報(bào)電話：（010）68533533

GB/T17480-1998前酶聯(lián)免疫吸附(ELISA）法測(cè)定黃曲霉毒素B,AFB,）是近20年來發(fā)展起來的一種新的分析方法它比原GB8381—87薄層熒光限量法(半定量)測(cè)定AFB,具有技術(shù)先進(jìn)、靈敏度高、特異性強(qiáng)、精確度高、重復(fù)性好、測(cè)定速度快、成本低、污染少等優(yōu)點(diǎn)。其原理是通過AFB,抗體與酶標(biāo)AFB,抗原和待測(cè)抗原之間免疫竟?fàn)幏磻?yīng)以及酶的催化顯色反應(yīng)相結(jié)合來檢測(cè)樣品中AFB，的含量。國(guó)外已研制成專門的測(cè)試盒供檢測(cè)部門使用，如美國(guó)Agri-Screen等公司就有這種產(chǎn)品。本標(biāo)準(zhǔn)等效采用AOAC(美國(guó)公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì))中關(guān)于棉籽制品和混合飼料中AFB,酶聯(lián)免疫吸附篩選法，該法1989年首次在AOAC上獲得通過，本標(biāo)準(zhǔn)為飼料中AFB限量和定量測(cè)定法，可與原GB8381—87標(biāo)準(zhǔn)并列使用，而以原標(biāo)準(zhǔn)為仲裁法本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省微生物研究所、上海市飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站、國(guó)家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(北京）上海市嘉定纖檢儀器廠共同組成的起草工作組負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：成恒嵩、潘中華、張瑜、陳必芳、岔曉黎、趙曉聯(lián)、袁建興、楊歡、徐燕芳、葛其德.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)飼料中黃曲霉毒素B的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T17480-1998DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素B,<AFB,)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種飼料原料、配(混）合飼料中AFB的測(cè)定。2引用標(biāo)準(zhǔn)GB8381-87飼料中黃曲餐毒素B的測(cè)定方法3原理利用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，將AFB，特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應(yīng)板的孔穴中，再加入樣品提取液(未知抗原)及酶標(biāo)AFB,抗原(已知抗原)使兩者與抗體之間進(jìn)行免疫竟?fàn)幏磻?yīng),然后加酶底物顯色，顏色的深淺取決于抗體和酶標(biāo)AFB,抗原結(jié)合的量，即樣品中AFB,多,則被抗體結(jié)合酶標(biāo)AFB,抗原少，顏色淺，反之則深。用目測(cè)法或儀器法與AFB,標(biāo)樣比較來判斷樣品中AFB,的含量。試劑和材料4.1AFB，酶聯(lián)免疫測(cè)試盒組成4.1.1包被抗體的聚苯乙烯微量反應(yīng)板：24孔或48孔。4.1.2A試劑：稀釋液，甲醇：蒸水為7：93(V/V)。4.1.3）B試劑：AFB,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Sima公司，純度100%）溶液,1.00g/L.4.1.4C試劑:酶標(biāo)AFB抗原(AFB，辣根過氧化物酶交聯(lián)物,AFB-HRP),AFB,HRP(摩爾比)<2：1。4.1.5D試劑：酶標(biāo)AFB抗原稀釋液，含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的pH7.5磷酸鹽緩沖液(PBS)。pH7.5磷酸鹽緩沖液的配制：稱取3.01g磷酸氫二鈉(NazHPO,·12H.O),0.25g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·2H.O).8.76g氯化鈉(NaCl)加水溶解至1L、4.1.6E試劑：洗滌母液，含0.05%吐溫-20的PBS溶液.4.1.7F試劑：底物液a，四甲基聯(lián)苯胺(TMB）用pH5.0乙酸鈉-檸檬酸緩沖液配成濃度為0.2g/L.pH5.0乙酸鈉-檸樓酸緩沖液配制：稱取15.09g乙酸鈉(CH,COONa·3H.O),1.56g檸檬酸(C.H.O,·H.O)加水溶解至1L。4.1.8G試劑：底物液b.1mlpH5.0乙酸

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