毛細血管電泳法在藥物分析中的應用

毛細血管電泳法在藥物分析中的應用摘要：高技毛細管電泳是近年來在分析化學和生物醫(yī)藥學中應用廣泛的一門分離分析技術(shù)。從高效毛細管電泳的類型、特點、原理應臨床樣品分析等方面?綜速了誼項技術(shù)的應,glgt/a,介紹了在不同成份分析中的優(yōu)勢度前哥．在臨床疾藕診斷治療方面的價值。關(guān)鍵詞：高效毛細血管電泳：藥物分析：蛋白質(zhì)分析JournalofZhejiangUniversitySchoolofBiologicalandChemicalEngineeringHangzhou310023Abstract:Capillaryelectrophoresisisahigh-techinrecentyearsinanalyticalchemistryandbio-medicineiswidelyusedinaseparateanalysis.Fromthehighperformancecapillaryelectrophoresistypes,characteristics,principlesofclinicalsamplesshouldbeso.Fully-speedtechnology,theYitermshouldbe,glgt/a,describesthedifferentcomponentsoftheanalysisofdominanceintheformerColumbia.Lotusintheclinicaldiagnosisandtreatmentofdiseasesofthevalue.Keywords:HighPerformanceCapillaryElectrophoresis:PharmaceuticalAnalysis:Proteinanalysis1引言高效毛細管電泳(HighPerformanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)是近年來發(fā)展起來的一種分離,分析技術(shù),它是凝膠電淶技術(shù)的發(fā)展,是高效液相色譜分析的樸競。談技術(shù)可分析的成份小至有機離子,大至生物大分子如蛋白質(zhì),棱硪等?？捎糜诜治龆喾N體漬樣本如血清或血漿，屎，腦脊液及唾j葭等，HPCE分析高效、快速.微量。。根據(jù)其分離樣本的原理設計不同主要分為吼下幾種類型：①毛細管區(qū)帶電濠；毛細管等速電泳；毛婦管胺建電動色譜｛毛細蕾凝膠電泳(Capillarygelelectrophoresis,CGE)；毛細蕾等電聚焦(Capillary；soejectriefocusing,ClEF)目前CZE和MECC用得較多，本文以這兩種方法為倒來說明HPCE的厚理。1技術(shù)介紹1．1基本原理毛細管電泳(CE)又稱高效毛細管電泳(HPEC)，指以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之問淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)的一類液相分離技術(shù)。在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子在電場作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現(xiàn)象叫電泳。cE所用的石英毛細管柱，在pH〉3情況下，其內(nèi)表面帶負電，和溶液接觸時形成了一雙電層。在高電壓作用下，雙電層中的水合陽離子引起流體整體地朝負極方向移動的現(xiàn)象叫電滲。粒子在毛細管內(nèi)電解質(zhì)中的遷移速度等于電泳和電滲流(EOF)兩種速度的矢量和。正離子的運動方向和電滲流一致，故最先流出；中性粒子的電泳流速度為“零”，故其遷移速度相當于電滲流速度；負離子的運動方向和電滲流方向相反，但因電滲流速度一般都太于電泳流速度，故它將在中性粒子之后流出，從而因各種粒子遷移速度不同而實現(xiàn)分離。1．2分離模式CE有8種分離模式，分別為：毛細管區(qū)帶電泳(CZE)、毛細管凝膠電泳(cGE)、膠束電動毛細管色譜(MECC,MEKC)、毛細管等電聚焦(CIEF),毛細管等速電泳(CITP)、毛細管電滲色譜(CEC)、非水毛細管電泳(NACE)、膠束電動毛細管色譜。2HPCE在藥物分析中的應用藥物是指能影響機體生理、生化和病理過程，用以預防、診斷、治療疾病和計劃生育的化學物質(zhì)，在人們的日常生活中是不可或缺的，其質(zhì)量的高低直接關(guān)系到人們的健康和生命安全，所以需要一個全面、合理、科學、安全有效的質(zhì)量監(jiān)測方法來給大家提供一個安全的用藥環(huán)境。近年來國內(nèi)外大量的科學家投入到這項工作中，藥物分析分離的研究工作十分活躍。中藥的成分非常復雜，一般含有糖類、油脂、維生素、蛋白質(zhì)、有機酸、氨基酸、無機鹽、鞣質(zhì)、生物堿、揮發(fā)油等等。目前，主要分析生物堿類、苷類、有機酸類、香豆素類、酚酸類成分。2．1生物堿類生物堿為一類含氮的有機化合物，是中草藥中一類分布較廣的化學成分，存在于自然界(一般指植物，但有的也存在于動物)。已知的生物堿種類已超過3000種，由于其的堿性，即存在一N—基，可調(diào)節(jié)溶液的pH值，使其帶有一定的正電荷，可采用毛細管區(qū)帶電泳(CZE)模式分析。有時可以使用不同的緩沖溶液及不同的pH值或加入適當?shù)挠袡C改性劑，使結(jié)構(gòu)相近的同類生物堿達到分離的目的。王峻梅等以lmm刪｛Ac+2nlmol/LNI"LAc+10inmo1/LB—CD+2lllmol/LSD緩沖液為電泳介質(zhì)，分離電壓14.OKV,用高頻電導法實現(xiàn)了對千金藤屬植物粉防己中粉防己堿和去甲粉防己堿兩種生物堿的測定。陳康等對10個不同產(chǎn)地麻黃樣品中麻黃堿和偽麻黃堿進行定量分析，得出結(jié)論為不同產(chǎn)地的麻黃生物堿含量各相同，且相互間具有良好的精密度和線性關(guān)系。鄭一寧等I習摘要采用高技毛細管電泳電導檢測法分離麻黃堿和偽麻黃堿。初步探討了分離機理，建立了檢測方法。以檸檬酸一檸檬酸鈉為緩沖體系，銅鹽為絡合劑，在pH值為4.5、電壓13.5kV的條件下，鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿得到了較好的分離，加人適量乙醇可改善峰形和分離效果。用該法以水揚酰胺為內(nèi)標，對古鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿的實際樣品進行檢測，回收率9713%—101.1%。2．2有機酸類有機酸成分解離后帶負電荷，可以CZE模式分析，但在中性成分后出峰，分析時間較長。采用高效CZE模式，樣品和標準品在20min內(nèi)得到基線分離。陳帆等對藥用海藻羊棲菜中的氨基酸進行分離測定，用高離子強度Tris硼酸緩沖溶液在優(yōu)化條件下對18種常用的氨基酸進行分離可得到l7個峰（其中亮氨酸和異亮氨酸為1個色譜峰）°Ca。等以CZE—E法分析了滿山紅中原兒茶酸、丁香酸、香草酸等有機酸的含量。2．3苷類苷類又稱配糖體。是糖或糖的衍生物與另一類非糖物質(zhì)通過糖的端基碳原子連接而成的一類化合物。劉峻等采用膠束電動毛細管電泳法對不同來源得黃花倒水蓮提取物中皂昔的含量進行了測定，在內(nèi)可以完成樣品中皂昔的含量測定。陳纘光等采用毛細管電泳安培法測定雞矢藤中熊果苷的含量。CaoYau將毛細管電泳一電化學法檢測器成功成應用于中藥大麻的分析中，測定大麻中種活性成分和種碳水化合物。3前景高效毛細管電泳HPCE已應用到分析、分離的各個方面，且具有高靈敏度、高速、樣品耗用量少、重現(xiàn)性好、自動化等優(yōu)點，隨著商品化儀器的不斷改進，必將在分析領(lǐng)域得到更為廣泛的應用。展望：HPCE技術(shù)當八十年代以來得到迅速發(fā)展，在分析化學和生物醫(yī)藥學中已有廣泛應用t應用最多的是藥物分析，特剮在混合組份中藥分析分離中表現(xiàn)出其獨特的優(yōu)勢，使在臨床體寢1標本的測定方面一直處在研究和探索階段，主要表現(xiàn)在測定標豐的范圍不斷擴大，測定分析條件的不斷完善。預計隨HPCE自動分析儀的推廣和應用，HPCE分析技術(shù)畚遵漸為臨床實驗室的常規(guī)測試所接受，以改善現(xiàn)有的測定技術(shù)。參考文獻羅國安，王義明．毛細管電泳的原理及應用．色譜。1995，13(4)：254．LiuYM，ShenSJ．J．Chromatogr．A，1993，634；329-333王峻梅．毛細管電泳高頻電導法測