標準解讀
《GB/T 27531-2011 病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測方法》是一項國家標準,旨在提供一種通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)來檢測與病毒性腦病及視網(wǎng)膜疾病相關(guān)的病原體的方法。該標準詳細描述了從樣本采集到最終結(jié)果分析的整個過程。
首先,在準備階段,標準規(guī)定了所需試劑、儀器設(shè)備以及實驗室環(huán)境條件的要求,確保實驗?zāi)軌蛟诜仙锇踩蛡€人防護要求的前提下進行。對于樣品處理方面,則涵蓋了不同類型臨床樣本(如腦脊液、血液等)的采集、保存與運輸指南,強調(diào)了避免污染的重要性。
接下來是RNA提取步驟,這是成功實施RT-PCR的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。標準中推薦了幾種常用的高效RNA純化方法,并指出了選擇合適提取方案時需要考慮的因素,比如待測目標物特性、樣本類型等。
然后進入逆轉(zhuǎn)錄過程,即使用特定引物將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA,為后續(xù)擴增做準備。此部分詳細列出了反應(yīng)體系組成、溫度循環(huán)參數(shù)設(shè)置等內(nèi)容,并提醒操作者注意控制好每一步驟的時間和溫度以保證效率和準確性。
在完成cDNA合成后,便可以開始PCR擴增了。標準提供了針對不同病原體設(shè)計特異性引物序列的信息,并說明了如何根據(jù)實際情況調(diào)整反應(yīng)條件(如退火溫度、循環(huán)次數(shù))。此外,還介紹了幾種常用的熒光探針標記方式及其優(yōu)缺點比較。
最后是產(chǎn)物鑒定與數(shù)據(jù)分析。除了傳統(tǒng)的瓊脂糖凝膠電泳外,《GB/T 27531-2011》也鼓勵采用更靈敏快速的實時定量PCR技術(shù)來進行定性和定量測定。對于陽性結(jié)果判斷標準、陰性質(zhì)控品設(shè)置等方面也有明確指示。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2011-11-21 頒布
- 2012-03-01 實施
文檔簡介
ICS11220
B41.
中華人民共和國國家標準
GB/T27531—2011
病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合
酶鏈式反應(yīng)RT-PCR檢測方法
()
ProtocolofreversetranscritionolmerasechainreactionRT-PCR
ppy()
forthepathogenofviralencephalopathyandretinopathy
2011-11-21發(fā)布2012-03-01實施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布
中國國家標準化管理委員會
中華人民共和國
國家標準
病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合
酶鏈式反應(yīng)RT-PCR檢測方法
()
GB/T27531—2011
*
中國標準出版社出版發(fā)行
北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號
2(100013)
北京市西城區(qū)三里河北街號
16(100045)
網(wǎng)址
:
服務(wù)熱線
/p>
年月第一版
20122
*
書號
:155066·1-44037
版權(quán)專有侵權(quán)必究
GB/T27531—2011
前言
本標準按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出
。
本標準由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會歸口
(SAC/TC181)。
本標準起草單位中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局
:。
本標準主要起草人劉葒盧體康何俊強史秀杰鄭曉聰賈鵬葉奕優(yōu)楊錦舜
:、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T27531—2011
病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原逆轉(zhuǎn)錄-聚合
酶鏈式反應(yīng)RT-PCR檢測方法
()
1范圍
本標準規(guī)定了病毒性腦病和視網(wǎng)膜病病原分離和逆
(viralencephalopathyandretinopathy,VER)
轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測方法
(RT-PCR)。
本標準適用于病原的流行病學(xué)調(diào)查診斷檢疫和監(jiān)測
VER、、。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
GB/T6682
出入境動物檢疫采樣
GB/T18088
3縮略語
下列縮略語適用于本文件
。
細胞病變
CPE:(cytopathiceffect)
十六烷基三甲基溴化銨
CTAB:(hexadecyltrimethyammoniumbromide)
焦碳酸乙二酯
DEPC:(diethypyrocarbonate)
溴化乙錠
EB:(ethidiumbromide)
乙二胺四乙酸
EDTA:(ethylenediaminetetraaceticacid)
羥乙基呱嗪乙硫磺酸
HEPES:[4-(2-hydroxyerhyl)piperazine-1-erhanesulfonicacid]
核糖核酸
RNA:(ribonucleicacid)
核酸酶抑制劑
RNasin:(ribonucleaseinhibitor)
病毒性腦病和視網(wǎng)膜病
VER:(viralencephalopathyandretinopathy)
4試劑和材料
41水符合中一級水的規(guī)格用處理以除掉酶
.:GB/T6682,DEPCRNA。
42病毒參考株
.VERV。
43胰酶混合消化液見附錄中
.-EDTA(AA.1)。
44培養(yǎng)液見附錄中
.L-15(AA.2)。
45細胞系用培養(yǎng)液培養(yǎng)
.SSN-1:L-1525℃。
46細胞系用培養(yǎng)液培養(yǎng)
.E-11:L-1525℃。
47逆轉(zhuǎn)錄酶保存不要反復(fù)凍融或溫度劇烈變化
.AMV:20U/μL,-20℃,。
48
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