人成纖維細胞誘導(dǎo)iPSC的實驗研究

河南省科技攻關(guān)打算工程申請書工程名稱：人成纖維細胞誘導(dǎo)多能干細胞的臨床應(yīng)用爭辯工程領(lǐng)域：√社會進展申請單位〔簽章河南省人民醫(yī)院協(xié)作單位：推舉部門〔簽章填報日期：2023年河南省衛(wèi)生廳8 月 28 日“工程申請書”經(jīng)省直主管部門、省轄市〔擴權(quán)縣、市〕科技主管部門、國家級或省級高技術(shù)開發(fā)區(qū)管委會簽署意見并蓋章后一式五份報送?！肮こ躺暾垥钡膬?nèi)容必需真實、所附材料齊全，要求工程爭辯、開發(fā)目標明確，內(nèi)經(jīng)費預(yù)算合理。議〔合同。“工程申請書”中引用的名稱、數(shù)據(jù)等內(nèi)容均應(yīng)標明出處，外文縮寫應(yīng)注明全稱。“工程申請書”中未列但需說明的內(nèi)容可加附頁，相關(guān)技術(shù)文獻、證明文件等材料A44號宋體字。工程名稱工程名稱人成纖維細胞誘導(dǎo)多能干細胞的臨床應(yīng)用爭辯項目概況預(yù)期主要成果形式12□1、論文論著2、爭辯報告3、產(chǎn)品或農(nóng)業(yè)品種4、設(shè)備5、材料6、工藝或方法7、軟件9、其他20150050姓名性別誕生年月學歷從事專業(yè)魏曉霞女1965.10本科生化檢驗副主任技師梁玉女1971.11本科輸血主管技師陳鳳英女1957.08大專臨床檢驗主管技師單位名稱單位性質(zhì)單位名稱單位性質(zhì)河南省人民醫(yī)院9 1、企業(yè)2、科研院所3、高等學校9、其他1 、國有企業(yè)2345、申請單位概況址67、私營企業(yè)897號地所在省級產(chǎn)業(yè)集聚區(qū)聯(lián)系人職工總數(shù)23006558005965674278技術(shù)人員1850中高級技術(shù)人員4500031650主要參與人員

附合作協(xié)議〔合同〕1、企業(yè)2、科研院所3、高等學校9、其他 1、國有企業(yè)2345、67、私營企業(yè)89協(xié)地 址作單位聯(lián)系人 概職工總數(shù)技術(shù)人員中高級技術(shù)人員況主要參與人員姓名

學歷

、Sox2Nanog、Sox2NanoginducedPluripotentStemCell,iPS用于組織損傷修復(fù)及疾病治療，避開異源移植排斥。申請工程的依據(jù)和意義〔說明國家產(chǎn)業(yè)技術(shù)政策，國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)進展水平和趨勢〕申請工程的依據(jù)：2023ShinyaYamanaka將四種基因Oct3/4Sox2c-Myc后稱之為iPS〔Cell2023,126:663-76，將iPSC移植到小鼠皮下組織，可發(fā)育為畸胎瘤〔teratoma〔胚胎干細胞的一個重要性質(zhì)。2023性基因的Nanog，得到了其次代iPSC，能和成鼠形成嵌合體并產(chǎn)生后代〔Nature2023,448:313-7RudolfJaenisch試驗室也利用這四種一樣的轉(zhuǎn)錄因子成果的誘iPS〔NatBiotechnol,2023,25:1177-81ShinyaYamanaka又成果的將人類皮膚iPS〔NatProtoc,2023,2:3081-9Cell,2023,131:861-7JamesThomson試驗室也可以將人類體細胞重設(shè)定變回干細胞Science,2023,318:1917-2。這兩個試驗NatureScience2023iPS的爭辯中，以期能早日把這項技術(shù)應(yīng)用到人身上。2023GeorgeiPS了干細胞爭辯和應(yīng)用的感動人心的進展前景。鑒于干細胞的重大應(yīng)用前景，國家制訂了《國家中長期科學和技術(shù)進展規(guī)劃綱要〔2023-2023143.5其中三個工程〔中科院動物所周琪，上交大醫(yī)學院曾凡一〕已經(jīng)制備了37iPSiPS這是世界上第一次獲得完全由iPSiPSC具有真正的全iPSC226工程爭辯開發(fā)內(nèi)容及目標〔實施方案、技術(shù)關(guān)鍵、技術(shù)路線和技術(shù)經(jīng)濟指標等〕工程實施方案：通過慢病毒介導(dǎo)將源自人臍血干細胞的Oct4、Sox2和Nanog基因?qū)朐醋匀似つw組織的成纖維母細胞，篩選出穩(wěn)定表達上述基因的細胞株，通過指紋圖譜〔fingerprintin、染色體組型分析〔karyotypeanalysi、畸胎瘤形成及向各胚層分化力量鑒定，誘導(dǎo)出多能干細胞〔iPSC工程技術(shù)關(guān)鍵：1GFP報道基因便于檢測轉(zhuǎn)導(dǎo)效率；2率。該載體只含有HIV-193個，即gag、pol、revHIV-1基因組%內(nèi)的工具。利用逆轉(zhuǎn)錄機制構(gòu)建自我失活(SIV)HIV-1來源的載體，一旦轉(zhuǎn)移到靶細HIV-1為根底的第3代慢病毒載體系統(tǒng)的安全性甚至超過了目及動物試驗以確保病毒失活，使用安全。工程技術(shù)路線：采集臍血分別單個核細胞PCRNanog,Oct4,Sox2cDNA裝入LV載體

免疫磁珠分選CD34+hEC流式細胞儀鑒定純度LV載體HSF細胞HEF對照組

HSF-＋＋S＋

HSF-－S－SouthernBlotNanog,Oct4Sox2基因成功NANOG,OCT4和SOX2外表標志，體外分化力量鑒定，畸胎瘤PCR測定分化前后Nanog,Oct4Sox2基因的表達水平實施本工程已具備的條件〔說明已具備的試驗手段、技術(shù)力氣、治理水平、前期科研根底、中試后接產(chǎn)單位及專利獲得等狀況〕本爭辯是不斷跟蹤近幾年干細胞領(lǐng)域的大量爭辯成果，特別是誘導(dǎo)干iPSC的探究。臍血來源充分，免疫磁珠分選操作簡便。我們已經(jīng)成功CD133EGFRvIII體，摸索出一套適合本試驗室的技術(shù)方法，為本課題的順當進展積存了豐富的閱歷和堅實的工作根底。2，所用試驗技術(shù)成熟：本試驗實行的試驗方法〔如免疫組織〔細胞〕化學、流式細胞術(shù)、應(yīng)用多年的經(jīng)典方法或近幾年興的較先進方法，慢病毒載體的構(gòu)建現(xiàn)已商品化，比較成熟；本工程組由把握以上方法的成員組成，都有多年科研工作閱歷。3，我院成立的中心試驗室設(shè)施一流，擁有三個細胞培育室，一個GMP試驗室，三個動物試驗室，有SPF24小時開放使用，科研儀器PCR、測序儀、-80-160化學發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)，以及CO

〔倒置〕顯微鏡、低溫超速離心機、2要的保證作用。4，標準化科學治理：要的促進作用。根底和技術(shù)保障。工程實施的經(jīng)濟、社會和環(huán)境預(yù)期效益本工程社會效益重大：iPSC為誘導(dǎo)性多能干細胞，是當今生命科學的前沿熱點，在生物和醫(yī)學領(lǐng)域具有寬闊的應(yīng)用前景，有望成為實施再生醫(yī)學和細胞治療的重要細胞來源。它不僅對人類生殖發(fā)育、細胞分化、器官生成而且對人類疾病的發(fā)生、損傷修復(fù)、組織器官的再的爭辯及開發(fā)領(lǐng)域包括表皮干細胞抗老化，利用干細胞重建乳房，靶向腫瘤干細胞，研發(fā)抗癌藥，利用干細胞培育出神經(jīng)細胞及肝組織等，對很多重大疾病的治療均可發(fā)揮巨大作用。干細胞的潛在市場浩大，2023年全球干細胞應(yīng)用市場約有3.3億美元，202334%的成長率增長。面對如此重973、863打算，國家自然科學基金，國家發(fā)改委產(chǎn)業(yè)化打算等，大大促進了我國在干細胞領(lǐng)域的進展，縮短了與國際先進水平的差距，有些方面還領(lǐng)先于國外，為我國在生物世紀搶占市場份額，充分挖掘經(jīng)濟效益供給有利條件。預(yù)期目的明確：建立幾株源自人的iPS細胞，為進一步開發(fā)其臨床應(yīng)用價值供給物質(zhì)條件；同時開發(fā)一套轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入培育誘導(dǎo)多能干細胞的技術(shù)平臺，為最終應(yīng)用于疾病治療奠定根底。2023.01-2023.07 2023.01-2023.07 養(yǎng)過程中，鑒定表型，優(yōu)化增殖條件；2023.08-2023.06 設(shè)計引物，從臍血干細胞中擴增Nanog，Oct4Sox2cDNA，并裝配到慢病毒載體中；2023.07-2023.07 轉(zhuǎn)染HSF，誘導(dǎo)iPS細胞，篩選出穩(wěn)定表達上述基因的細胞株，進展干細胞特性鑒定；2023.