DNA的粗提取與鑒定(修改版)

DNA的粗提取與鑒定目的要求知道DNA提取原理據(jù)原理設(shè)計DNA提取方法能對DNA進行鑒定掌握本實驗的基本操作方法一、實驗原理

1.血細胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導(dǎo)致細胞膜和細胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。DNA在物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。

3.DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

4.DNA遇二苯胺（沸水?。兂伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

5.注意事項：最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液實驗材料和用具實驗材料：1、新鮮雞血細胞液（5~10ml）；2、體積分數(shù)為95%的冷酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)冷卻24h）；3、蒸餾水；4、質(zhì)量濃度為0．１g/ml的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）

；5、物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0．015mol/L的NaCl溶液；6、二苯胺試劑。實驗用具：鐵架臺；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（100ml，一個）；燒杯；（100ml，一個，50ml、500ml各二個）；試管（20ml，二個）；漏斗；試管夾；紗布。二、方法與過程

1.制雞血細胞液（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得）0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心、分離或靜置沉淀。2.提取DNA。①取血細胞5-10mL＋20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌。②兩層紗布過濾：濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。③原理：血細胞的細胞膜、核膜吸水漲破，玻璃棒快速攪拌，機械加速血細胞破裂。⑴.提取血細胞核物質(zhì)：⑵.溶解核內(nèi)的DNA：濾液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一個方向輕緩攪拌。不要碰底！用吸管吸走上清液抗凝劑DNA含量高防止DNA破碎防止DNA破碎溶解DNA效果好取濾液漲破⑶.析出含DNA的粘稠物：⑷.濾取含DNA的粘稠物：⑸.DNA粘稠物的再溶解：在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現(xiàn)白色絲狀物；當(dāng)絲狀物不再增加時，停止加水（此時NaCl溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。20mL2mol/L的NaCl溶液步驟⑷含DNA的粘稠物在20mL燒杯中一個方向輕緩攪拌3min，使盡可能多的DNA溶解在NaCl溶液。⑹.過濾含有DNA的NaCl溶液：用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟⑸所得的溶液，濾液中含有DNA。取濾渣（析出物）取濾液含雜質(zhì)的DNA⑺.提取含有雜質(zhì)較少的DNA：步驟⑹所得的濾液＋體積分數(shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中析出乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。3.DNA的鑒定：加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL和二苯胺試劑4mL，用玻棒攪拌使DNA溶解，沸水浴5min，待冷卻后觀察溶液是否出現(xiàn)藍色。1.共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌”2.加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、實驗小結(jié)析出DNA效果好DNA細小易碎反應(yīng)條件溶解DNA方法步驟

加入物質(zhì)

目的

1.制備雞血細胞液

檸檬酸鈉溶液

①

2.提取雞血細胞細胞核物質(zhì)

20m1蒸餾水

②

3.溶解細胞核內(nèi)的DNA

2mo1／L的NaCI溶液40mL

③

4.析出含DNA的黏稠物

蒸餾水

④

5.濾取含DNA的黏稠物

多層紗布⑤

6.將DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.過濾含DNA的NaCl溶液

兩層紗布⑦

8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA

冷卻的95％的酒精50mL

⑧

A:(1)向試管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4mL二苯胺試劑

9.DNA的鑒定

B:(1)向試管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺試劑

⑨

①防止血凝固②使血細胞漲破③溶解DNA④使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地析出⑤使含DNA的黏稠物被留在紗布上⑥使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)⑧析出DNA⑨A出現(xiàn)藍色B無變化2.實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2mol／L和0.14mol／L對DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是()。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細胞破裂、增大DNA溶解量D.使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出反饋練習(xí)3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成()A.磚紅色B.橘黃色C.紫色D.藍色4.提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，關(guān)鍵是對雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白質(zhì))。答：D1、在制備雞血細胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（）A.防止凝血B.加快DNA析出C.加快DNA溶解D.加速凝血練一練A2、DNA的溶解度最低時，NaCl的物質(zhì)的量濃度為（）A2mol/lB0.1mol/lC0.14mol/lD0.015mol/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（）A加快DNA溶解的速度B加快溶解雜質(zhì)的速度C減小DNA的溶解度，加快DNA析出D減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出CC4、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不斷加入蒸餾水,在這個過程中DNA的溶解度變化情況分別是A減小;減小B增大;增大C先減小后增大D增大;減小5、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的辦法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水6、與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是A操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加蒸餾水可以同時降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度D當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時，NaCl溶液的濃度可以認為是0.14mol/L7、你能采用其他方法對DNA進行鑒定嗎？用甲基綠染液。結(jié)果絲狀呈現(xiàn)綠色。8、DNA遇二苯胺會染成（沸水浴）A硅紅色B紅色C紫色D藍色D四、實驗原理拓展介紹。1.DNA的釋放。

DNA主要在雞血細胞的細胞核內(nèi)，正常情況下不會釋放出來，蒸餾水對于雞血細胞是一種低滲液，水分可以大量進入血細胞，使之漲破，同時加上玻璃棒快速攪拌的機械作用，加速血細胞的細胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量DNA與RNA、蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，即釋放的不是純凈的DNA，常稱為DNA核蛋白。2.DNA與蛋白質(zhì)分離。在高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解，釋放出的DNA也溶解在高濃度的氯化鈉溶液中3.DNA的析出與獲取。

因為DNA在低濃度（0.14mol/L

）的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質(zhì)的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高濃度的氯化鈉溶液中加入大量蒸餾水稀釋氯化鈉溶液，從而使DNA溶解度下降，蛋白質(zhì)溶解度增高。4.DNA的再溶解。用高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和濃縮。對于除去了蛋白質(zhì)的DNA的氯化鈉溶液，必須再進一步沉淀和濃縮，常用酒精沉淀法。即