GB/T 17480-2008飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法

犐犆犛６５．１２０

犅４６

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１７４８０—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８

飼料中黃曲霉毒素犅１的測(cè)定

酶聯(lián)免疫吸附法

犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犳犾犪狋狅狓犻狀犅１犻狀犪狀犻犿犪犾犳犲犲犱犻狀犵狊狋狌犳犳狊—

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２００８１１２１發(fā)布２００９０２０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜１７４８０—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８《飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法》。

本標(biāo)準(zhǔn)與ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８相比主要修改如下：

———范圍中增加“本標(biāo)準(zhǔn)檢出限為０．１μｇ／ｋｇ”；

———規(guī)范性引用文件中，用“ＧＢ／Ｔ２０１９５動(dòng)物飼料試樣的制備”代替“ＧＢ／Ｔ８３８１—１９８７飼料中

黃曲霉毒素Ｂ１的測(cè)定方法”；

———試劑盒組成中，增加“注意：不同測(cè)試盒制造商間的產(chǎn)品組成和操作會(huì)有細(xì)微的差別，應(yīng)嚴(yán)格按

說(shuō)明書要求規(guī)范操作”；

———儀器、設(shè)備條款中，刪除冰箱條款；增加電動(dòng)振蕩器、具塞磨三角瓶；

———將“取樣”條款改為“試樣制備”，同時(shí)將“按ＧＢ／Ｔ８３８１—１９８７中５．１要求采集、處理樣品，制

成分析用的試樣”改為“按ＧＢ／Ｔ２０１９５要求制備試樣”；

———限量測(cè)定條款中，將測(cè)定操作的分級(jí)條款合并為一個(gè)條款，并刪除表格，均用文字?jǐn)⑹鰷y(cè)定

過(guò)程；

———定量測(cè)定條款中增加“結(jié)果保留２位有效數(shù)字”；

———原“其他”條款刪除，將“凡接觸ＡＦＢ１的容器，需浸入１％次氯酸鈉（ＮａＣｌＯ２）溶液，１２ｈ后清洗

備用。為分析人員安全，操作時(shí)要帶上醫(yī)用乳膠手套”改為“警告”條款；

———增加了資料性附錄Ａ；

———將樣品溶液稀釋表及稀釋倍數(shù)與結(jié)果計(jì)算表作為資料性附錄Ｂ。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ和附錄Ｂ均為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省微生物研究所有限責(zé)任公司。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李利東、宓曉黎、袁建興、杜姝蓮。

本標(biāo)準(zhǔn)于１９９８年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７４８０—２００８

飼料中黃曲霉毒素犅１的測(cè)定

酶聯(lián)免疫吸附法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ＥＬＩＳＡ）方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種飼料原料、配合飼料及濃縮飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)檢出限為０．１μｇ／ｋｇ。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＧＢ／Ｔ２０１９５動(dòng)物飼料試樣的制備（ＧＢ／Ｔ２０１９５—２００６，ＩＳＯ６４９８：１９９８，ＩＤＴ）

３原理

試樣中黃曲霉毒素Ｂ１、酶標(biāo)黃曲霉毒素Ｂ１抗原與包被于微量反應(yīng)板中的黃曲霉毒素Ｂ１特異性抗

體進(jìn)行免疫競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，加入酶底物后顯色，試樣中黃曲霉毒素Ｂ１的含量與顏色成反比。用目測(cè)法或

儀器法通過(guò)與黃曲霉毒素Ｂ１標(biāo)準(zhǔn)溶液比較判斷或計(jì)算試樣中黃曲霉毒素Ｂ１的含量。

４試劑和材料

除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。

４．１黃曲霉毒素Ｂ１酶聯(lián)免疫測(cè)試盒中的試劑

注意：不同測(cè)試盒制造商間的產(chǎn)品組成和操作會(huì)有細(xì)微的差別，應(yīng)嚴(yán)格按說(shuō)明書要求規(guī)范操作。

４．１．１包被抗黃曲霉毒素Ｂ１抗體的聚苯乙烯微量反應(yīng)板。

４．１．２樣品稀釋液：甲醇蒸餾水（７＋９３）。

４．１．３黃曲霉毒素Ｂ１標(biāo)準(zhǔn)溶液：１．００μｇ／Ｌ、５０．００μｇ／Ｌ。

警告———凡接觸黃曲霉毒素犅１的容器，需浸入１％次氯酸鈉（犖犪犆犾犗２）溶液，１２犺后清洗備用。為

分析人員安全，操作時(shí)要帶上醫(yī)用乳膠手套。

４．１．４酶標(biāo)黃曲霉毒素Ｂ１抗原：黃曲霉毒素Ｂ１辣根過(guò)氧化物酶交聯(lián)物。

４．１．５０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５磷酸鹽緩沖液的配制：稱取３．０１ｇ磷酸氫二鈉（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、

０．２５ｇ磷酸二氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）、８．７６ｇ氯化鈉（ＮａＣｌ），加水溶解至１Ｌ。

４．１．６酶標(biāo)黃曲霉毒素Ｂ１抗原稀釋液：稱?。埃保缗Ｑ灏椎鞍祝ǎ拢樱粒┤苡冢保埃埃恚蹋穑龋罚盗姿猁}緩

沖液（４．１．５）。

４．１．７０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５磷酸鹽緩沖液：稱?。常埃保缌姿釟涠c（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、２．５ｇ磷酸二

氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）、８７．６ｇ氯化鈉（ＮａＣｌ），加水溶解至１Ｌ。

４．１．８洗滌母液：吸取０．５ｍＬ吐溫２０于１０００ｍＬ０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５