標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 18935-2003 口蹄疫診斷技術(shù)》這一國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了口蹄疫的實(shí)驗(yàn)室診斷方法和技術(shù)要求，旨在為獸醫(yī)、疾病防控機(jī)構(gòu)及相關(guān)部門(mén)提供統(tǒng)一、科學(xué)的診斷依據(jù)，以有效控制和預(yù)防口蹄疫疫情。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

  1. 范圍：明確了本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛、豬、羊等偶蹄動(dòng)物口蹄疫的實(shí)驗(yàn)室診斷，包括臨床癥狀觀察、病原學(xué)檢測(cè)以及血清學(xué)檢測(cè)等方面。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)時(shí)所直接引用或參考的其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)，確保診斷過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)化和一致性。

  3. 術(shù)語(yǔ)和定義：對(duì)口蹄疫病毒、抗原、抗體等專業(yè)術(shù)語(yǔ)進(jìn)行了明確界定，便于讀者準(zhǔn)確理解后續(xù)內(nèi)容。

  4. 診斷原則：強(qiáng)調(diào)了綜合運(yùn)用臨床檢查、病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)等多種手段進(jìn)行診斷的重要性，確保診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。

  5. 臨床診斷：描述了口蹄疫的典型臨床癥狀，如發(fā)熱、口腔和蹄部水泡、跛行等，為初步判斷提供依據(jù)。

  6. 病原學(xué)檢測(cè)：

    • 樣本采集：規(guī)定了不同種類(lèi)動(dòng)物應(yīng)采集的樣本類(lèi)型（如口、蹄部位的分泌物、水泡液、血液等）及其保存運(yùn)輸條件。
    • 病毒分離與鑒定：介紹了細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物接種等方法分離病毒，并通過(guò)免疫熒光試驗(yàn)、RT-PCR等技術(shù)進(jìn)行病毒鑒定的具體步驟和要求。
    • 核酸檢測(cè)：詳細(xì)說(shuō)明了利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等分子生物學(xué)方法檢測(cè)口蹄疫病毒RNA的操作規(guī)程。

  7. 血清學(xué)檢測(cè)：

    • 抗體檢測(cè)方法：包括病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等，用于檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)針對(duì)口蹄疫病毒的特異性抗體。
    • 結(jié)果判定：根據(jù)抗體滴度或反應(yīng)強(qiáng)度，對(duì)樣品進(jìn)行陽(yáng)性、陰性或可疑的分類(lèi)。

  8. 實(shí)驗(yàn)室生物安全：強(qiáng)調(diào)了在進(jìn)行口蹄疫病毒操作時(shí)必須遵守的生物安全措施，以防病毒泄露導(dǎo)致的人畜共患風(fēng)險(xiǎn)。

  9. 質(zhì)量控制：要求實(shí)驗(yàn)室建立嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系，包括內(nèi)部質(zhì)控、外部質(zhì)評(píng)等，以確保診斷結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。

  10. 記錄與報(bào)告：規(guī)定了診斷過(guò)程中所有數(shù)據(jù)和結(jié)果的詳細(xì)記錄要求，以及最終診斷報(bào)告的內(nèi)容格式，確保信息的完整性和可追溯性。

該標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)上述各部分內(nèi)容，為口蹄疫的實(shí)驗(yàn)室診斷提供了全面的技術(shù)指導(dǎo)和操作規(guī)范，有助于提升我國(guó)對(duì)口蹄疫疫情監(jiān)測(cè)、控制和研究的能力。


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  • 2003-01-10 頒布
  • 2003-05-01 實(shí)施
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ICS11.220B41一中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18935—2003口蹄疫診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforfoot-and-mouthdisease2003-01-10發(fā)布2003-05-01實(shí)施華中和人壓發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

GB/T18935-2003口蹄疫(food-and-mouthdisease,簡(jiǎn)稱FMD)是哺乳動(dòng)物的一種接觸烈性傳染病，可引起易感偶蹄獸潛在的嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織CWorldOrganizationforAnimalHealth（英）,OfficeinternationaldesEpizooties(法）.OIE列為A類(lèi)疾病，我國(guó)列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。FMD病毒有7個(gè)血清型·分別為O、A、C、SATI.SAT2、SAT3和Asial。本病臨床上表現(xiàn)為口、舌、唇、鼻、蹄、乳房等部位發(fā)生水泡、破潰形成爛斑。FMD在臨床上不易與其他水泡性疾病(豬水泡病、水泡性疹和水泡性口炎)區(qū)別。本標(biāo)準(zhǔn)的診斷方法參考OIE《診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)》(2000版)的推薦方法·并結(jié)合我國(guó)有關(guān)動(dòng)物防疫法.以及相關(guān)政策和法規(guī)制定的。在技術(shù)上與國(guó)際先進(jìn)技術(shù)保持一致。其中病毒中和試驗(yàn)、液相阻斷-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是國(guó)際貿(mào)易指定試驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B和附錄C是規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：朱彩珠、盧永干。

GB/T18935-2003口蹄疫診斷技術(shù)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus.FMDV)的微量補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、食道探杯查毒試驗(yàn)、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR).病毒中和試驗(yàn)、液相阻斷-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、病毒感染相關(guān)抗原(VIA)瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散（AGID)試驗(yàn)的技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的試驗(yàn)技術(shù)適用于檢測(cè)各種不同樣品中的口蹄疫病毒抗原或抗體微微量補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)2材料2.1.1樣品采集和抗原制備2.1.1.1樣品的采集、保存和運(yùn)送的方法和要求見(jiàn)附錄A2.1.1.2抗原制備：在無(wú)菌室內(nèi)將水泡皮或乳鼠胸體用磷酸鹽緩沖液（PBS)洗凈,用滅菌濾紙吸干后稱重。放在滅菌研缽中先剪碎,后加滅菌石英砂研磨。加磷酸鹽緩沖液（PBS)pH7.4)制成1：4懸液。水泡液也以PBS作1：4稀釋，可與組織懸液合并。室溫浸毒2h以上·或4C冰箱過(guò)夜.3000r/min離心10min。分離出上清液;58C水浴滅活40min。再3000r/min離心10min。取上清液為待檢抗原2.1.2抗體口蹄疫病毒O、A和亞洲-1型，及豬水泡病病毒(SVDV)豚鼠高免血清。2.1.3補(bǔ)體健康成年公豚鼠新鮮血清。加保存液（Richardson'液)后.可4C保存6個(gè)月。使用前滴定效價(jià)2.1.4溶血素免抗綿羊紅細(xì)胞抗血清，使用前滴定效價(jià)2.1.5紅細(xì)胸成成年健康綿羊紅血球。。試驗(yàn)當(dāng)天制備2.8%工作液和敏化紅細(xì)胞。2.1.6主要儀器和器材"U"形底96孔微量滴定板.微量可調(diào)移液器及配套尖頭，轉(zhuǎn)頭經(jīng)改裝可插入微量板的離心機(jī).光電比色計(jì)。2.1.7緩沖液配制方法(見(jiàn)附錄B)2.2預(yù)備試驗(yàn)2.2.12.8%紅細(xì)胞懸液的制備將脫纖的(綿羊)紅細(xì)胞用VBD洗滌3次。每次加5倍于紅細(xì)胞體積的VBD輕搖混勺.1500r/min離心10min。吸去上清液后再加入VBD.反復(fù)3次。最后吸取2.8mL紅細(xì)胞泥加入盛有97.2mLVBD的三角瓶中,充分混勾。取0.5mL紅細(xì)胞懸液;加4.5ml蒸水。對(duì)照管加5mL蒸留水。用波長(zhǎng)62

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