大腸桿菌菌濃的測定及發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)的了解

實(shí)驗(yàn)六大腸桿菌菌濃的測定及發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)的了解目的要求學(xué)習(xí)比濁法測量細(xì)菌數(shù)量的方法；學(xué)習(xí)空氣浴搖床的使用方法；學(xué)習(xí)分光光度計(jì)和離心機(jī)的使用方法；掌握菌濃和菌體干重關(guān)系曲線的測定方法；了解通用發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)。了解發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)的一般流程及注意事項(xiàng)。微生物生長曲線的測定比濁法干重法菌落計(jì)數(shù)法血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法…菌濃OD600與菌干重的對應(yīng)關(guān)系將大腸桿菌用LB培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，在快速生長中期取樣，分別用去離子水（新鮮LB培養(yǎng)基）稀釋至不同濃度，分別測定OD600值。同時(shí)取10mL菌液，8000rpm離心5min后，棄菌液，并用無菌水重懸洗滌、離心2次，80℃下烘干至恒重后，測得干重。菌濃與OD600的對應(yīng)關(guān)系如下圖所示。經(jīng)數(shù)據(jù)擬合，線性良好。大腸桿菌菌濃OD600與菌干重的關(guān)系曲線編號樣品濃度（g/L）OD600離心管空重（g）離心管+菌重量（g）實(shí)驗(yàn)材料菌種：

大腸桿菌。（老師提前準(zhǔn)備菌種和用于菌體干重測定的菌液）儀器和其它物品：722型分光光度計(jì)，空氣浴振蕩搖床，離心機(jī)，比色皿，試管，移液器、槍頭、離心管等。上次滅菌的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵菌種火圈…實(shí)驗(yàn)內(nèi)容分配每4人一組每組建立一個(gè)菌濃和OD600關(guān)系曲線。分光光度計(jì)的實(shí)驗(yàn)空白對照吸光度和透光度吸光度值的適用范圍離心機(jī)的使用離心管平衡!離心效果與轉(zhuǎn)速、時(shí)間的關(guān)系【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.離心管稱重將一干凈15ml離心管，用分析天平準(zhǔn)確稱重并記錄。2.菌液離心將老師準(zhǔn)備好的大腸桿菌搖瓶，準(zhǔn)確吸取菌液10ml加至已稱重的離心管內(nèi)(取液前將培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。與另一加水的相同離心管進(jìn)行配平。8000rpm離心5min，棄去上清，加去10ml離子水重懸菌體，離心。再重復(fù)上述洗滌操作1次。棄去水溶液，將帶有菌體的離心管在80℃烘干至恒重。準(zhǔn)確稱重并記錄?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】3.菌液稀釋將老師準(zhǔn)備好的大腸桿菌搖瓶，吸取一定體積的菌液至試管中，在不同試管中按不同比例進(jìn)行稀釋。（至少5個(gè)水平）4.測定吸光度用未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進(jìn)行光電比濁測定。最好使其光密度值在0.1~0.7之內(nèi)(測定OD值前，將待測定的樣品液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。做一個(gè)以去離子水稀釋的對比試驗(yàn)（以去離子水做空白對照），看肉膏蛋白胨培養(yǎng)基對OD600吸光度的影響。通用發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)在你所見到的實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐上是否找到對應(yīng)功能的部件？發(fā)酵罐實(shí)物圖控制主機(jī)罐體通氣系統(tǒng)空壓機(jī)、通氣管、流量計(jì)…攪拌系統(tǒng)電機(jī)、攪拌槳、擋板…控溫系統(tǒng)升溫、降溫傳感器pH、溫度、溶氧、泡沫…補(bǔ)料系統(tǒng)消泡系統(tǒng)取樣口、接種口發(fā)酵實(shí)驗(yàn)的一般操作過程準(zhǔn)備菌種（大腸桿菌）準(zhǔn)備培養(yǎng)基校準(zhǔn)電極（pH、溶氧…）發(fā)酵罐（含培養(yǎng)基）滅菌接種發(fā)酵及取樣分析（~24h）下罐發(fā)酵取樣記錄表格標(biāo)號發(fā)酵時(shí)間(h)取樣體積(ml)稀釋倍數(shù)OD600菌濃

(g/l)實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容OD600與菌體干重的關(guān)系曲線畫出實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐的示意圖（包括主機(jī)、罐體、通氣系統(tǒng)、攪拌系統(tǒng)、控溫系統(tǒng)、傳感器等）思考題除了比濁法，還有其他什么常用