《藥物免疫毒性非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）》

一、概述 3二、一般原則 4三、基本內(nèi)容 4(一)證據(jù)權(quán)重分析評(píng)價(jià)策略 4(二)免疫毒性非臨床評(píng)價(jià)關(guān)注點(diǎn) 6 2、免疫增強(qiáng) 73、超敏反應(yīng) 84、自身免疫反應(yīng) 95、免疫系統(tǒng)發(fā)育毒性 9(三)與臨床研究相關(guān)的免疫毒性非臨床試驗(yàn)的時(shí)間安排 10四、附錄 12 3組成，包括固有免疫(非特異性免疫)和適應(yīng)性免疫(特異疫11的風(fēng)險(xiǎn)增加。免疫增強(qiáng)則表現(xiàn)為機(jī)體的免疫應(yīng)答作用上調(diào)，14誘發(fā)抗藥反應(yīng)，后續(xù)再次接觸該藥物也可能導(dǎo)致超敏反應(yīng)。15因此，藥物免疫毒性評(píng)估應(yīng)該納入標(biāo)準(zhǔn)的藥物研發(fā)進(jìn)程中。16藥物和/或代謝產(chǎn)物免疫毒性非臨床研究應(yīng)包括對(duì)免疫系統(tǒng)19本指導(dǎo)原則旨在為藥物免疫毒性非臨床研究評(píng)價(jià)策略20和所涉及的試驗(yàn)方法提供一般性的技術(shù)指導(dǎo)和參考。21本指導(dǎo)原則適用于化學(xué)藥物和治療用生物制品的免疫25藥物免疫毒性非臨床研究可為臨床試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)-獲益分析26提供信息，應(yīng)采用證據(jù)權(quán)重分析評(píng)價(jià)策略，遵循創(chuàng)新藥物研0析設(shè)計(jì)并開(kāi)展非臨床研究，綜合評(píng)估潛在風(fēng)險(xiǎn)-獲益。31藥物免疫毒性非臨床安全性研究一般應(yīng)在經(jīng)過(guò)藥物非32臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范(GLP)認(rèn)證的機(jī)構(gòu)開(kāi)展，并遵守藥33物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范。對(duì)于某些采用特殊的病原體、34特殊的試驗(yàn)設(shè)施(如宿主抵抗力試驗(yàn)等)、特殊指標(biāo)檢測(cè)等非36保證數(shù)據(jù)的真實(shí)、完整、可溯源。37三、基本內(nèi)容38(一)證據(jù)權(quán)重分析評(píng)價(jià)策略41藥物的結(jié)構(gòu)、藥理作用及機(jī)制、適應(yīng)癥、靶點(diǎn)表達(dá)模式、藥42物暴露器官或組織、給藥方案、目標(biāo)用藥人群、臨床研究信43息、同類藥物的數(shù)據(jù)等信息初步評(píng)估免疫毒性風(fēng)險(xiǎn)；可在人44或動(dòng)物細(xì)胞、組織中進(jìn)行的體外或離體試驗(yàn)獲得靶向和非靶47制、目標(biāo)用藥人群、常規(guī)一般毒性研究結(jié)果等因素進(jìn)行證據(jù)48權(quán)重分析，以考慮是否需要開(kāi)展附加免疫毒性研究。如上述50加免疫毒性研究。當(dāng)有兩個(gè)或多個(gè)因素的研究結(jié)果提示藥物55基于整合策略盡可能評(píng)估免疫器官與相關(guān)組織改變、免疫細(xì)免疫活性物質(zhì)等的改變。57應(yīng)基于附錄中推薦的常規(guī)附加免疫毒性研究結(jié)果評(píng)估63獲益分析提示免疫毒性的風(fēng)險(xiǎn)可以接受和/或能夠通過(guò)臨床64風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃予以控制，則可能無(wú)需開(kāi)展進(jìn)一步研究。65(二)免疫毒性非臨床評(píng)價(jià)關(guān)注點(diǎn)67具有潛在誘導(dǎo)免疫抑制的藥物一般通過(guò)直接抑制或殺69調(diào)節(jié)因子等間接作用抑制免疫系統(tǒng)活性。71學(xué)試驗(yàn)和/或常規(guī)一般毒性試驗(yàn)中觀察到的效應(yīng)/反應(yīng)可以直73當(dāng)藥物的潛在免疫抑制作用在已有常規(guī)一般毒性研究中不76T淋巴細(xì)胞依賴性抗體反應(yīng)(TDAR)檢測(cè)；評(píng)估對(duì)關(guān)鍵的免77疫細(xì)胞(如NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、抗原提呈78細(xì)胞等)的數(shù)量、比例和/或功能的影響。當(dāng)藥物擬在臨床中79長(zhǎng)期用藥，應(yīng)考慮開(kāi)展宿主抵抗力研究等附加研究。2致癌性試驗(yàn)。2、免疫增強(qiáng)84具有增強(qiáng)免疫系統(tǒng)活性的藥物一般通過(guò)直接刺激免疫85相關(guān)信號(hào)通路或通過(guò)抑制/激活免疫相關(guān)調(diào)節(jié)因子等間接作，可能引起免疫毒性。物質(zhì)90應(yīng)答存在差異，非臨床動(dòng)物種屬可能無(wú)法充分暴露藥物的潛96對(duì)于潛在引起細(xì)胞因子風(fēng)暴綜合征的治療性藥物，應(yīng)采用未因99不需要進(jìn)行其他形式的檢測(cè)。當(dāng)藥物不直接結(jié)合到參與免疫102具有免疫增強(qiáng)毒性風(fēng)險(xiǎn)的藥物在擬定臨床試驗(yàn)起始劑103量時(shí)，基于毒性耐受終點(diǎn)估算的起始劑量可能過(guò)高，從而帶104來(lái)較大的臨床試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。為確保受試者安全，應(yīng)基于最小預(yù)105期生物學(xué)效應(yīng)劑量(MABEL)或藥理效應(yīng)劑量(PEL)估算106起始劑量。PEL111風(fēng)暴綜合征的治療性藥物，應(yīng)根據(jù)EC值或范圍預(yù)測(cè)引起細(xì)118除了上述靶向或藥理作用相關(guān)的免疫激發(fā)/免疫增強(qiáng)外，119非靶向的免疫刺激可能會(huì)激發(fā)超敏反應(yīng)，如由IgE介導(dǎo)的I介導(dǎo)的IV型超敏反應(yīng)等，可通過(guò)多種方法評(píng)估此種免疫刺122激作用。對(duì)于可明顯增強(qiáng)二次或記憶應(yīng)答且具有潛在長(zhǎng)期作125肥大細(xì)胞脫顆粒，引起類過(guò)敏反應(yīng)。雖然目前尚無(wú)公認(rèn)的能126可靠預(yù)測(cè)上述反應(yīng)的非臨床模型，但仍有必要綜合各項(xiàng)安全133和重癥肌無(wú)力)、藥物引起的伴嗜酸性粒細(xì)胞增多和系統(tǒng)癥DRESS應(yīng)的內(nèi)源蛋白138毒性研究中獲得的相關(guān)數(shù)據(jù)、用藥人群等因素對(duì)潛在自身免139疫反應(yīng)進(jìn)行評(píng)估。405、免疫系統(tǒng)發(fā)育毒性供143支持時(shí)，應(yīng)在藥物生殖和發(fā)育毒性研究或幼齡動(dòng)物研究中對(duì)種屬，146年齡相適應(yīng)，根據(jù)所采用動(dòng)物種屬靈活調(diào)整給藥方案。具體148動(dòng)物增強(qiáng)的圍產(chǎn)期發(fā)育(ePPND)毒性試驗(yàn)中，應(yīng)科學(xué)合理149選擇免疫指征，考察時(shí)間點(diǎn)應(yīng)設(shè)置在發(fā)育的最早節(jié)點(diǎn)。應(yīng)關(guān)153當(dāng)圍產(chǎn)期發(fā)育毒性研究可充分暴露免疫系統(tǒng)發(fā)育毒性155根據(jù)臨床用藥人群等因素需要開(kāi)展幼齡動(dòng)物研究時(shí)，應(yīng)關(guān)注157案，以涵蓋免疫系統(tǒng)的重要發(fā)育期以及入組兒科患者的預(yù)期158年齡。應(yīng)根據(jù)藥物的藥理作用或在成年動(dòng)物中觀察到的免疫162建議采用整合策略，在早期臨床試驗(yàn)開(kāi)展前，盡早在的免164疫相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)信息。對(duì)于免疫增強(qiáng)/激發(fā)類藥物，通常應(yīng)165在早期臨床試驗(yàn)開(kāi)展前進(jìn)行體外細(xì)胞因子釋放等研究，有166助于臨床起始劑量擬定以及設(shè)計(jì)更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床風(fēng)險(xiǎn)管理167計(jì)劃。在臨床試驗(yàn)研究期間，應(yīng)基于前期研究結(jié)果、免疫168毒性風(fēng)險(xiǎn)以及臨床試驗(yàn)類型考慮開(kāi)展更多的免疫毒性研170統(tǒng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。一般應(yīng)在藥物應(yīng)用于大規(guī)模人群(通常為Ⅲ171期臨床試驗(yàn))之前完成常規(guī)的附加免疫毒性研究。如果常175低下?tīng)顟B(tài)的患者，免疫毒性研究也應(yīng)在藥物開(kāi)發(fā)的早期進(jìn)176行。177四、附錄178免疫毒性評(píng)價(jià)方法180常規(guī)一般毒性研究中需包括下表中所列的免疫毒性評(píng)胸腺、脾臟(可選：淋巴結(jié))1821當(dāng)出現(xiàn)無(wú)法解釋的球蛋白水平變化時(shí)，需檢測(cè)免疫球蛋白。1832無(wú)法解釋的外周血細(xì)胞變化或造血相關(guān)的組織病理學(xué)改變提示可能184需要對(duì)骨髓細(xì)胞進(jìn)行評(píng)價(jià)，如骨髓涂片檢查等。1853僅限于經(jīng)口給藥。1864僅限于吸入劑或鼻腔給藥。1871.1血液學(xué)和血液生化188推薦將白細(xì)胞總數(shù)和絕對(duì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)用于免疫毒191其他因素的影響(如肝腎毒性)。1921.2大體病理學(xué)觀察和臟器重量193剖檢時(shí)應(yīng)盡可能評(píng)價(jià)所有淋巴組織的大體病理學(xué)改變。195錄脾臟和胸腺的重量。為盡量減少非嚙齒類動(dòng)物脾臟重量的1981.3組織病理學(xué)檢查199脾臟和胸腺的組織病理學(xué)改變應(yīng)被視為系統(tǒng)免疫毒性200的指征。應(yīng)對(duì)引流淋巴組織或接觸給藥部位(暴露于最高濃201度藥物)的淋巴組織進(jìn)行檢查。經(jīng)口給藥時(shí)這些淋巴組織包202括Peyer’s結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)；吸入給藥時(shí)包括支氣管相關(guān)203淋巴組織(BALT)；吸入或鼻腔給藥(如果可能)時(shí)包括鼻204相關(guān)淋巴組織(NALT)；經(jīng)皮、肌肉、皮內(nèi)、鞘內(nèi)或皮下給207臟可被視為引流淋巴組織。209對(duì)淋巴組織不同區(qū)室的改變進(jìn)行病理學(xué)分區(qū)室半定量描述。2101.4應(yīng)激相關(guān)改變的解釋212劑量能夠?qū)е屡c應(yīng)激相關(guān)的免疫系統(tǒng)的改變(如放大的藥理213學(xué)作用)。這些對(duì)免疫系統(tǒng)的作用可能由皮質(zhì)酮或皮質(zhì)醇釋214放增加或其他介質(zhì)引起。通常觀察到的應(yīng)激相關(guān)的免疫學(xué)改215變包括外周血中性粒細(xì)胞增加、淋巴細(xì)胞減少、胸腺重量減217和淋巴結(jié)的細(xì)胞構(gòu)成的改變。此外，還可能觀察到腎上腺重218量增加和/或腎上腺皮質(zhì)增生的組織學(xué)變化。伴有臨床癥狀219(如體重減輕和活動(dòng)減少)的胸腺重量減輕也?？蓺w因于應(yīng)220激所致。上述指標(biāo)的單獨(dú)改變并不能充分證明出現(xiàn)應(yīng)激相關(guān)225免疫毒性非臨床研究。2262.1免疫細(xì)胞數(shù)量和比例檢測(cè)228用流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué)(IHC)或免疫熒光(IF)方法。229流式細(xì)胞術(shù)為常用的對(duì)全血、外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)或B234和CD8+T淋巴細(xì)胞或其它亞群的數(shù)量及比值。免疫表型分2372.2免疫細(xì)胞功能和免疫活性物質(zhì)檢測(cè)238通常采用離體組織或細(xì)胞模型、體外人源細(xì)胞等模型評(píng)T240細(xì)胞(CTL)活性、自然殺傷細(xì)胞(NK)活性，抗體依賴的241細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)，體外淋243等。244可考慮選擇體內(nèi)、體外多種水平進(jìn)行免疫活性物質(zhì)的檢247至轉(zhuǎn)錄水平的改變等。體外細(xì)胞因子釋放的具體評(píng)價(jià)方法可2522.3免疫系統(tǒng)整體功能檢測(cè)253T細(xì)胞依賴性抗體反應(yīng)(TDAR)評(píng)價(jià)藥物對(duì)巨噬細(xì)胞/254樹(shù)突狀細(xì)胞和/或B細(xì)胞的抗原遞呈功能、輔助T淋巴細(xì)胞257檢測(cè)免疫增強(qiáng)作用。可單獨(dú)開(kāi)展TDAR試驗(yàn)，但從遵循3R259行。可采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、電化學(xué)發(fā)光分析法260(ECLA)或其他方法測(cè)定血