實驗二顯微鏡的使用酵母菌的觀察細菌的單染色及簡單染色

實驗二顯微鏡的使用酵母菌的觀察細菌的單染色及簡單染色第一頁，共二十八頁，2022年，8月28日一、目的要求了解普通光學顯微鏡(復式顯微鏡)的構(gòu)造、基本原理、維護和保養(yǎng)的方法學習并掌握普通光學顯微鏡的正確使用方法第二頁，共二十八頁，2022年，8月28日二、光學顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)機械和支架系統(tǒng)照明系統(tǒng)光學放大系統(tǒng)第三頁，共二十八頁，2022年，8月28日第四頁，共二十八頁，2022年，8月28日三、油鏡的工作原理增加照明亮度增加顯微鏡的分辨率第五頁，共二十八頁，2022年，8月28日顯微鏡的分辨率：顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。

D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2)D：分辨率NA：物鏡的數(shù)值孔徑值：可見光的波長（平均0.55m)n:物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率：鏡口角（即入射角）第六頁，共二十八頁，2022年，8月28日四、顯微鏡的使用方法觀察前的準備顯微鏡的安置光源調(diào)節(jié)根據(jù)個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡右眼看清調(diào)節(jié)左目鏡的視度調(diào)節(jié)圈扳動鏡管，調(diào)節(jié)至瞳孔間距第七頁，共二十八頁，2022年，8月28日顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察（同焦現(xiàn)象）油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺緩慢上升，使油鏡浸在鏡油中。第八頁，共二十八頁，2022年，8月28日顯微鏡用畢后的處理下降載物臺，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量酒精乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的洗液；用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；將鏡體各部分復原。

第九頁，共二十八頁，2022年，8月28日五、思考題用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有何作用？什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？

——P47五、2.（１）（3）（4）第十頁，共二十八頁，2022年，8月28日（二）酵母菌的形態(tài)觀察及死活細胞的鑒別目的要求觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。學習區(qū)分酵母菌死活細胞的實驗方法。第十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日基本原理

美藍是一種無毒性染料.氧化型呈現(xiàn)藍色,還原型呈現(xiàn)無色.用美藍對酵母的活細胞進行染色,代謝活力強的細胞具有較強的還原能力,能使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型.因此,具有還原能力的酵母活細胞為無色,死細胞或代謝能力弱的衰老細胞為藍色.第十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日實驗器材菌種啤酒酵母溶液或試劑

0.1%呂氏堿性美藍染色液儀器或其他用具顯微鏡，蓋玻片，載玻片，濾紙，擦鏡紙。第十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日實驗步驟制片在載玻片中央加一滴0.1%美藍→取菌少許→混勻→蓋上蓋玻片→靜置3min、0.5h觀察用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖根據(jù)顏色鑒別死活細胞活細胞：無色；死細胞：藍色第十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日實驗結(jié)果繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征及出芽生殖方式。記錄染色時間對酵母菌死活細胞數(shù)量的影響P75表Ⅳ-1。第十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日思考題呂氏堿性美藍染色液作用時間的不同，對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。第十六頁，共二十八頁，2022年，8月28日調(diào)節(jié)手動光輪調(diào)節(jié)孔徑光闌手柄聚光器的升降第十七頁，共二十八頁，2022年，8月28日鏡頭復原、手動光輪調(diào)到最低檔第十八頁，共二十八頁，2022年，8月28日細菌的單染色及革蘭氏染色第十九頁，共二十八頁，2022年，8月28日（一）簡單染色法目的要求學習微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細菌的簡單染色法；鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術(shù)?；驹斫柚锢硪蛩兀ㄈ纾杭毎凹毎镔|(zhì)對染料的毛細現(xiàn)象、滲透、吸附作用等）和化學因素（如：正負離子之間的相互吸引等）的作用而進行的。第二十頁，共二十八頁，2022年，8月28日實驗器材菌種土壤樣品分離純化后得到的細菌染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液番紅染液儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。第二十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日操作步驟涂片干燥固定染色鏡檢水洗干燥第二十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日實驗結(jié)果根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細菌形態(tài)圖。思考題（P76五、2.（１）（2）（3））在進行細菌涂片時應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？細菌制片時為什么要進行加熱固定？在加熱固定時應(yīng)注意什么？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？第二十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日（二）革蘭氏染色法目的要求學習并初步掌握革蘭氏染色法；了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。實驗器材菌種枯草芽孢桿菌12-18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物土壤樣品分離純化后得到的細菌第二十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液盧戈氏碘液95%乙醇番紅染色液儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。第二十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日操作步驟采用三區(qū)涂片法制片大腸桿菌枯草芽孢桿菌大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合涂