GB/T 18636-2002藍舌病診斷技術(shù)

ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18636—2002藍舌病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforbluetongue2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18636-2002本標準根據(jù)我國近二十年對藍舌病診斷的研究成果和技術(shù)的發(fā)展，參考世界動物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeintentionaldesEpizootic(法）,OIE標準性文件《世界動物衛(wèi)生組織推薦的診斷方法和生物制品標準手冊》2.1.9條“藍舌病"和澳大利亞動物疫病標準診斷方法"Bluetongue"一章而編寫的。本標準引用了GB/T18089—2000《微量中和試驗及病毒分離和鑒定方法》有關(guān)規(guī)定方法藍舌病是由庫蝶傳播、藍舌病病毒引起的侵害反鄉(xiāng)動物的嚴重傳染病。藍舌病病毒系呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬B群成員。國際已知有24個血清型·在血清學(xué)上與環(huán)狀病毒屬相關(guān)病毒有交叉反應(yīng)；該病毒主要引起綿羊發(fā)病和死亡，牛及其他反馬動物常為隱性感染，但可通過媒介昆蟲傳播本病。鑒于該病的診斷和檢疫技術(shù)復(fù)雜，因此應(yīng)建立該病的綜合診斷技術(shù)標準,這是制定本標準的宗旨。本標準規(guī)定的方法·分別適用于病毒分離鑒定、病原檢測、病毒血清型鑒定和抗體檢測等不同需要本標準的附錄A、附錄B都是標準的附錄，附錄C是提示的附錄本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口本標準起草單位：云南省熱帶亞熱帶動物病毒病重點實驗室、農(nóng)業(yè)部動物檢疫所、天津動植物檢疫本標準主要起草人：張念祖、楊承諭、李志華、張富強、胡玉玲、張開禮、馬洪超、趙祥平、向文彬

中華人民共和國國家標準舌病診斷技術(shù)GB/T18636-2002藍Diagnostictechniquesforbluetongue1范圍本標準規(guī)定了藍舌病的診斷技術(shù)和程序本標準適用于藍舌病的診斷和檢疫。4.5、6章用于病毒分離鑒定和病原檢測,7、8章用于病毒的血清型鑒定.9、10章用于抗體檢測。引用標準下列標準所包括的條文·通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時.所示版本均為有效。所有標準都會被修訂·使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。（B/T18089—2000藍舌病微量血清中和試驗及病毒分離和鑒定方法3病毒分離和鑒定3.1器械和設(shè)備3.1.196孔組織培養(yǎng)板(平底，簡稱96孔板),單道微量加樣器（0.5～10,5L～10L.40L～200L.200L～1000L)及滴頭·八道連續(xù)加樣器(50KL.100L..150L.200L)及滴頭。3.1.24C、一20C、一80C冰箱，普通恒溫培養(yǎng)箱及二氧化碳培養(yǎng)箱。3.1.3雞旺開孔器.照蛋箱或雞旺用燈.組織搞碎器及擦鏡紙(高壓滅菌備用)3.1.4超聲波粉碎器，低速離心機,倒置顯微鏡及熒光顯微鏡。3.7試劑與材料3.2.1肝素抗凝血采血管3.2.2細胞：蚊子細胞(C6/36)、倉鼠腎細胞(BHK.)或非洲綠猴腎細胞(Vero)3.2.3細胞培養(yǎng)液及分散液(按常規(guī)配方配制)。3.2.4藍舌病單克降抗體(8A3B6、7D3A2）3.2.5藍舌病熒光抗體3.2.610~11日齡雞壓3.3病毒分離3.3.1樣品的采集和制備見GB/T18089—2000中8.1.3.3.2雞胚接種見GB/T18089-2000中8.2.3.3.3接種細胞3.3.3.1將擒碎的雞胚肝組織離心.2000r/min.10min.取上清液。為避免不必要的“盲傳”.先對待分離材料進行捕獲酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試驗(見第6章)將呈陽性的反應(yīng)材料接種C6/36細胞，每份樣品接兩管(瓶).每管(瓶)接0.2mL。將接種細胞置于30C溫箱培養(yǎng)7d.3.3.3.2吹打接種的C6/36細胞.接種于BHK細胞，每份C6/36接種八管（瓶)BHK。.每管0.2mL.接種的BH