通用課件病原微生物樣本的采集、保存與運輸定稿

病原微生物樣本的采集、保存與運輸病原微生物樣本病原微生物檢驗中，樣本采集、保存和運輸?shù)囊?guī)范化是及時、準確地提供微生物感染（污染）信息的基礎(chǔ)，對突發(fā)公共衛(wèi)生事件的應(yīng)急處置起著至關(guān)重要的作用。樣本的質(zhì)量與樣本的采集、保存、運輸密切相關(guān)，樣本采集、保存不當可導(dǎo)致假陰性、假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。因此，正確地采集、保存、運輸樣本是保證實驗室檢測結(jié)果準確可靠的前提。采集前

言保存運輸病原微生物樣本用于分離培養(yǎng)的臨床樣本，盡量在抗菌藥物使用前采集。樣本采集后應(yīng)立即送至實驗室。一般不超過4h。采集樣本時應(yīng)注意與病程的關(guān)系。

如傷寒病人第1~2周血培養(yǎng)陽性率高，3~4周則大便培養(yǎng)陽性率高，敗血癥高熱寒戰(zhàn)時血培養(yǎng)陽性率高，用藥前血培養(yǎng)陽性率高。注意采樣部位，要在疾病發(fā)生的確切部位采樣，也就是病原菌最多的地方。

如細菌性痢疾的大便，采樣要采取膿血部份送檢。采集的樣本要有足夠的量，否則可能會得到假陰性結(jié)果。應(yīng)采集各種可能作為污染源的食物和環(huán)境樣本，以及各種可能含有病原體的臨床樣本。對微生物檢測樣品，應(yīng)避免采樣時對微生物的殺滅和引入新的抑菌物質(zhì)。

如容器是否有消毒劑的殘留，或使用剛燒灼未冷卻的采樣工具。注意保護目的微生物，同時避免雜菌污染。以棉拭子采集的樣本如咽拭子、肛拭或傷口拭子，宜插入運送培養(yǎng)基或生理鹽水中送檢。做好樣品標記，填寫采樣單。應(yīng)詳細填寫檢樣名稱、來源、采樣時間、采樣方法、患者主要臨床癥狀、檢測項目等，使實驗室能準確及時接種相應(yīng)的培養(yǎng)基和適宜的培養(yǎng)環(huán)境，提高陽性檢出率。根據(jù)不同樣品的性狀，檢驗項目要求，合理保存和運送樣本?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護水平相適應(yīng)的設(shè)備

包括個人防護用品防護材料、器材和防護設(shè)施等

隔離衣、帽、口罩、鞋套、手套、防護眼鏡等具有有效的防止病原微生物擴散和感染的措施具有保證病原微生物樣本質(zhì)量的技術(shù)方法和手段具有掌握相關(guān)專業(yè)知識和操作技能的工作人員基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本突發(fā)疫情標本采集要求根據(jù)對突發(fā)疫情的判斷制定處置策略。以科學(xué)的態(tài)度，本著快速處理的原則，各個工作細節(jié)嚴謹。慎重處理事件，認真對待樣本。采集過程中應(yīng)對樣本的來源、采集過程和方法等作詳細記錄。在采樣時間、采樣部位、樣本采集量的決斷上，目的明確，有的放矢。無目的的大范圍采集樣本，無助于疫情病原的診斷，反而會因為樣本過多導(dǎo)致實驗室檢測時間延長，延誤疫情診斷時機（一般10份左右，10例以下全采）。樣本不可再獲得性，樣本采集量應(yīng)該充分(一式三份：一份用于實驗室檢測，一份用于檢測結(jié)果復(fù)核，另一份保存起來留作原始樣本以備需要)?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本細菌分離樣本盡量在急性發(fā)病期和使用抗生素之前采集病毒分離樣本最好在發(fā)病初期（1-2天）采集病毒抗原檢測樣本應(yīng)在發(fā)病初期和急性期采集血清抗體檢測樣本分別在急性期和恢復(fù)期采集不同疾病的特點和臨床表現(xiàn)，采集標本的種類、檢測目的、采樣時間、采樣要求不盡相同基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本人體：胃內(nèi)容物、血液、尿液、頭發(fā)、指甲、牙齒、尸檢材料、糞便等環(huán)境：水、土壤、氣體、餐具、廚具、食品包裝、奶瓶等食品：成品、半成品、調(diào)料、生鮮原料、跳蚤等媒介：蒼蠅、臭蟲、蜱、螨、老鼠、蟑螂、果子貍、跳蚤等其他：注射器、可疑藥物、動植物等病原菌分離、病毒分離、抗原、核酸檢測：糞便、咽拭子、痰液、尿液、血液、腦脊液、組織樣本病原體的特異性抗體檢測：血清、腦脊液呼吸道傳播疾?。罕?、咽拭子、含漱液、痰液、呼吸道分泌物等。

如流感病毒分離用鼻咽拭子、含漱液應(yīng)在發(fā)病的頭3天采集，采樣前1h患者不要飲水和進食。腸道傳播疾病：糞便、肛拭子等。

如脊髓灰質(zhì)炎病毒分離要求在麻痹后14天內(nèi)采集雙份糞便樣本，且2份樣本間隔24小時以上。自然疫源性疾?。耗X脊液、血液、組織樣本等。

如鼠疫耶爾森菌可以在人類血液、腺腫抽取物、痰液、咽拭子分離到，此外在咽部沖洗物、皮膚拭子或刮取物以及患有腦膜炎病人的腦脊液中均可分離到。進行尸體解剖時，應(yīng)該采集腺腫、肝臟、脾臟以及肺臟樣本。對于腐敗的尸體應(yīng)該抽取骨髓和腦組織?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸樣本來源可采集的樣本和樣品類型病人糞便、血液、尿液、嘔吐物、洗胃液、肛拭子、咽拭子從業(yè)人員糞便、肛拭子、咽拭子、皮膚化膿性病灶樣本可疑食品可疑食品剩余部分及同批次產(chǎn)品、半成品、原料加工單位剩余的同批次食品，使用相同加工工具、同期制作的其他食品使用相同原料制作的其他食品基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集食品制作環(huán)境加工設(shè)備、加工用具、容器、餐飲具上的殘留物或物體表面涂抹樣品或沖洗液樣品；食品加工用水其他剛被稀便污染的尿布、衣服、床單等宿主動物糞便、昆蟲等媒介生物由毒蕈、河豚等有毒動植物造成的中毒，要搜索廢棄食品進行形態(tài)鑒別常見的食品安全事故可采集的樣本和樣品采集類型保存運輸病原微生物樣本基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集細菌性食品中毒的主要檢驗樣本食物中毒細菌常見食品主要檢驗樣本沙門菌肉類、蛋品糞便、食品、血液副溶血性弧菌水產(chǎn)品、醃制品糞便、食品金黃色葡萄球菌肉類、乳品、淀粉制品食品、嘔吐物蠟樣芽胞桿菌米飯、肉、乳、淀粉制品食品、嘔吐物致瀉性大腸桿菌涼拌菜、肉制品糞便、食品椰毒假單胞菌玉米面、銀耳食品、嘔吐物產(chǎn)氣莢膜梭菌肉制品糞便、食品肉毒梭菌堆放牛羊肉、罐頭、香腸、魚、豆制品食品、嘔吐物變形桿菌動物性食品特別是熟肉和內(nèi)臟制品、冷盤食品、糞便、嘔吐物保存運輸病原微生物樣本病原微生物樣本

樣品種類檢驗?zāi)康臉悠妨匡嬘盟治黾爸虏【?gt;5L

液體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200mL

固體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200g

嘔吐物致病菌或毒物分析>50g(mL)

洗胃液致病菌或毒物分析>200mL

腹瀉物致病菌或毒物分析>50g(mL)

血液病原分離、抗體分析>5mL

腦脊液病原分離>2mL

皮損分泌物病原分析滅菌生理鹽水浸泡棉簽涂取基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本咽拭子

采集病人發(fā)病3日內(nèi)的咽拭子樣本，用于病原檢測（病原分離、核酸檢測的陽性率較高）。用壓舌板將舌向下向外壓，用專用拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)適當用力涂抹數(shù)次，應(yīng)避免觸及口腔及舌部，迅速將棉簽放入裝有3-4mL保存液（Hank氏液或生理鹽水）的15mL外螺旋蓋采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽，注明患者的姓名、樣本的種類、采樣時間、采樣人等基本信息。

（5歲以下嬰童采樣時先將拭子用保存液蘸濕，在試管壁擠干后在進行采樣）基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本咽拭子

基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法正確錯誤采集保存運輸病原微生物樣本鼻咽拭子

插入干的拭子到鼻孔深入鼻咽部，

停留片刻，緩慢旋轉(zhuǎn)退出，另一個鼻

孔使用另一個棉簽，將尾部棄去，擰

緊管蓋。基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本含漱液

先讓病人咳嗽，用生理鹽水或自配淡鹽水15mL反復(fù)洗漱咽部1min，直接將洗漱液吐入試管內(nèi)。痰液

以清晨采集為佳，病人用清水充分漱口后，用力自氣管深處咳出痰液，吐至無菌容器中，加蓋，標識，塑料袋密封，冷藏條件下送檢。下呼吸道樣本（適用于氣管插管病人）

只采集重癥病人，無時間限制。收集氣管吸取液或支氣管灌洗液5-10mL放入無菌、帶墊圈的50mL螺口塑料管中。基本原則采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本皰疹液、瘀點瘀斑

先用75％灑精對皰疹、瘀點或瘀斑周圍皮膚進行消毒，待皮膚干燥后，用消毒針將皰疹、瘀點或瘀斑挑破用棉簽蘸取液體，迅速將棉簽放入內(nèi)裝3-5mL保存液的采樣管中（或直接涂片），在靠近頂端處折斷棉簽，旋緊管蓋?？赏瑫r采集多外皰疹液作為一份樣本。注明患者的姓名、樣本的種類、采樣時間、采樣人等基本信息?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本糞便樣本應(yīng)在發(fā)病早期（3天以內(nèi)）并且盡量在用抗生素治療前采集，可以提高檢出率（注：無論病人是否已經(jīng)服藥，均應(yīng)進行大便采集。對氨苯甲酸可中和磺胺類抗生素。硫酸鎂可中和四環(huán)素、土霉素、新霉素、多粘菌素、鏈霉素等抗生素）糞便樣本中含有很多雜菌，但也應(yīng)該在樣本采集過程中注意無菌操作，防止雜菌污染。為提高檢出率，最好采集新鮮糞便，采集膿血便或粘液便，陳舊樣本影響檢出率。液狀糞便采集水樣便或含絮狀物的液狀糞便2-5mL；成形糞便至少取蠶豆大小糞便1塊（約5g）放于無菌采便管內(nèi)，采樣時注意勿將尿液或水混入糞便容器內(nèi)，采樣后盡快塞緊或旋緊容器?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本肛拭子樣本

若無法獲得糞便時，可用專用棉簽用保存液或增菌液濕潤過后插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm）輕輕轉(zhuǎn)動一圈，取直腸表面的黏液后取出，迅速放入運送培養(yǎng)基或保存液中送檢，為保證多個檢驗項目的開展，同一患者至少采集2支肛拭?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本尸檢樣本

應(yīng)于死后盡可能早地?zé)o菌采取，放于無菌容器內(nèi)，不要使用防腐劑；對于各種器官樣本，解剖器材和盛裝容器要分開。采集腦、肝、肺和腸淋巴結(jié)等重要組織樣本，每一采集部位分別使用單獨的消毒器械。每種組織應(yīng)多部位取材，每部位應(yīng)取2-3份約5-10g的組織，淋巴結(jié)2個，分別置于15-50mL無菌的有外螺旋蓋的凍存管中，采樣管外貼上標簽，注明患者的姓名、樣本種類、采樣時間采樣人等基本信息?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本腦脊液樣本當患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀時，可采集腦脊液樣本，進行病原分離或核酸，抗體檢測。采集時間為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后3天內(nèi)，采集方法采用腰椎穿刺，采集量至少1mL，盡可能3~5mL。采集后立即裝入無菌帶墊圈的凍存管中，腦膜炎奈瑟菌離體后會迅速自溶，肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡，因此，樣本應(yīng)立即送檢并注意保溫、防干燥，切不可置冰箱保存。采樣管外貼上標簽，注明患者的姓名、樣本種類、采樣時間采樣人等基本信息。當患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀時采集，檢測IgM只需一份腦脊液。而檢測IgG則需收集兩次，分別于發(fā)病初期和恢復(fù)期采集?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本血液樣本于患者發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集，并應(yīng)盡量在抗菌藥物治療之前。如患者已用藥，則應(yīng)在下次給藥前采集做血液病原培養(yǎng)時，嚴格用無菌穿刺法采肘靜脈血，移入無菌的有螺口的抗凝的容器或血培養(yǎng)瓶中送檢，或直接接種血平皿。血培養(yǎng)瓶接種比例一般按1:5-1:10，目的是稀釋血液中的抗菌藥物等殺菌物質(zhì)。每例間隔0.5-1h采血兩次，可提高陽性率和區(qū)分感染菌與皮膚污染菌?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本血清需采集多份血清樣本，至少急性期（發(fā)病7d內(nèi)或發(fā)現(xiàn)時，主要用檢測IgM和IgG）和恢復(fù)期（與急性期間隔2-4周，主要用于檢測IgG）分別采集外周靜脈血各5-6mL，分離后的血清分裝于3個塑料螺口血清管中（每份0.5mL左右，一份用于檢測，一份檢測備份、一份留存），貼上標簽注明相關(guān)信息。靜脈采血時部位的局部皮膚應(yīng)嚴格消毒，采血針頭的內(nèi)徑適當，采血針頭太細，將損傷紅細胞，造成溶血。采血時，穿刺靜脈的速度要快，而抽取血液時速度要適度，不能用力過猛。抽完后應(yīng)卸下針頭，將血液沿管壁緩慢注入試管內(nèi)。如有抗凝劑，應(yīng)緩慢將血液與抗凝劑輕輕搖動混勻。切忌在靜脈注射處采取血樣本。一般抽血時用7號針頭；采血量大時，用8號針頭?；驹瓌t采集條件采集要求采樣時間樣本種類樣本數(shù)量采集方法采集保存運輸病原微生物樣本病原微生物樣本的保存取決于運送時間的長短及不同病原微生物對干燥、溫度、營養(yǎng)、pH值的耐受能力等。要能確保目標病原微生物的存活并抑制其它微生物的過度生長，應(yīng)選擇合適的培養(yǎng)基和保存溫度。采集總體要求保存運輸檢測抗體的血清樣本可在4℃保存約一個星期，超過一個星期必須在-20℃下冷凍保存。用于檢測抗原或抗體的其它樣本可以4-8℃保存24-28h，在-20℃可保存時間更長。注意全血/血細胞的樣本不可冷凍運輸。要求低溫快速送檢。4℃暫存立即（12h內(nèi)）送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的樣本存于－70℃冰箱，防止核酸降解。免疫樣本核酸樣本病原微生物樣本用于分離培養(yǎng)細菌的樣本應(yīng)在運送培養(yǎng)基中運送并保存于合適的溫度。分離不同的病原菌使用的運送培養(yǎng)基也不同，一般冷藏運送（奈瑟菌屬、流感嗜血桿菌應(yīng)在20-36℃保溫運送）。采集細菌樣本保存運輸用于分離病毒的樣本，一般應(yīng)放在保溫容器（4℃）里，最好12h內(nèi)送達實驗室，最長不可超過24h，如不能立即分離病毒時，應(yīng)將樣本-20℃冷凍暫時保存。若長期儲存，應(yīng)在-70℃以下凍存。采集病毒拭子推薦使用滅菌人造纖維拭子（如聚丙烯纖維）和塑料棒注意：采集咽拭子或肛拭子等用于檢測核酸時不能使用棉拭子和木質(zhì)拭子棒，因為這類材料中含有核酸擴增抑制劑病毒采樣液推薦使用：病毒保存液（含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、阻止細菌和真菌生長抗生素、緩沖液）目前市場有專用的病毒采樣試劑盒賣病毒樣本采集保存運輸病原微生物樣本樣本必須放在大小合適的帶螺旋蓋、內(nèi)有橡圈的塑料管里檸緊在塑料管上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、姓名等將密閉后的樣本放入大小適合的塑料袋里密封，每袋裝一份樣本。同一患者兩分以上樣本，可放在同一個塑料袋內(nèi)再次密封填寫樣本送檢登記表（應(yīng)包括的基本信息：姓名、性別、年齡、職業(yè)、現(xiàn)住址、發(fā)病日期、樣本種類、采集日期、一般臨床癥狀等），連同塑料管用另一塑料袋密封。將裝樣本的密封袋放入專用運輸箱內(nèi)，放入冰排用具有吸水和緩沖能力的材料填充所有容器必須印有生物危險標識運輸，并在外包裝上有標簽標明寄送人和接收人的詳細聯(lián)系方式、包括日期和運輸日期等樣本應(yīng)在帶有冰袋或者冰排的專用運輸箱中運輸為維持4-8℃條件，運輸箱中可填充冰袋或冰排；為保證-20℃條件，在運輸箱中裝干冰，但需確保二氧化碳能釋放以防爆炸；為保證-70℃條件，可采用液氮來儲存和運送樣本運送要求專人（最好2人）專車總

體

要

求采集保存運輸病原微生物樣本根據(jù)其所運輸病原體的傳染性和感染后對個體或群體的危害程度不同，分為A類和B類。A類指人感染后發(fā)病的可能性大，傳染性強，對人群危害性大的烈性感染性物質(zhì)。高度懷疑具有嚴重危害性的感染性物質(zhì)也屬于A類。A類之外，僅具有一般危險性，引起感染的機會較少的感染性物質(zhì)為B類聯(lián)合國對感染性物質(zhì)的運輸分類采集保存運輸病原微生物樣本感染性及潛在感染性物質(zhì)的運輸應(yīng)使用三層包裝系統(tǒng)：內(nèi)層容器、中層包裝、外層包裝將樣品采用防水、防漏的內(nèi)層容器包裝并貼上指示內(nèi)容物的標簽后裝入中層容器內(nèi)層容器和中層容器間應(yīng)放置足量的吸水性材料，以便內(nèi)層容器打破或泄漏時能吸收溢出的所有液體。然后將中層容器固定在硬質(zhì)外層容器中以免中層容器在運輸過程中受到物理性損壞。感染性物質(zhì)運輸?shù)陌b系統(tǒng)采集保存運輸病原微生物樣本報衛(wèi)生主管部門批準安排運送日期，安排日期確定后，通知接收實驗室。（跨省：出發(fā)地初審，報國務(wù)院衛(wèi)生部/獸醫(yī)主管部門批準）樣本運送的時間和運輸方法

《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《人間傳染的病原微生物名錄》

《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）或樣本運輸管理規(guī)定》