Her2 蛋白定量測定試劑盒(ELISA)20160612

北京勝發(fā)興生物技術(shù)有限公司天津勝發(fā)生物技術(shù)有限公司（研發(fā)部）乳癌檢測新時代---------

腫瘤標志物HER2/neu-ECD蛋白的臨床應用1一、乳腺癌與HER2ECD概述二、HER2ECD的臨床應用三、血清HER2ECD檢測與其他檢測相輔相成四、試劑盒簡況及對比實驗（臨床實驗）五、常見問題2

一、乳腺癌與HER2ECD概述1.乳腺癌

1.1我國乳腺癌發(fā)病率

1.2乳腺癌的分子分型2.HER2/neu的結(jié)構(gòu)與功能3.乳腺癌與HER23.1HER2/neu在乳腺癌中的流行度3.2HER2ECD在乳腺癌中的流行度

3

1.1我國乳腺癌發(fā)病率41.腔型A---luminalA(ER+and/orPR+,HER2-

）2.腔型B--luminalB(ER+and/orPR+,HER2+)3.HER2過表達型---(ER-,PR-,HER2+)惡性程度高4.正常乳腺樣型---normalbreast-like5.基底細胞樣型---basal-like(ER-,PR-,HER2-,CK5/6+)1.2乳腺癌的分子分型5

2.HER2/neu的結(jié)構(gòu)與功能屬表皮生長因子受體家族，包括信號肽，胞外區(qū)（ECD），跨膜區(qū)和胞漿區(qū)；胞漿區(qū)具受體酪氨酸激酶活性；

ECD為配體結(jié)合域，與受體結(jié)合后使Her2受體自身磷酸化并激活其酪氨酸激酶活性，最終促進細胞增殖；Her2基因過度表達可導致細胞過度增殖和表型惡性轉(zhuǎn)化，因而與腫瘤形成密切相關(guān)；

在乳腺癌患者中，約有1/4-1/3病人的腫瘤組織為Her2表達陽性。Her2陽性的乳腺癌疾病進展速度快、惡性程度更高，對化療耐藥、化療緩解期縮短，更容易復發(fā)和轉(zhuǎn)移，預后也差。HER-2/neu在正常人體腔上皮、腺上皮和胚胎中均有表達，但無基因擴增。特異性較高。

乳腺癌腫瘤細胞HER2/neu

腫瘤蛋白（p185）增強腫瘤細胞侵襲力HER2/neu

mRNAHER2/neu

原癌基因HER2/neu

細胞膜外區(qū)域

20-30%初發(fā)性乳腺癌HER2/neu陽性3.1HER2/neu在乳腺癌中的流行度轉(zhuǎn)移性乳腺癌HER2/neu陽性高達90%來源：美國腫瘤協(xié)會；200783.2HER2ECD在乳腺癌中的流行度HER2ECD陽性18.5%初發(fā)的乳腺癌43%轉(zhuǎn)移性乳腺癌HER2ECD陽性WalterPCarney,etal.ClinicalChemistry.1579-1598(2003)43%9復發(fā)的乳腺癌患者中HER2ECD陽性率25％50％19％68％局部復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移34％IHC陰性的初發(fā)乳腺癌復發(fā)或轉(zhuǎn)移時HER2ECD轉(zhuǎn)為陽性的比率來源：美國腫瘤協(xié)會；200710HER2/neu檢測應用指南ArchivesofPathologyandLaboratoryMedicine:2007,Jan(131),18–43.

美國臨床腫瘤學會：……對于所有的浸潤性乳腺癌患者，HER2/neu都應該推薦作為常規(guī)檢測……11...…12二、HER2-ECD的臨床應用判定值：15ng/mL（15ug/L）

疾病范圍：乳腺癌，胃癌，腸癌，膀胱癌，肺癌等

評估預后（腫瘤分型、預示生存期等）

預測療效（指導用藥，激素、化療或Herceptin）

監(jiān)測病程（藥效評估、監(jiān)測進展、提示復發(fā)、轉(zhuǎn)移等）

篩查指標（結(jié)合其他標志物）13早期篩查：臨床治療方案的制定：Her2陽性乳腺癌患者對蒽環(huán)類抗生素和紫杉醇有良好的效果，尤其對于赫賽汀有非常好的治療效果。治療過程中病程監(jiān)測：預后的觀察：

提前2-9個月提示復發(fā)的風險產(chǎn)品應用：血清HER2-ECD臨床應用組織活檢診斷

手術(shù)/

新輔助治療淋巴結(jié)陰性/陽性

輔助治療30%

復發(fā)率

(轉(zhuǎn)移性乳腺癌)基礎水平

HER2-ECD檢測結(jié)合組織活檢新輔助治療中檢測血清HER2-ECD水平結(jié)合血清HER2-ECD

檢測，影像學檢查和靶向治療輔助治療中血清HER2-ECD

水平檢測15HER2ECD監(jiān)測:復發(fā)(初發(fā)性乳腺癌)28％30％47％76％HER2CEACA15-3HER2+CEA+CA15-3腫瘤標志物預測復發(fā)的敏感性比較敏感性200例初發(fā)乳腺癌患者，隨訪1－4年。發(fā)現(xiàn)89例復發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌，在這89例復發(fā)患者中HER2ECD敏感性28％，提前4.5月（局部復發(fā)敏感性低于遠處轉(zhuǎn)移，剔除局部復發(fā)，則HER2ECD敏感性31％），CEA30％，提前4.8月，CA15347％，提前4.9月。三者聯(lián)合檢測則敏感性上升到76％16HER2ECD監(jiān)測:復發(fā)(轉(zhuǎn)移性乳腺癌)敏感性腫瘤標志物預測復發(fā)的敏感性比較HER2CA15-3CEAHER2+CEA+CA15-367％54％43％76％DnistrianAM,etal.JClinLigandAssay.215-220(2003)17三、血清HER2ECD檢測與其他檢測相輔相成1.檢測方法影像學：

鉬靶檢測等

病理：免疫組化（IHC）HER2/neu蛋白原位雜交（FISH,DISH，CISH）HER2/neu基因血清：HER2ECD（HER2蛋白胞外區(qū)）2.血清HER2-ECD檢測與病理學檢測比較

優(yōu)劣勢&相關(guān)性181.HER2/neu檢測方法

HER2/neu

mRNAHER2/neu

原癌基因HER-2/neu

細胞膜外區(qū)域1IHC3ELISA2FISHIHC/FISHimagescourtesyofRYOsamura,MD,TokaiUniversitySchoolofMedicine19中醫(yī)：乳腺鉬靶片。大多數(shù)醫(yī)院大夫都選用：大夫手診，乳腺彩超西醫(yī)：乳腺針吸細胞病理學：穿刺成功率高達100%，早期診斷率16.9%，總診斷準確率高達98.6%。醫(yī)院里常用的檢測方法：2.血清HER2-ECD檢測與其他檢測比較21存在一些病例，IHC和FISH得出的均為不確定的結(jié)果，無法對Her2狀態(tài)做出明確判斷，我們的產(chǎn)品為定量檢測，結(jié)果判定明確。經(jīng)IHC或FISH判斷為Her2陽性的患者未必能從靶向治療中獲益，導致這種現(xiàn)象的原因可能是檢測體系本身所造成的假陽性，也可能是Her2的信號通路中還存在其他異常位點。腫瘤異質(zhì)性的存在導致IHC和FISH均無法避免假陰性結(jié)果。部分患者無法提供檢測所需的組織樣本或者組織標本無法滿足進行檢測的基本要求。既往的臨床研究表明，患者病情發(fā)展及治療過程中會發(fā)生Her2狀態(tài)變化，而IHC和FISH均無法對患者的Her2狀態(tài)進行動態(tài)、實時的檢測。酶免疫的方法相對于FISH和IHC的優(yōu)勢2.血清HER2-ECD檢測與病理學檢測比較之相關(guān)性血清HER2-ECD檢測與病理學檢測互為有益補充，從多維度多方向改善乳腺癌疾病管理。23

四、勝發(fā)興生物Her2試劑盒臨床研究

1.試劑盒檢測原理24252.試劑盒性能指標線性范圍：0.16-20ng/mL檢測范圍：0-400ng/mL準確度：85%-115%孔間差：±10%批間差：±10%樣本數(shù)：48孔試劑盒-32-40份

96孔試劑盒-80-88份26

3.臨床研究注：臨床試驗樣品的選擇27以對比試劑為標準，得出如下結(jié)果：陽性符合率＝413/（413+16）×100%＝96.27％陰性符合率＝618/（618+3）×100%＝99.52％總符合率＝（413+618）/1050×100%=98.19％Siemens和北京勝發(fā)興比較（單位：ng/mL）勝發(fā)興Her2試劑盒與西門子化學發(fā)光試劑盒相同樣本結(jié)果比較Siemens和北京勝發(fā)興比較（單位：ng/mL）Siemens和北京勝發(fā)興比較（單位：ng/mL）28勝發(fā)興Her2試劑盒與西門子化學發(fā)光試劑盒檢測相同樣本結(jié)果比較經(jīng)計算，N=1045次，r=0.9727，P=0.000（P<0.001），根據(jù)統(tǒng)計學原理，兩組數(shù)據(jù)高度相關(guān)29臨床研究結(jié)論

結(jié)果顯示同一份血清標本分別用北京勝發(fā)興生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的人Her2/neu蛋白定量測定試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）和已獲得SFDA注冊證的SiemensHealthcareDiagnosticsInc.生產(chǎn)的HER-2/neu蛋白測定試劑盒(化學發(fā)光法)在中國已批準上市的同類產(chǎn)品進行測定的兩組數(shù)據(jù)的相關(guān)系數(shù)和相關(guān)回歸方程均具有顯著性。

綜上所述，臨床應用中兩者之間具有等效性。與對照試劑相比，二者同樣具有檢測性能穩(wěn)定，檢測結(jié)果準確、可靠，操作簡便，檢測時間短等特點，有利于快速及時地報告檢測結(jié)果。適合在國內(nèi)檢驗科或臨床科室的實驗室推廣使用。30五、常見問題病理檢測為陽性，為何試劑盒檢測為陰性？陰性結(jié)果意義何在？兩種方法的檢測對象分別為組織中的HER2/neu與從細胞表面脫落至血清中的HER2-ECD，病理檢測的陽性率較高，特異性則相對較低。二者結(jié)果不會完全一致，只具有一定程度的相關(guān)性，在轉(zhuǎn)移型乳癌中相關(guān)性良好。血清HER2-ECD結(jié)果陰性，可作為初始值保存，之后進行連續(xù)監(jiān)測，作為個體化治療的依據(jù)。病理檢測為陰性，為何試劑盒檢測為陽性？血清中的HER2-ECD可以早于病理檢測幾個月提示潛在轉(zhuǎn)移、復發(fā)的風險。可否用試劑盒來早期篩查？可以結(jié)合其他檢測手段進行早期篩查。與化學發(fā)光法相比有何優(yōu)勢？

經(jīng)典方法，價格較低，且不需要昂貴配套儀器，各級醫(yī)療機構(gòu)均可應用，便于推廣。有哪些應用實例？海軍總醫(yī)院、上海第一人民醫(yī)院、第二炮兵總醫(yī)院、陜西省腫瘤醫(yī)院、醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院、解放軍307醫(yī)院、北京潞河醫(yī)院、北京海斯特臨床檢驗所等。31公司簡介研發(fā)中心：天津勝發(fā)生物技術(shù)有限公司于2011年在天津開發(fā)區(qū)注冊，入住天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，共享研究院大平臺研發(fā)設施，是高科技生物醫(yī)藥產(chǎn)品研發(fā)企業(yè)，2013年認定為國家高新技術(shù)企業(yè)。生產(chǎn)車間：2011年在北京平谷區(qū)注冊成立北京勝發(fā)興生物技術(shù)有限公司，新建10萬級GMP生產(chǎn)車間500平米，廠房1000平米。產(chǎn)品：人表皮生長因子受體2（Her2/neu）檢測試劑盒，國食藥械（準）字2014第3400595號。

人前列腺癌診斷試劑盒、人附睪蛋白4（HE4）檢測試劑盒（卵巢癌）、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（動脈粥樣硬化）、胃蛋白酶原（PGI、PGII）（胃癌）、CEA、AFP、CA125、CA1