標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 38477-2020 基因表達(dá)的測定 蛋白印跡法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn),主要規(guī)定了使用蛋白印跡技術(shù)(Western Blotting)來檢測基因表達(dá)的方法。該標(biāo)準(zhǔn)適用于實驗室條件下對生物樣本中特定蛋白質(zhì)的存在與否及其相對含量進(jìn)行定性或定量分析。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容,首先明確了實驗所需的主要試劑和材料,包括但不限于抗體、封閉液、洗脫緩沖液等,并強(qiáng)調(diào)這些物質(zhì)的質(zhì)量直接影響最終結(jié)果準(zhǔn)確性。接著詳細(xì)描述了樣品制備過程,從細(xì)胞裂解到蛋白質(zhì)提取再到凝膠電泳分離,每一步驟都有具體的操作指南和技術(shù)參數(shù)要求。
對于核心步驟——轉(zhuǎn)膜與免疫反應(yīng),文件中不僅給出了推薦使用的設(shè)備類型及操作條件,還特別指出了影響因素如溫度、時間以及抗體稀釋比例等關(guān)鍵控制點。此外,關(guān)于信號檢測部分,《GB/T 38477-2020》也提供了多種方法供選擇,并說明了各自優(yōu)缺點及適用范圍。
在數(shù)據(jù)處理方面,標(biāo)準(zhǔn)建議采用合適的軟件工具來進(jìn)行圖像采集與分析,并提醒研究者注意背景扣除、條帶強(qiáng)度測量時可能遇到的問題。同時,對于如何評估實驗重復(fù)性和可靠性也有相應(yīng)指導(dǎo)原則。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2020-11-19 頒布
- 2020-11-19 實施
文檔簡介
ICS07080
A21.
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T38477—2020
基因表達(dá)的測定蛋白印跡法
Determinationofgeneexpression—Westernblot
2020-11-19發(fā)布2020-11-19實施
國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布
國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
GB/T38477—2020
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口
。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位河北醫(yī)科大學(xué)中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院河北省食品檢驗研究院中國科學(xué)院遺傳與發(fā)
:、、、
育生物學(xué)研究所農(nóng)業(yè)資源研究中心中國醫(yī)科大學(xué)河北師范大學(xué)
、、。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人呂品馬愛進(jìn)張巖趙偉東曹鵬秀趙美丞王寧
:、、、、、、。
Ⅰ
GB/T38477—2020
基因表達(dá)的測定蛋白印跡法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用蛋白印跡法測定基因表達(dá)的方法原理試劑或材料儀器設(shè)備測
(Westernblot)、、、
定步驟和結(jié)果分析
。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于動植物組織或體外培養(yǎng)細(xì)胞目的基因表達(dá)測定
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
GB/T6682
3術(shù)語定義和縮略語
、
31術(shù)語和定義
.
下列術(shù)語和定義適用于本文件
。
311
..
基因表達(dá)geneexpression
將儲存在分子中的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子的過程
DNA,。
32縮略語
.
下列縮略語適用于本文件
。
牛血清白蛋白
BSA:(BovineSerumAlbumin)
增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光
ECL:(EnhancedChemiluminescence)
十二烷基硫酸鈉
SDS:(SodiumDodecylSulfate)
十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳
SDS:-(SodiumDodecylSulfate-PolyacrylamideGel
Electrophoresis)
緩沖鹽溶液
TBS:Tris(TrisBufferedSaline)
吐溫緩沖鹽溶液
TBST:-20/Tris(Tween-20/TrisBufferedSaline)
4原理
分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)印膜上后先用抗目的蛋白質(zhì)的一抗與轉(zhuǎn)印膜上的蛋白質(zhì)反
SDS,
應(yīng)然后利用帶標(biāo)記的二抗與一抗反應(yīng)最后根據(jù)二抗標(biāo)記物的特性檢測微量蛋白質(zhì)
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