肺炎支原體明膠顆粒凝集試驗及其臨床應(yīng)用

關(guān)于肺炎支原體明膠顆粒凝集試驗及其臨床應(yīng)用第一頁，共四十六頁，2022年，8月28日直徑50-300nm、無細(xì)胞壁,能通過細(xì)菌濾器肺炎支原體的一端有一種特殊的末端結(jié)構(gòu)（terminalstructure），能使支原體粘附于呼吸道粘膜上皮細(xì)胞表面，與致病性有關(guān)。

肺炎支原體

（mycoplasmsapneamoniae,MP）第二頁，共四十六頁，2022年，8月28日肺炎支原體肺炎肺炎支原體肺炎又稱原發(fā)性非典型性肺炎支原體肺炎全年均可發(fā)病，以秋冬季多見。它由急性期患者的口、鼻分泌物經(jīng)空氣飛沫傳播，引起呼吸道感染。其發(fā)病主要與室內(nèi)活動增加及密切接觸有關(guān)。支原體感染也可表現(xiàn)為咽炎、氣管支氣管炎第三頁，共四十六頁，2022年，8月28日臨床表現(xiàn)及實驗室檢查潛伏期1-3周起病形式多樣，多數(shù)患者僅以低熱、疲乏起病部分患者可以突發(fā)高熱并伴有明顯的頭痛、肌痛、惡心等全身中毒癥狀呼吸道癥狀以干咳最突出，常持續(xù)4周以上，多伴有顯著咽痛，偶有胸痛、痰中帶血；呼吸道以外的癥狀中，以耳痛、麻疹樣或猩紅熱樣皮疹較多見陽性體征以顯著的咽部充血和耳鼓膜充血較多見外周血白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞比例多正常，有些患者可升高第四頁，共四十六頁，2022年，8月28日常用方法1.冷凝集試驗2.補體結(jié)合試驗(CFT)3.間接血凝試驗(PHA)4.明膠顆粒凝集試驗(PA)5.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）6.金標(biāo)快速檢測7.其它方法：間接免疫熒光試驗（IFA）、乳膠凝集試驗（LA）、免疫印跡測定（WB）、黏附抑制試驗、放射免疫沉淀試驗、補體介導(dǎo)的殺傷試驗等第五頁，共四十六頁，2022年，8月28日常用方法比較冷凝集試驗：冷凝集素是對Mp最早的體液反應(yīng)，50%的病人在Mp感染第2周時的滴度可達到1:32以上，而6周內(nèi)即降至感染前的水平。冷凝集試驗雖然簡便、快速，但它不是針對Mp的特異性試驗，多種其他微生物感染（如EB病毒、巨細(xì)胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病時冷凝集素滴度均可升高。同時，該試驗的敏感性也只有50~60%，對于12歲以下的兒童其敏感性則更差補體結(jié)合試驗(CFT)：十幾年前，CFT仍是Mp血清學(xué)試驗的標(biāo)準(zhǔn)方法，但越來越多的研究表明該方法的敏感性和特異性都不夠高。CFT所用的抗原為Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，它可與人類、細(xì)菌及植物的某些抗原表位發(fā)生交叉反應(yīng)（如腦膜炎時，CFT滴度可明顯升高）。CFT測定的主要是IgM，對IgG不很敏感，導(dǎo)致其整體敏感性偏低。第六頁，共四十六頁，2022年，8月28日間接血凝試驗(PHA)：將提純的Mp抗原連接到紅細(xì)胞（禽類或羊）上，與血清中的抗Mp抗體可發(fā)生凝集反應(yīng)。該試驗的敏感性和特異性均明顯優(yōu)于CFT。PHA不能區(qū)分抗體的類型，因此單份測定出現(xiàn)低滴度的抗體陽性結(jié)果并不能確定是既往感染還是新近感染。最好能間隔2~3周再采取第2份血樣進行測定，觀察抗體滴度是否有4倍以上的增加（血清轉(zhuǎn)化）。單次測定出現(xiàn)高滴度抗體陽性（大于1:8）也有助于對Mp新近感染的判斷明膠顆粒凝集試驗(PA)：其原理與間接血凝試驗基本相同，只是用人工合成的明膠顆粒取代了紅細(xì)胞作為凝集試驗的載體，從而使結(jié)果判定更清晰，靜置穩(wěn)定性更好，非特異性反應(yīng)大大減少，檢測的敏感性也有了進一步提高（對IgM和IgA更敏感）第七頁，共四十六頁，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：是目前Mp血清學(xué)試驗中常用的方法，可分開檢測IgM、IgG和IgA，敏感性和特異性均能達到較高的水平。雖然單次測定IgM（或IgA）陽性即可基本判定為Mp的新近感染，但陰性時卻無法排除感染的可能性。IgG一般須進行間隔2周以上的雙份血清測定，有4倍以上滴度上升時才能做出Mp新近感染的診斷。因此，在ELISA測定中應(yīng)強調(diào)同時檢測IgG和IgM（或IgA），且最好能對間隔2周以上的雙份配對血清進行抗體轉(zhuǎn)化情況的測定，從而做出明確的診斷金標(biāo)快速檢測：具有簡便、快速的優(yōu)點。但也同樣應(yīng)強調(diào)IgG和IgM的同時檢測。由于只能進行定性測定，無法觀察血清轉(zhuǎn)化情況，限制了其在臨床診斷中的價值其它方法：間接免疫熒光試驗（IFA）、乳膠凝集試驗（LA）、免疫印跡測定（WB）、黏附抑制試驗、放射免疫沉淀試驗、補體介導(dǎo)的殺傷試驗等第八頁，共四十六頁，2022年，8月28日第九頁，共四十六頁，2022年，8月28日第十頁，共四十六頁，2022年，8月28日被動凝集法原理：是用表面吸附了MP抗原的明膠顆粒代替動物紅細(xì)胞制成致敏人工明膠顆粒，再與人血清中存在的MP抗體產(chǎn)生凝集反應(yīng)第十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日第十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日被動凝集法優(yōu)點1.操作簡單快速，設(shè)備要求低，結(jié)果判讀容易，過夜后判讀不發(fā)生顯著變化2.消除紅細(xì)胞載體引起的非特異性凝集3.特異性，靈敏度較高4.血清MP抗體滴度與MP感染者病情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)第十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日被動凝集法缺點1.檢測總抗體2.該實驗用于檢測MP抗體，而非直接檢測MP，因而陽性結(jié)果并不能確診是MP感染3.假陰性第十四頁，共四十六頁，2022年，8月28日SERODIA-

MYCOII操作步驟第十五頁，共四十六頁，2022年，8月28日第十六頁，共四十六頁，2022年，8月28日第十七頁，共四十六頁，2022年，8月28日被動凝集法判定：1.顆粒狀呈紐扣狀聚集，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形。2。粒子形成小環(huán)狀，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形。3.粒子環(huán)明顯變大，其外周邊緣不均勻且雜亂地凝集在周圍。4。產(chǎn)生均一的凝集，凝集粒子在底部整體上呈膜狀延展。第十八頁，共四十六頁，2022年，8月28日第十九頁，共四十六頁，2022年，8月28日陽性對照:MP抗體滴度為1:320第二十頁，共四十六頁，2022年，8月28日第二十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日第二十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日第二十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日第二十四頁，共四十六頁，2022年，8月28日MP感染的血清學(xué)及臨床診斷MP感染判斷標(biāo)準(zhǔn)：1.MP急性感染判斷標(biāo)準(zhǔn)：①急性期MPlgM抗體≥1：40，且恢復(fù)期較急性期血清抗體效價上升4倍或4倍以上。②急性期抗體陰性（lgM抗體＜1：40），恢復(fù)期血清抗體≥1：80.2.MP既往感染判斷標(biāo)準(zhǔn)：雙份血清抗體效價均明顯增高，但恢復(fù)期較急性期血清抗體效價升高小于4倍。3.MP帶菌者判斷標(biāo)準(zhǔn)：雙份血清抗體效價均為陰性，DNA為陽性。只作MP定性試驗不作滴度檢測是不可取的，其無法區(qū)分近期MP急性感染和既往感染，無法區(qū)分帶菌狀態(tài)和患者，容易導(dǎo)致過度治療。第二十五頁，共四十六頁，2022年，8月28日MP的免疫性人類對Mp無先天免疫性，尚無可實際應(yīng)用的有效疫苗，感染后也不能產(chǎn)生完全的保護性免疫Mp特異性的IgM抗體在發(fā)病后不久即可出現(xiàn)升高，1~4周內(nèi)達到峰值，然后在幾個月內(nèi)逐漸下降到?jīng)]有臨床意義的水平。急性感染后IgM的持續(xù)時間在不同個體中差異較大。兒童的IgM反應(yīng)一般強于成人，約50%的成人患者無法在Mp感染后測到IgM的升高IgG的出現(xiàn)時間晚于IgM，5周左右達到峰值，上升速度較慢且在體內(nèi)的持續(xù)時間較長（4年左右），但在感染數(shù)月后就會下降到較低水平。有些兒童無法測得明顯的IgG反應(yīng)特異性IgA的免疫反應(yīng)與IgM類似，但其在成年人尤其是老年人中的反應(yīng)水平更高第二十六頁，共四十六頁，2022年，8月28日血清學(xué)診斷MP感染后可誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，1周后抗體產(chǎn)生，3~6周可達高峰，2~3個月后逐漸下降，故應(yīng)在發(fā)病7d后采血檢測。通常檢測滴度陽性起點為1：40，但在臨床診斷上因隱性感染存在，此值多無臨床意義。一般認(rèn)為成人1：80~1：160或以上對臨床診斷有意義，兒童亦為1：160以上有意義。第二十七頁，共四十六頁，2022年，8月28日MP感染的臨床診斷（1）MP感染：血清學(xué)檢測結(jié)果陽性，有發(fā)熱及呼吸道感染癥狀，無明顯臟器所累。（2）MP肺炎：有發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難及肺部啰音，胸片有片狀影或相應(yīng)影像學(xué)改變，MP血清學(xué)檢測陽性。（3）MP肺炎肺外并發(fā)癥（肺外臟器受累）：除明確診斷為MP感染外，同時可累及心、腦、腎、淋巴、血液系統(tǒng)等，并出現(xiàn)相應(yīng)受累癥狀與體征，如出現(xiàn)胸腔積液、MP腦炎、感染后腎炎、心肌炎、血小板減少性紫癜，有者呈多臟器所累。MP血清學(xué)檢測陽性。（4）MP血癥：MP血培養(yǎng)費時2~3周，對實驗室技術(shù)要求較高。第二十八頁，共四十六頁，2022年，8月28日對肺炎支原體的治療原則對僅有上呼吸道癥狀的肺炎支原體感染，不需要進行抗生素治療支原體肺炎雖然有一定的自限性，但仍應(yīng)進行抗生素治療以縮短病程并減少其傳染性在非典型性肺炎的病原體未完全確定時，可以采取一些經(jīng)驗用藥，對Mp有效的藥物也能覆蓋一些其他病原體（非病毒類）抗生素的使用：首選為大環(huán)內(nèi)酯類，也可選用四環(huán)素類（老年人）和喹諾酮類。Mp對β-內(nèi)酰胺類抗生素天然耐藥，磺胺類對Mp也沒有作用抗生素使用一般應(yīng)持續(xù)7~10天，但口服用藥延長至14~21天也是合適的除使用抗生素外，還應(yīng)采取一些對癥治療措施（止咳藥、退燒藥、止痛劑等）第二十九頁，共四十六頁，2022年，8月28日MP肺炎的藥物治療MP肺炎應(yīng)首選大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。輕中度MP肺炎可以口服大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，包括紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等。重度MP肺炎在疾病進展時期可以靜脈用藥，但應(yīng)適用時轉(zhuǎn)變?yōu)槲改c道用藥，采用抗生素序貫療法。第三十頁，共四十六頁，2022年，8月28日阿奇霉素的特點阿奇霉素是一種半合成的氮雜15元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，其具有獨特的藥代動力學(xué)特征，即呈現(xiàn)多房室模型，有良好的組織滲透性，組織濃度高，在細(xì)胞和組織內(nèi)的濃度可超過血液濃度的10~100倍，炎癥部位較非炎癥部位濃度高6倍。這種優(yōu)化的體內(nèi)分布十分有利于致病菌的抑制和清除作用，它還能對MP發(fā)揮其一致蛋白合成的獨特作用。阿奇霉素胃腸都反應(yīng)輕微，大量以原型由糞便排出，清除緩慢而部明顯損害肝臟功能。阿奇霉素半衰期長，具有顯著的抗生素后效應(yīng)，由于組織對阿奇霉素的攝取快而釋放慢，故其血漿半衰期接近70小時。臨床上使用阿奇霉素3天即可停藥，但在細(xì)胞內(nèi)和被釋放出的阿奇霉素濃度于5~7天內(nèi)仍超出常見敏感細(xì)菌的最小抑菌濃度，而繼續(xù)保持抗菌活性。阿奇霉素具有口服劑量小，口服次數(shù)少及療程相對短的優(yōu)點。第三十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日治療方法輕癥患兒一般口服為主，可選擇阿奇霉素、羅紅霉素或紅霉素，阿奇霉素10mg/（kg·d），每日1次，服3d停4d。中至重度支原體肺炎，靜脈給藥，選擇阿奇霉素，10mg/（kg·d），每日1次，用5d停3d（或用3d停4d）為一個療程，總計2-3個療程或更長。支原體血癥主要表現(xiàn)為持續(xù)高熱或馳張高熱，肺部可見大片狀陰影，血支原體抗體陽性，選擇紅霉素靜滴，劑量同前，應(yīng)用3-7d，若支原體血癥已控制，即體溫下降，可改為阿奇霉素靜滴或口服，總療程4-6周。應(yīng)用阿奇霉素的過程中，要取得家長的知情同意。第三十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日混合感染（二重感染）已診斷為MP感染或先后混合其他病原（合并細(xì)菌或病毒感染），MP感染易引起EB病毒感染（傳染性單核細(xì)胞增多）或二者混合感染，二者不僅臨床癥狀相似，且都可疑引起血清嗜異凝集試驗陽性反應(yīng)，除給予大環(huán)內(nèi)酯類藥物外，應(yīng)同時給予抗炎、抗病毒治療第三十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日總結(jié)SERODIA-

MYCOII凝集試驗定量檢測的是肺炎支原體特異性抗體含量，包括IgG和IgM抗體。在診斷方面，由于有部分患者、特別是約50%的成人患者無法在Mp感染后測到IgM的升高；而MpIgG抗體在感染數(shù)月后仍會下降到較低水平。IgG和IgM抗體滴度達到一定高度時，表現(xiàn)出較好的臨床診斷價值。在具有發(fā)熱、咳嗽等癥狀的上感及非典型肺炎患者中，Mp具有較高的感染率，Mp感染的實驗室診斷在臨床具有廣泛的應(yīng)用價值。

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MYCOII檢測陽性結(jié)果對臨床Mp感染的診斷與治療具有令人滿意的指導(dǎo)意義第三十四頁，共四十六頁，2022年，8月28日病例分析患兒，女，8歲，主因咳嗽伴發(fā)熱4天，加重1天于6-4入院。4天前患兒無明顯誘因出現(xiàn)發(fā)熱，體溫最高達39.5℃，伴咳嗽，表現(xiàn)為陣發(fā)性咳嗽，干咳，晚上重，院外予口服“阿莫西林、頭孢克肟、肺力咳”2天，靜點“頭孢呋辛、炎琥寧（用量不詳）”1天治療，效果不明顯，咳嗽加重入院。6-4門診胸片示:右上肺炎,右肺上肺不張第三十五頁，共四十六頁，2022年，8月28日既往體健，無過敏史，無傳染病接觸史，預(yù)防接種按序。入院查體：體溫39℃，神清，精神尚好，熱性病容，口周無發(fā)紺，呼吸促，咽充血，雙側(cè)扁桃體Ⅱ度腫大，充血，呼吸35次/分，右肺上呼吸音減低，心腹未見異常。第三十六頁，共四十六頁，2022年，8月28日初步診斷：支原體肺炎第三十七頁，共四十六頁，2022年，8月28日治療6-4紅霉素20mg/kg/日iv