金標(biāo)快速檢測(cè)檢測(cè)試劑卡檢測(cè)技術(shù)專業(yè)課件

--克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的檢測(cè)--農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（石家莊）飼料中添加β-興奮劑的原因β-興奮劑的危害中國(guó)政府監(jiān)控情況β-興奮劑的使用現(xiàn)狀β-興奮劑檢測(cè)方法檢測(cè)方法對(duì)比檢測(cè)方法樣品處理是否需標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)量耗時(shí)優(yōu)點(diǎn)缺陷液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用最復(fù)雜是定量24小時(shí)結(jié)果準(zhǔn)確，檢測(cè)精度高，靈敏度高儀器價(jià)格昂貴且方法操作復(fù)雜，存在檢測(cè)成本高、檢測(cè)周期長(zhǎng)、對(duì)檢測(cè)人員的技術(shù)要求較高，需要較復(fù)雜的樣品處理過(guò)程酶聯(lián)免疫法（ELISA）較復(fù)雜是定性2小時(shí)操作簡(jiǎn)單，使用方便適于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)快速檢測(cè)條無(wú)需處理否定性5分鐘具有良好的特異性，操作簡(jiǎn)單方便，一步測(cè)試，用時(shí)只需5分鐘適于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),，不受環(huán)境約束。確認(rèn)方法篩選方法檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-11-2021豬尿中β-受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法農(nóng)業(yè)部1063號(hào)公告-3-2021動(dòng)物尿液中11種β-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-16-2021動(dòng)物尿液中鹽酸克侖特羅殘留檢測(cè)氣相色譜-質(zhì)譜法NY/T933-2021尿液中鹽酸克侖特羅的測(cè)定農(nóng)牧發(fā)[2021]38號(hào)文件豬尿中鹽酸克侖特羅檢測(cè)方法-酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-6-2021動(dòng)物性食品中萊克多巴胺殘留檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附法NY/T1460-2022飼料中鹽酸克侖特羅的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-18-2021動(dòng)物源食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法農(nóng)業(yè)部1063號(hào)公告-6-2021飼料中13種β-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法克倫特羅金標(biāo)檢測(cè)試劑條

的原理和使用9、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:37:34PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么，說(shuō)明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3一、鹽酸克倫特羅簡(jiǎn)介二、金標(biāo)免疫試劑條原理三、金標(biāo)快速檢測(cè)試劑條檢測(cè)操作步驟四、注意事項(xiàng)五、樣品的提取方法六、其它類金標(biāo)速測(cè)試劑條簡(jiǎn)述9、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:37:34PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么，說(shuō)明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3一、鹽酸克倫特羅簡(jiǎn)介何為“瘦肉精”？鹽酸克倫特羅（ClenbuterolHydrochloride，CL）4-氨基-α-（叔丁胺甲基）-3，5-二氯苯甲醇鹽酸鹽

1、藥理作用克倫特羅又名雙氯醇胺，氨哮素，克喘素，是一種人工合成的β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑（β2-激動(dòng)劑）。白色或類白色的結(jié)晶粉末，無(wú)臭、味苦，熔點(diǎn)161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

具有強(qiáng)效松弛支氣管平滑肌，擴(kuò)張支氣管的作用，常用來(lái)防治哮喘、肺氣腫等肺部疾病。當(dāng)其應(yīng)用劑量達(dá)到治療量的5~10倍時(shí)，又具有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉積減少，因此將其俗稱為“瘦肉精”。β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑（β2-激動(dòng)劑）包括：克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林、西馬特羅、菲諾特羅、氯丙那林、妥布特羅、噴布特羅、奇帕特羅、西布特羅、馬布特羅、溴布特羅、班布特羅等十幾種。我們目前監(jiān)測(cè)的主要是克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇（有快速檢測(cè)方法的）。動(dòng)物種類體增重（%）采食量（%）肉料比（%）肌肉增加（%）脂肪減少（%）牛＋10－5＋15＋10－30雞＋2—＋2＋2－7豬＋4－5＋5≥＋18－20綿羊＋15＋2＋15＋25－25注：+表示增加，－表示減少。β-激動(dòng)劑對(duì)畜禽生長(zhǎng)作用的影響2、克倫特羅（瘦肉精）的同化作用瘦肉精等非法使用途徑1、養(yǎng)殖環(huán)節(jié)：拌入飼料中和飲水中添加，用以增重、增加瘦肉率、改善毛色和體型；2、收購(gòu)、販賣中注射或飲水中添加，導(dǎo)致生豬大量飲水，以保持體重、改善毛色等；3、部分違法分子收羊后，秘密集中飼養(yǎng)20-30天，大劑量添加、飼喂。4、部分違法分子專門加價(jià)收購(gòu)添加、飼喂瘦肉精的肉畜。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中一些非法使用者將其作為一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑添加到動(dòng)物飼料中，用以改善胴體的品質(zhì)；同時(shí)也造成動(dòng)物性食品中鹽酸克倫特羅（瘦肉精）的殘留。當(dāng)人們食用含有鹽酸克倫特羅（瘦肉精）殘留的產(chǎn)品后會(huì)產(chǎn)生一定的中毒癥狀。3、克倫特羅的毒性心血管系統(tǒng)：

心悸、心慌、頭暈頭痛等臨床癥狀

神經(jīng)系統(tǒng)

惡心、嘔吐、肌肉疼痛、肌肉顫抖、興奮、不自主地顫抖、運(yùn)動(dòng)障礙禁忌癥

心臟病、糖尿病、高血壓、青光眼、甲亢

中毒劑量人醫(yī)用藥量：

0.02~0.5μg/kg中毒一般含量：肝臟100~500μg/kg中毒極端含量：肝臟19~5395μg/kg4、代謝和殘留狀況樣品尿液肌肉肝臟眼球含量47±37ng/ml6.1ng/g39ng/g118ng/g與血漿的比例40倍3~15倍20~90倍107倍半衰期第一半衰期：10h第二半衰期：64.8h（2.5d）用藥劑量：16μg/(kg.d)持續(xù)時(shí)間：20d停藥與殘留：停藥時(shí)間肝臟殘留濃度

0d73.8ng/g15d2.4ng/g35d0.7ng/g用藥劑量停藥時(shí)間（d）CL濃度（ng/mL）2mg/kg拌料0.5181.15±7.39185.45±5.26232.11±2.4449.9±1.2383.19±0.27161.15±0.33220.95±0.28250.48±0.21日糧中添加2mg/kgCL停藥后豬尿液中CL濃度變化豬尿中CL的消除曲線5、中毒事件

在互聯(lián)網(wǎng)上用“瘦肉精中毒”搜索，可以查到有6710項(xiàng)的相關(guān)報(bào)道。世界上最早的“瘦肉精”中毒事件于1990年3月在西班牙發(fā)生。我國(guó)則于1998年5月在香港最早出現(xiàn)。1、2021年8月22日，廣東信宜市發(fā)生530人瘦肉精集體中毒事件2、2021年2月浙江省平湖市170余名群眾發(fā)生瘦肉精中毒3、2021年11月2日，北京發(fā)生14人瘦肉精中毒4、2021年11月，廣東河源市發(fā)生484人食用含瘦肉精的豬肉后集體中毒的事件，聞名全國(guó)5、1999年10月，浙江嘉興市發(fā)生57人“瘦肉精”（含鹽酸克倫特羅)集體中毒事件6、1998年，廣東高明市發(fā)現(xiàn)有7例因喝豬肺湯致人中毒事件二、金標(biāo)免疫試劑條原理介紹

利用了免疫層析的技術(shù)特點(diǎn)：1：檢測(cè)速度快，5－15分鐘就可知道結(jié)果。2：不需要任何儀器設(shè)備；3：操作簡(jiǎn)便；4：靈敏度高，可達(dá)到ng級(jí)水平兩種金標(biāo)檢測(cè)試劑：1、金標(biāo)檢測(cè)試劑條2、金標(biāo)檢測(cè)卡1、金標(biāo)檢測(cè)試劑的歷史★1971年由Faulk和Taytor發(fā)明，目前在醫(yī)學(xué)方面得到了日益廣泛的應(yīng)用。★90年代傳入我國(guó)，已經(jīng)用于檢測(cè)HBsAg（乙肝）、HCG（早孕）、HIV（艾滋?。?、梅毒等疾病，具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確和無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，我國(guó)已經(jīng)有幾十家藥廠生產(chǎn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)用的金標(biāo)試紙?！锬壳?，該項(xiàng)技術(shù)已開(kāi)始應(yīng)用于藥物殘留和疫病等的檢測(cè)。幾個(gè)概念：1、什么是抗原

抗原是能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體（免疫球蛋白，Ig）,并能與產(chǎn)生的抗體發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。

醫(yī)學(xué)上重要的抗原有細(xì)菌（如NGH），病毒（如HBV、HCV、HIV），螺旋體（如TP），蛋白質(zhì)（如AFP）等。

2、什么是抗體？

抗體是能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白，是免疫應(yīng)答的產(chǎn)物。它與相對(duì)應(yīng)的抗原能發(fā)生特異性的結(jié)合（如鎖與鑰匙的關(guān)系一樣，一把鑰匙開(kāi)一把鎖），與其他抗原不發(fā)生結(jié)合。

臨床上的免疫學(xué)檢測(cè)方法就是根據(jù)抗原抗體高度特異性結(jié)合的原理設(shè)計(jì)。可以用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體，也可用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原。2、金標(biāo)檢測(cè)技術(shù)的基本原理金標(biāo)免疫檢測(cè)試紙條系統(tǒng)使用一種特殊的多孔膜（NC膜）作為固相載體。該膜具有很強(qiáng)的蛋白吸附功能，抗體抗原吸附于NC膜并經(jīng)干燥處理后即作為固相，可與液相中的相應(yīng)標(biāo)記了膠體金的抗原抗體快速結(jié)合。

在濕潤(rùn)狀態(tài)下，液相中的抗原抗體免疫金可因“燈芯引流現(xiàn)象”作快速定向泳動(dòng)并與固相另一抗原決定簇單抗結(jié)合，形成特異的金標(biāo)記抗體－抗原－抗體紅色沉積線，表現(xiàn)出抗原抗體的特征反應(yīng)。金標(biāo)試紙條工作原理

是將各種反應(yīng)試劑以條帶狀固定在同一試紙條上，待檢標(biāo)本加在試紙條的一端，將一種試劑溶解后，通過(guò)毛細(xì)作用在層析條上滲濾、移行并與膜上另一種試劑接觸，樣品中的待測(cè)物同層析材料上針對(duì)待測(cè)物的受體（如抗原或抗體）發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。層析過(guò)程中免疫復(fù)合物被截留、聚集在層析材料的一定區(qū)域（檢測(cè)帶），通過(guò)可目測(cè)的膠體金標(biāo)記物得到直觀的顯色結(jié)果。而游離標(biāo)記物則越過(guò)檢測(cè)帶，達(dá)到與結(jié)合標(biāo)記物自動(dòng)分離之目的。金標(biāo)免疫檢測(cè)試紙條的結(jié)構(gòu)主體的膜反應(yīng)體系由以下部分組成：

1：高蛋白親和性的高分子纖維素膜（NC膜），為反應(yīng)膜用來(lái)作為系統(tǒng)反應(yīng)的載體和顯示反應(yīng)結(jié)果。

2：選用有較強(qiáng)吸水能力的玻璃纖維，經(jīng)特殊處理后，為反應(yīng)系統(tǒng)提供適合的反應(yīng)條件，并幫助吸水。

3：吸附力較強(qiáng)的玻璃纖維，作為金標(biāo)記物的固相載體。

4：吸收墊，吸水，牽引反應(yīng)物的運(yùn)動(dòng)。

5：塑料基板，作為反應(yīng)體系的支撐物。

金標(biāo)檢測(cè)技術(shù)的基本原理

氯金酸(HAuCl4)在還原劑（檸檬酸）作用下，可使金離子還原成金原子，并聚合成一定大小的金顆粒，形成一種膠體溶液。把這種溶液稱為膠體金。膠體金具有很大的表面積，可將抗原、抗體等蛋白質(zhì)吸附到膠體金顆粒表面。

吸附的機(jī)理是膠體金顆粒表面帶負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固的結(jié)合。用還原法可以方便地把氯金酸制備成各種不同大小直徑的金顆粒、金顆粒的大小不同，顏色也不同。金溶膠顏色藍(lán)紫紫紅紅橙紅橙

吸收峰(nm)220240535525522518

直徑(nm)14797.571.54124.515

一般使用40nm的金顆粒，因?yàn)殪`敏度較高。塑料底板樣品吸收墊玻纖纖維素膜濾紙金標(biāo)試劑條示意圖金顆粒上標(biāo)記抗原克倫特羅分子BSA金顆粒在玻纖上噴抗原標(biāo)記的金顆粒標(biāo)記抗原的金顆粒玻纖在纖維素膜上噴克倫特羅抗體纖維素膜抗體試劑條組裝被標(biāo)記的金顆?？贵w樣品墊濾紙克倫特羅金標(biāo)試紙條的工作原理加入樣品樣品流動(dòng)樣品中沒(méi)有克倫特羅時(shí)：T線金顆粒上的克倫特羅和纖維素膜上的抗體結(jié)合，金顆粒聚集在一起，形成紅色的條帶，結(jié)果為陰性。樣品中有高濃度的克倫特羅時(shí)：由于樣品中克倫特羅的分子數(shù)量很多，大大多于金顆粒上的克倫特羅，抗體上都結(jié)合了樣品中的克倫特羅，而金顆粒不能結(jié)合到抗體上，造成金顆粒穿過(guò)抗體條帶到濾紙上，纖維素膜上為白色。克倫特羅分子T線樣品中含有少量的克倫特羅時(shí)：如5ppb以下樣品中克倫特羅分子較少時(shí)，和交聯(lián)在金顆粒上的克倫特羅互相競(jìng)爭(zhēng)，有少量的金顆粒吸附在纖維素膜上，行成顏色較淺的T線。T線因此，隨著樣品中克倫特羅濃度由高到低，試紙上T線上的顏色由淺到深：>5ppb1ppb0.5ppb0ppb

在醫(yī)學(xué)上使用的各種金標(biāo)試紙條，如艾滋病、乙肝、海洛因等檢測(cè)試紙條，要求非常嚴(yán)格。纖維素膜上除噴上抗體形成T線（Test）外，還噴有形成C線（Control）的抗體。

C線應(yīng)在檢測(cè)過(guò)程中的任何情況下都應(yīng)該出現(xiàn)，否則就證明試紙條在運(yùn)輸、保存等過(guò)程中發(fā)生了意外情況，如高溫、潮濕等，導(dǎo)致試劑條失效。這樣就有了一個(gè)試劑本身質(zhì)量的判定標(biāo)準(zhǔn)，避免由于試劑保存等原因造成的假陽(yáng)性或假陰性等情況的出現(xiàn)。T線C線

這樣，在高濃度的情況下，即使T線不出現(xiàn)，只要C線出現(xiàn)，就知道試劑沒(méi)有問(wèn)題。而如果連C線都沒(méi)有，則可知道是試劑有問(wèn)題，該包裝的試劑應(yīng)該棄用。這樣就避免了假陽(yáng)性的結(jié)果。檢測(cè)原理示意圖樣品

質(zhì)控線

待檢藥物膠體金顆粒

檢測(cè)線膠體金顆粒表面包被有可以識(shí)別待測(cè)藥物的抗體檢測(cè)線包被有藥物-BSA偶聯(lián)物，可以識(shí)別膠體金上的抗體質(zhì)控線包被有可結(jié)合膠體金顆粒的抗體三、克倫特羅金標(biāo)試劑的使用

(杭州迪恩科技公司產(chǎn)品)產(chǎn)品包裝：每個(gè)錫箔袋中裝5個(gè)測(cè)試卡；兩袋干燥劑防止試劑受潮;每盒中裝有12個(gè)錫箔袋，共60個(gè)測(cè)試卡，另外還裝有60個(gè)塑料吸管。產(chǎn)品可于室溫下陰涼避光干燥處貯存，有效期12個(gè)月（無(wú)需在冰箱中保存）。

檢測(cè)閾值：3ng/mL檢測(cè)不需要其它任何的輔助儀器操作步驟

1.

檢測(cè)準(zhǔn)備（1）

根據(jù)檢測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量確定需要的試紙條數(shù)量，并取出；（2）在金標(biāo)試劑空白處寫上樣品編號(hào)。寫編號(hào)2、操作步驟第一步：在室溫下，將測(cè)試卡平放在桌面上；第二步：用試劑包裝中所帶的塑料吸管吸取尿液或其它提取樣品；第三步：在加樣孔中滴三滴樣品，5分鐘內(nèi)判讀結(jié)果。3.

結(jié)果判定陽(yáng)性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無(wú)紫紅色條帶出現(xiàn)。表明尿液中的克倫特羅殘留物大于3ppb。

陰性（-）：兩條紫紅色條出現(xiàn)。一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。表明尿液中不含克倫特羅殘留物或尿液中的克倫特羅殘留物小于3ppb。

陰性陽(yáng)性未加樣操作示意圖結(jié)果判讀陰性（－）：T線和C線都顯色，表示樣品中鹽酸克倫特羅濃度低于檢測(cè)限。陽(yáng)性（＋）：T線無(wú)顯色C線顯色，表示樣品中鹽酸克倫特羅濃度高于檢測(cè)限。無(wú)效：未出現(xiàn)C線，表明不正確的操作過(guò)程或試紙卡已變質(zhì)失效。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，并用新的試紙卡重新測(cè)試。金標(biāo)讀數(shù)儀：美國(guó)產(chǎn)品可以進(jìn)行定性和定量的檢測(cè)分析；體積小，重量輕，便于攜帶；適合于基層應(yīng)用單位使用

四、

注意事項(xiàng)

1.檢測(cè)前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀說(shuō)明書并做好準(zhǔn)備工作；

2.每加完一個(gè)樣品必須更換移液槍吸頭或滴管；

3.本試劑的檢測(cè)結(jié)果僅作為篩查，對(duì)于判定為陽(yáng)性或者可疑的樣本應(yīng)該用另外的檢測(cè)方法（如LC/MS/MS或GC/MS）作進(jìn)一步的確定；

4.本產(chǎn)品提供的各種物品及試劑只供本檢測(cè)試驗(yàn)用，不能作為其他用途；

5.做多個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)，試紙條加入檢測(cè)樣品的量盡量一致；6.在加樣孔中滴三滴樣品，3-5分鐘內(nèi)判讀結(jié)果，不要延長(zhǎng)時(shí)間。7.注意試紙條的干燥保存，避免受潮，切忌冷凍；打開(kāi)包裝后，應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)盡快使用。

8.每條試紙只能使用一次，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用；

9.多個(gè)樣品同時(shí)檢測(cè)時(shí)請(qǐng)做好標(biāo)記；10.本產(chǎn)品僅作為篩查，對(duì)于判定為陽(yáng)性或者可疑陽(yáng)性樣本應(yīng)該用另外的檢測(cè)方法作進(jìn)一步確定（如GC/MS或LC/MS/MS）。五、樣品的提取方法

一、尿液現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)一般無(wú)需前處理過(guò)程，直接點(diǎn)樣。尿液樣品必須收集在潔凈干燥，不含任何防腐劑的塑料尿杯或玻璃容器中。若不能現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，可封樣帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，尿樣在2-8℃冷藏可保存4小時(shí)，長(zhǎng)期保存需冷凍-20℃，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。檢測(cè)前尿樣需回溫到室溫，如尿樣渾濁，需3000rpm以上離心5min后檢測(cè)。二、組織提取方法方法1：

1.1、用刀具粉碎組織樣品

1.2、用適量粉碎后樣品置于離心管中

1.3、于沸水中煮泡5分鐘，取出離心管室溫放置10-15分鐘

1.4、用滴管吸取離心管中的組織滲出液，加1滴在檢測(cè)卡的加樣孔中

1.5、再用滴管加入緩沖液2滴，5分鐘后判斷結(jié)果

方法2：

2.1、用超聲儀或類似儀器將樣品均質(zhì)化（或簡(jiǎn)單用刀具粉碎組織樣品）。

2.2、取約5g均質(zhì)化后的樣品置于10ml試管中。

2.3、加約5ml3%三氯乙酸。

2.4、渦旋混勻后抽提10min（間隔震蕩2-3次）。2.5、離心3000rpm5分鐘。

2.6、用滴管取10滴（約250ul）上清液轉(zhuǎn)移入小離心管中。

2.7、加入1滴（約25ul）1NNaOH調(diào)整PH至7左右。

2.8、用滴管加入3滴提取液在檢測(cè)卡的加樣孔中，5分鐘后判定結(jié)果。

三、飼料提取方法

1、用刀具粉碎飼料樣品；

2、用1g粉碎后樣品置于試管中，加入3ml蒸餾水；

3、50度左右溫浴5分鐘，靜置5-10分鐘使不溶物完全沉淀（為節(jié)省時(shí)間，也可離心加速不溶物完全沉淀）；

4、用滴管加入3滴上清液在檢測(cè)卡的加樣孔中，5分鐘后判斷結(jié)果。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

2021年國(guó)家頒布了GB/T5009.192-2021《動(dòng)物食品中克倫特羅殘留測(cè)定，液相色譜法》六、其它類金標(biāo)速測(cè)試劑條簡(jiǎn)述

萊克多巴胺金標(biāo)檢測(cè)試劑條沙丁胺醇金標(biāo)檢測(cè)試劑條萊克多巴胺金標(biāo)檢測(cè)試劑條

萊克多巴胺(RCT)·鹽酸是一種苯酚胺類β腎上腺素激動(dòng)劑，能選擇性激動(dòng)支氣管平滑肌的β2受體，臨床上普遍用于支氣管哮喘治療。

20世紀(jì)80年代的動(dòng)物試驗(yàn)表明，當(dāng)用藥量為治療劑量的5-10倍時(shí)，牛、豬、羊和家禽等多種動(dòng)物體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)成分由脂肪向肌肉轉(zhuǎn)移，表現(xiàn)為營(yíng)養(yǎng)“再分配效應(yīng)”，可以增強(qiáng)脂肪分解代謝，顯著增加酮體瘦肉率，提高飼料轉(zhuǎn)化率，因此作為一種新型促生長(zhǎng)添加劑可能在畜產(chǎn)品生產(chǎn)中使用，但人類食用含有該殘留的畜產(chǎn)品會(huì)引發(fā)食物中毒。

目前除了美國(guó)批準(zhǔn)其可為豬的飼料添加劑，在歐洲，中國(guó)禁止使用，但事實(shí)上常有非法使用情況的報(bào)道。在體育比賽中，RCT可增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)員、動(dòng)物(如馬)肌肉，提高運(yùn)動(dòng)成績(jī)，國(guó)際奧委會(huì)已將其列為禁用藥物。因此，不論從食品安全檢測(cè)還是體育賽事興奮劑檢測(cè)方面對(duì)萊克多巴胺的檢測(cè)都具有重要意義。技術(shù)指標(biāo)靈敏度：本品肉眼判定靈敏度為5ng/ml。結(jié)合金標(biāo)讀數(shù)儀，判定檢測(cè)靈敏度為1ng/ml。產(chǎn)品可于室溫下陰涼避光干燥處貯存，有效期24個(gè)月。忌冷凍或在已過(guò)有效期后使用。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)2021年國(guó)家頒布了GB/T20219-2021《飼料中萊克多巴胺藥物殘留測(cè)定，采用高效液相色譜》2022年國(guó)家農(nóng)業(yè)部頒布了958號(hào)公告-4-2022《動(dòng)物組織及動(dòng)物尿液中萊克多巴胺殘留檢測(cè)，采用高效液相色譜》檢測(cè)原理萊克多巴胺免疫金標(biāo)速測(cè)卡應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理，樣本中的萊克多巴胺在側(cè)向移動(dòng)的過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測(cè)線上萊克多巴胺－BSA偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中萊克多巴胺含量大于5ng/mL，檢測(cè)線不顯顏色，結(jié)果為陽(yáng)性；反之，檢測(cè)線顯紅色，結(jié)果為陰性。樣品處理豬尿：用干燥、潔凈的離心管或適當(dāng)容器采集50mL左右尿液。如果不立即檢測(cè)，可將尿樣冷凍保存；短期可進(jìn)行冷藏保存，要注意避免腐敗造成失效或污染。如果尿樣出現(xiàn)沉淀或渾濁物，請(qǐng)離心后再檢測(cè)。出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)應(yīng)按法定程序分瓶封裝樣品用于確證法檢測(cè)。樣品處理組織樣（畜禽肉）應(yīng)當(dāng)避光冷藏保存。1、取去脂肪組織樣本于均質(zhì)機(jī)中均質(zhì)1min（10000r/min），2、稱取2.5g均質(zhì)物于15ml離心管中，加入5mL0.1MHCl，振蕩混勻10min；3、加入100μL4MNaOH，劇烈振蕩30秒后，室溫下4000r/min離心15min；4、轉(zhuǎn)移全部上清于離心管中，加入50μL4MNaOH，振蕩混勻，再加入8ml乙酸乙酯，振蕩5min；5、取上層有機(jī)相6mL于試管中，65℃氮(空)氣吹干；6、向吹干的試管中依次加入0.3mL正己烷和0.3mLPBS，充分溶解試管壁上殘留物，靜置分層后，吸取至少100μL下層溶液檢測(cè)。使用步驟測(cè)試前請(qǐng)完整閱讀使用說(shuō)明書，并將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至常溫。從包裝袋中取出試劑板后請(qǐng)盡快使用；用滴管吸取待檢樣品溶液，于加樣孔中滴加3滴，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)；結(jié)果應(yīng)在3~5分鐘讀取，其他時(shí)間判讀無(wú)效；讀取結(jié)果時(shí)，試劑板水平置于觀察者正面。結(jié)果判斷陰性（－）：T線（測(cè)試線，靠近加樣孔一端）比C線（對(duì)照線）深或一樣深，表明樣品中萊克多巴胺濃度低于

5μg/kg或不含萊克多巴胺殘留。陽(yáng)性（＋）：T線比C線淺，或T線無(wú)顯色，表明樣品中萊克多巴胺濃度高于5μg/kg；T線相比C線越淺，表明樣品中萊克多巴胺濃度越高。無(wú)效：未出現(xiàn)C線，可能操作不當(dāng)或試劑板已失效。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，并用新的試劑板重新測(cè)試。注意事項(xiàng)請(qǐng)勿觸摸試劑板中央的白色膜面；請(qǐng)勿使用過(guò)期的試劑板；本公司提供的滴管請(qǐng)勿重復(fù)使用；本公司提供的試劑請(qǐng)勿食用；若需直接檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)用我方提供的PBS緩沖液進(jìn)行配制。特異性使用本產(chǎn)品檢測(cè)100ng/mL沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果顯示為陰性。本產(chǎn)品與鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、磺胺類等藥物無(wú)交叉反應(yīng)。精密度同時(shí)用本產(chǎn)品和萊克多巴胺ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)包括146份陰性樣本和140份陽(yáng)性樣本的286份樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明本產(chǎn)品與萊克多巴胺ELISA檢測(cè)試劑盒的結(jié)果符合率為94.4％。沙丁胺醇沙丁胺醇為選擇性β2受體激動(dòng)劑，能有效地抑制組胺等致過(guò)敏性物質(zhì)的釋放，防止支氣管痙攣。適用于支氣管哮喘、喘息性支氣管炎、支氣管痙攣、肺氣腫等癥。沙丁胺醇不良反應(yīng)較常見(jiàn)的不良反應(yīng)有：震顫、惡心、心率增快或心搏異常強(qiáng)烈。較少見(jiàn)的不良反應(yīng)：頭暈、目眩、口咽發(fā)干。逾量中毒的早兆表現(xiàn)：胸痛，頭暈，持續(xù)嚴(yán)重的頭痛，嚴(yán)重高血壓，持續(xù)惡心、嘔吐，持續(xù)心率增快或心博強(qiáng)烈，情緒煩躁不安等。檢測(cè)原理沙丁胺醇免疫金標(biāo)速測(cè)卡應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理，樣本中的沙丁胺醇在側(cè)向移動(dòng)的過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測(cè)線上沙丁胺醇－BSA偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中沙丁胺醇含量大于5ng/mL，檢測(cè)線不顯顏色，結(jié)果為陽(yáng)性；反之，檢測(cè)線顯紅色，結(jié)果為陰性。樣品處理豬尿：用干燥、潔凈的離心管或適當(dāng)容器采集50mL左右尿液。如果不立即檢測(cè)，可將尿樣冷凍保存；短期可進(jìn)行冷藏保存，要注意避免腐敗造成失效或污染。如果尿樣出現(xiàn)沉淀或渾濁物，請(qǐng)離心后再檢測(cè)。出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)應(yīng)按法定程序分瓶封裝樣品用于確證法檢測(cè)。樣品處理組織樣（畜禽肉）應(yīng)當(dāng)避光冷藏保存。1、取去脂肪組織樣本于均質(zhì)機(jī)中均質(zhì)1min（10000r/min），2、稱取2.5g均質(zhì)物于15ml離心管中，加入5mL0.1MHCl，振蕩混勻10min；3、加入100μL4MNaOH，劇烈振蕩30秒后，室溫下4000r/min離心15min；4、轉(zhuǎn)移全部上清于離心管中，加入50μL4MNaOH，振蕩混勻，再加入8ml乙酸乙酯，振蕩5min；5、取上層有機(jī)相6mL于試管中，65℃氮(空)氣吹干；6